可溶性猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取与鉴定

目的从猪膝关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定。方法选择猪膝关节软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶两步消化、氯化钠盐析、超纯水透析、离心浓缩等方法提取纯化Ⅱ型胶原蛋白;采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定;利用冻干的方法计算提取的浓度。结果 SDS-PAGE电泳结果显示提取的Ⅱ型胶原蛋白分子量约120 kD;氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高,并且可以检出羟脯氨酸、羟赖氨酸,符合Ⅱ型胶原特征;该法提取的Ⅱ型胶原蛋白浓度为66 mg/mL。结论从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,方法简便,提取的胶原蛋白浓度更高。

壳聚糖凝胶(Ⅱ型)应用于肛周脓肿术后切口的疗效研究

目的:探讨壳聚糖凝胶应用于肛周脓肿术后切口的临床效果。方法:收治肛周脓肿患者62例,均行一次性根治手术,随机分为观察组和对照组,观察组术后予壳聚糖凝胶纱条切口引流,对照组术后予凡士林纱条切口引流。结果:观察组术后切口愈合时间明显缩短。结论:壳聚糖凝胶有明显促进肛周脓肿术后切口愈合的效果。

壳聚糖-果胶凝胶珠吸附剂的改性及其去除藻蓝蛋白中Pb(Ⅱ)的应用

壳聚糖-果胶凝胶珠(Chitosan-pectin gel beads,CPB)吸附去除食品中重金属具有较高的潜力,为提高其稳定性、再生利用性及吸附能力,本文采用明胶(Gel)和羧甲基纤维素钠(CMC)对CPB进行改性,利用扫描电镜(SEM)、比表面积与孔隙度分析(BET)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、热重分析(TG)、Zeta电位仪、X射线光电子能谱(XPS)及等技术表征其结构特性,优化吸附解析条件,并评估其对藻蓝蛋白中Pb(Ⅱ)的实际去除效果。结果显示,与CPB和Gel-CPB相比,CMC改性的CPB(CMC-CPB)热稳定性高、表面粗糙多孔、比表面积大(20.28±1.35 m^(2)/g)及Zeta电位低,对金属离子吸附能力强,且解析再生利用率高。FTIR图谱分析显示改性前后CPB官能团结构未发生明显变化,其主要结构官能团为羧基、羟基和氨基。TG分析表明改性前后的CMC-CPB的热稳定性显著高于CPB和Gel-CPB(P<0.05)。XPS光谱分析表明三种吸附剂成功吸附了Pb(Ⅱ),其中CMC-CPB对Pb(Ⅱ)的吸收峰最强。三种吸附剂(CPB、Gel-CPB和CMC-CPB)去除Pb(Ⅱ)的最佳pH和温度分别为6.0和60℃,对Pb(Ⅱ)的吸附过程均符合Langmuir吸附等温模型(R^(2)=0.9543~0.9811)和准二级动力学模型(R^(2)=0.9963~0.9991),该吸附属于单分子层化学吸附,即-COO、-OH、-CO-NH与Pb(Ⅱ)之间的络合作用。根据Langmuir模型曲线评估,CMC-CPB对Pb(Ⅱ)的最大吸附容量q_(max)为69.37 mg/g,显著高于Gel-CPB和CPB(P<0.05)。综合在藻蓝蛋白中的应用效果,CMC-CPB低成本高效安全地去除藻类和藻蓝蛋白食品中Pb(Ⅱ)具有更广阔的前景。

Development and potential of a biomimetic chitosan/type Ⅱ collagen scaffold for cartilage tissue engineering

Damaged articular cartilage has very limited capacity for spontaneous healing. Tissue engineering provides a new hope for functional cartilage repair. Creation of an appropriate cell carrier is one of the critical steps for successful tissue engineering. With the supposition that a biomimetic construct might promise to generate better effects, we developed a novel composite scaffold and investigated its potential for cartilage tissue engineering.

诱导小鼠淋巴细胞表达γ-干扰素的血吸虫成虫可溶性抗原组分

目的 分离纯化日本血吸虫成虫可溶性抗原（soluble adult worm antigens，SAWA）各个组分，并分别鉴定其诱导小鼠脾淋巴细胞表达γ-干扰素（IFN-γ）的能力。方法 常规制备血吸虫SAWA，经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）层析法分离、收集并透析纯化各抗原组分，SDS—PAGE检测分析其含量及相对分子质量（Mr）。常规制备感染42d小鼠脾淋巴细胞悬液，设立PBS阴性对照组及各组分抗原实验组，分别刺激体外培养的感染小鼠脾淋巴细胞，诱生IFN-γ，用双抗夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组IFN-γ水平，筛选出能诱导IFN-γ高表达的抗原组分。结果 获得20种胁不同且含量较高的SAWA组分抗原，Mr（×10^3）分别为22，23、24、28、40、45、56、62、64、65、68、70、71、74、78、91、95、100、102、105，其电泳图谱均显示为清晰的单一带。各组分抗原均能不同程度地诱导IFN-γ表达，其中Mr（×10^3）为22、24、45、62、64、65的组分抗原诱导IFN-γ的表达量较高，尤其是62×103组分抗原诱导表达IFN-γ水平显著高于其他实验组（P＜0．01）。结论 电泳层析法能很好地将日本血吸虫成虫可溶性抗原分成多个组分：62×10^3组分抗原具有诱导小鼠脾淋巴细胞高表达IFN-γ的能力，推测它可能是一个很强的Th1型淋巴细胞活性诱导分子。

凝胶包埋骨髓基质干细胞复合脱钙骨基质修复关节软骨缺损

目的探索Ⅱ型胶原凝胶包埋的自体骨髓基质干细胞（BMSCs）接于同种异体脱钙骨基质（DBM）材料修复兔关节软骨缺损的效果。方法15只健康成年新西兰大白兔，雌雄不限，体质量约3．0kg，兔龄6。9个月；以Urist方法制作同种异体DBM材料。以Ⅱ型胶原蛋白配制水凝胶．以水凝胶包埋兔BMSCs并接种于同种异体DBM材料，构建组织工程复合物。在新西兰大白兔股骨髁关节面制造软骨缺损。分组进行修复。将健康成年新西兰大白兔27只（雌雄不限，体质量约2．5kg．兔龄3～4个月）共54侧膝关节随机分为Ⅱ型胶原／DBM／BMSCs修复组（实验组）、Ⅱ型胶原／DBM修复组（实验对照组）及空白对照组。于术后4周、8周及12周各处死9只动物，取材对修复组织进行大体及组织学观察，根据Wakitani法对修复组织进行评分．数据输入SPSS11．5软件进行统计学分析，比较各组的评分差异是否具有统计学意义。结果实验组Ⅱ型胶原／DBM／BMSCs植入后形成透明软骨样修复．表面光滑平坦，与周围软骨及软骨下骨结合良好；实验对照组Ⅱ型胶原／DBM植入后有部分软骨样修复：而空白对照组仅有少量纤维性修复。根据组织学评分标准，实验组组织学评分为（20．25±1．64）分，高于实验对照组[（7．46±1．29）分]及空白对照组[（6．00±2．09）分]。结论Ⅱ型胶原自体BMSCs复合同种异体DBM支架材料修复全层关节软骨缺损的效果良好，是一种修复软骨缺损的行之有效的方法。

大黄素温敏凝胶对慢性牙周炎患者龈沟液Ⅱ型胶原酶活性的影响

目的，探讨牙周炎患者局部应用大黄素温敏凝胶对其龈沟液中Ⅱ型胶原酶（COL-Ⅱ）活性的影响及其临床疗效。方法选取40例慢性牙周炎患者，采用同一口腔内病情相同牙齿的自身对照研究设计，分为观察组40个牙和对照组40个牙．在基线前须完成全口龈上洁治及口腔卫生宣教，基线时试验牙取龈沟液洋本（测定胶原酶），记录菌斑指数、探诊深度、附着丧失和齿沟出血指数及牙齿松动度，然后行龈下刮治术，用药侧每周放1次药，共4次，对照侧按常规治疗。分别于治疗前及治疗后4周收集患牙的龈沟液并记录相关临床指标。采用双抗体夹心酶联免疫法检测龈沟液中COL-Ⅱ活性。结果两组治疗前COL-Ⅱ水平及牙菌斑指数、齿沟出血指数、牙周袋深度、牙周附着水平、牙齿松动度等差异均无统计学意义（均P〉0．05）；治疗1个疗程后，观察组龈沟液中COL-Ⅱ水平及牙菌斑指数、齿沟出。血指数、牙周袋深度、牙周附着水平、牙齿松动度与对照组差异均有统计学意义（t=3．46、4．02、4．18、3．03、2．79、4．29．均P〈0．05）。结论应用大黄素温敏凝胶作为牙周炎基础治疗的辅助疗法，能有效降低龈沟液中Ⅱ型胶原酶活性，从而有效阻止牙周组织的破坏。