弓形虫ChineseⅠ型虫株试验感染仔猪组织病理学观察及虫体动态分布

为研究弓形虫ChineseⅠ型虫株感染仔猪的组织病理变化及虫体动态分布,本研究将YZ-1株速殖子通过静脉注射的方法感染仔猪,于感染后第10、25、50、80天,采集不同组织脏器,制作组织病理切片观察病理变化,并提取各组织器官的基因组DNA分别进行弓形虫529 bp重复序列及B1基因的PCR检测。结果显示,弓形虫急性感染可引起仔猪发病和死亡,病变主要发生在肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结等组织,慢性感染病变则主要表现在脑和肺脏;弓形虫感染后第10天,感染仔猪21个主要组织脏器均能检测到弓形虫特异性基因,随着感染时间的延长,虫体分布的组织数量逐渐减少,其中脑、肺脏和肾脏持续时间最长,显示为弓形虫最主要的靶器官,至感染后第80天,所有组织脏器均未再检测到弓形虫特异性基因。研究结果揭示了弓形虫ChineseⅠ型株诱导仔猪的组织病理学特征及虫体动态分布,为猪弓形虫病的临床病理和分子诊断提供了理论依据。

不同基因型弓形虫GRA7重组蛋白的抗原性鉴定及交叉反应原性分析

弓形虫是一种严重危害公共卫生安全的人兽共患寄生原虫。前期研究发现,相对于弓形虫Ⅰ型株(RH株),ChineseⅠ型株(YZ-2株)GRA7蛋白因缺失1个谷氨酸而形成新的抗原表位,但该表位对GRA7蛋白免疫学功能的影响尚不清楚。分别对弓形虫RH和YZ-2株GRA7基因进行PCR扩增,构建原核表达载体RH-pET30a(+)-GRA7和YZ-2-pET30a(+)-GRA7,并进行体外诱导表达;Western blot分析2种重组蛋白的抗原性及交叉反应原性。结果表明:GRA7基因PCR产物大小630~633 bp;体外诱导表达产物大小约37 ku;2种重组蛋白均能被抗His标签单克隆抗体、GRA7重组蛋白制备的鼠多克隆抗体以及弓形虫速殖子可溶性抗原制备的鼠多克隆抗体所识别;同时,用重组蛋白制备的多克隆抗体可交叉识别2种基因型虫体内的GRA7天然蛋白。Ⅰ型和ChineseⅠ型虫株的GRA7蛋白具有良好的交叉反应原性,该结果为进一步探索弓形虫GRA7蛋白的功能及其抗感染免疫保护作用的研究奠定基础。