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Biological Effects of Chlamydiaphage phi CPG1 Capsid Protein Vp1 on Chlamydia Trachomatis In Vitro and In Vivo
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作者 王生 郭睿 +5 位作者 郭媛丽 邵丽丽 刘洋 魏世娟 刘原君 刘全忠 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2017年第1期115-121,共7页
The researches on chlamydia in recent years show that chlamydia bacteriophage may be a potential and effective means to solve the clinical infection of chlamydia trachomatis(Ct). We investigated the biological effec... The researches on chlamydia in recent years show that chlamydia bacteriophage may be a potential and effective means to solve the clinical infection of chlamydia trachomatis(Ct). We investigated the biological effect of chlamydiaphage phi CPG1 capsid protein Vp1 on Ct both in Mc Coy cells and genital tract of mice. Different concentrations of Vp1 were co-incubated with Ct E serotype strain in Mc Coy cells. Female BALB/c mice were used to establish Ct E strain-induced urogenital infection model. They were randomly divided into five groups and given different treatments on the fifth day after Ct inoculation. Animals in groups 1 and 2 were given 30 μL different concentrations of Vp1 in the genital tract respectively, those in group 3 were intramuscularly injected with 30 μL Vp1, those in the infected group did not receive any intervention, and those in the control group received 30 μL PBS in the genital tract. The vaginal discharge was collected to identify the live chlamydia by cell culture and gene fragment by real time PCR different days after infection. Inhibition rate of 100 μg/m L and 50 μg/m L Vp1 proteins against Ct E strain in the Mc Coy cell cultures was 91% and 79% respectively. The number of intracellular Ct inclusion in the Mc Coy cells co-cultured with vaginal discharge of group 1 and group 2 was less than in the infected group, and that in group 1 was less than in group 2, on the 7th day after Ct inoculation. Real-time PCR showed that chlamydia concentration of the vaginal discharge in group 2 was lower than in the infected group, and that in group 1 was lower than in group 2 on the 10 th day. It was suggested that Vp1 capsid proteins had inhibitory effect on the proliferation of Ct serovar E strain in cell culture and mouse genital tract. 展开更多
关键词 chlamydia trachomatis trachoma mice phage Vp1 protein
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从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位 被引量:1
2
作者 张浩杰 端青 《微生物学免疫学进展》 2002年第2期29-31,共3页
利用抗体捕获法 ,经三轮淘洗 ,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆 ,其一致序列为 :(L/I)PGGS(P/W ) ,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此 ,我们认为此序列为衣... 利用抗体捕获法 ,经三轮淘洗 ,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆 ,其一致序列为 :(L/I)PGGS(P/W ) ,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此 ,我们认为此序列为衣原体的B细胞抗原表位。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示 随机肽库 衣原体 B细胞抗原表位
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豚鼠结膜炎衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp3的克隆、表达和鉴定 被引量:1
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作者 刘原君 姚卫锋 +3 位作者 侯淑萍 齐蔓莉 王惠平 刘全忠 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期712-715,共4页
目的获得豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体~CPGl衣壳蛋白Vp3基因及其蛋白。方法提取φCPG1及其核酸,PCR扩增Vp3基因,双酶切后将其定位插入原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒,转化人大肠埃希菌BL-21,并酶切分析、PCR扩增... 目的获得豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体~CPGl衣壳蛋白Vp3基因及其蛋白。方法提取φCPG1及其核酸,PCR扩增Vp3基因,双酶切后将其定位插入原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒,转化人大肠埃希菌BL-21,并酶切分析、PCR扩增及测序鉴定,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western印迹鉴定,胶回收纯化。结果获得的Vp3基因片段经测序,长度为447bp,检索确认其序列与GenBank一致。对重组质粒进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹均显示获得相对分子质量约25000的GPIC噬菌体φCPC1衣壳蛋白Vp3,并得到了纯化蛋白。结论成功表达了噬菌体φCPG1衣壳蛋白Vp3,为进一步研究其作用机制和临床应用奠定基础。 展开更多
关键词 衣原体 细菌噬菌体 衣壳蛋白质类 重组 遗传 基因表达 质粒
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沙眼衣原体类噬菌体衣壳蛋白CtF的表达及多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 王秋平 李琪 +4 位作者 欧瑶琪 朱冰玉 周鹏 陈丽丽 柏琴琴 《生物技术》 CAS 2018年第4期377-381,共5页
[目的]预测沙眼衣原中类噬菌体衣壳蛋白CtF的空间结构,表达重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用SOPMA和I-TASSER等软件预测CtF的空间结构,利用MEGA6分析其系统发育关系;构建重组质粒pET-28a-CtF,转化至E.coli BL21(DE3)中进行克隆表达... [目的]预测沙眼衣原中类噬菌体衣壳蛋白CtF的空间结构,表达重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用SOPMA和I-TASSER等软件预测CtF的空间结构,利用MEGA6分析其系统发育关系;构建重组质粒pET-28a-CtF,转化至E.coli BL21(DE3)中进行克隆表达;纯化重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体。[结果]CtF蛋白包含八股β桶状核心结构和环形延伸结构,与已知的衣原体噬菌体VP1蛋白遗传距离较近;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa的融合蛋白;免疫小鼠获得免疫血清效价达1∶12 800。[结论]CtF蛋白疑似为沙眼衣原体噬菌体的衣壳蛋白;重组质粒表达相对分子量约为64 kDa蛋白,该蛋白免疫原性良好,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 类噬菌体衣壳蛋白 生物信息分析 表达 多克隆抗体
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临床标本中沙眼衣原体噬菌体Vp1基因及血清Vp1抗体的检测 被引量:2
5
作者 李玲杰 刘原君 +5 位作者 姚卫锋 侯淑萍 尤聪 田敬群 冯斌 刘全忠 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期315-317,共3页
目的检测临床标本中沙眼衣原体噬菌体Vp1基因及血清Vp1抗体。方法收集天津性传播疾病研究所就诊患者的分泌物拭子和血清;用PCR法筛查分泌物标本中的Vp1基因;以Vp1蛋白作为抗原通过ELISA法及Western印迹法检测血清中针对Vp1抗体的存在... 目的检测临床标本中沙眼衣原体噬菌体Vp1基因及血清Vp1抗体。方法收集天津性传播疾病研究所就诊患者的分泌物拭子和血清;用PCR法筛查分泌物标本中的Vp1基因;以Vp1蛋白作为抗原通过ELISA法及Western印迹法检测血清中针对Vp1抗体的存在;对PCR法结果阳性的分泌物进行细胞培养,然后免疫荧光法进行检测Vp1。结果共筛查出36例拭子的PCR扩增产物在目的片段位置出现明显条带,及23例Vp1抗体阳性的血清。通过细胞培养及免疫荧光法,利用制备的单抗检测沙眼衣原体临床标本,尚未发现阳性标本。结论从临床拭子及血清中成功筛查出沙眼衣原体噬菌体Vp1基因和Vp1抗体。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 噬菌体 VP1蛋白
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VP1Cm—一种对沙眼衣原体高效抑制蛋白的构建 被引量:1
6
作者 陈晗 赵乐然 +3 位作者 尤聪 孔杰 邵丽丽 刘全忠 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1012-1017,共6页
目的设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法。方法通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列。应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a(+)并转化至大... 目的设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法。方法通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列。应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a(+)并转化至大肠杆菌中。用带Ni^+的亲和树脂纯化蛋白,梯度透析复性蛋白。CCK8法测定重组蛋白对Hela细胞的毒性作用。将豚鼠嗜衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、杆菌肽和磷酸盐缓冲溶液(PBS)分别与E型Ct标准株于室温下预孵育3 h后接种至Hela细胞,同时设置Ct感染对照组。48 h后免疫荧光染色计数包涵体。多组样本均数间比较用单因素ANOVA分析,两样本均数间比较用Bonferroni检验。结果成功表达并纯化出蛋白VP1Cm。在相同浓度时,PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm对Ct的抑制率分别为76.20%、85.13%和90.01%。结论经设计过的蛋白VP1Cm对Ct的抑制效果优于PhiCPG1衣壳蛋白VP1及其功能结构域截短蛋白VP1C。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 衣原体噬菌体 PhiCPG1 VP1
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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1对豚鼠结膜炎衣原体及E型沙眼衣原体的抑制作用 被引量:2
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作者 孙长贵 周全 +3 位作者 马璟玥 郭媛丽 刘原君 刘全忠 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期329-333,共5页
目的探讨豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体衣壳蛋白Vp1对GPIC及E型沙眼衣原体的抑制作用,为沙眼衣原体感染的治疗提供新的思路。方法用Vp1—pET30a(+)重组质粒菌表达Vp1蛋白,Western印迹法鉴定蛋白,透析袋纯化蛋白,BCA法测定蛋白... 目的探讨豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体衣壳蛋白Vp1对GPIC及E型沙眼衣原体的抑制作用,为沙眼衣原体感染的治疗提供新的思路。方法用Vp1—pET30a(+)重组质粒菌表达Vp1蛋白,Western印迹法鉴定蛋白,透析袋纯化蛋白,BCA法测定蛋白浓度,将GPIC、E型沙眼衣原体分别与Vp1蛋白、%s甘氨酸溶液、s蛋白及培养液室温孵育3h,衣原体培养过程中分别加入相同浓度的上述液体,72h或48h后,免疫荧光计数包涵体数。结果GPIC在Vp1蛋白组、Tris甘氨酸溶液组、S蛋白组及培养液组培养72h,包涵体计数分别为5.0±1.5、24±1.2、25±1.7及25±1.5,各组包涵体数比较,差异有统计学意义(F=476.632,P〈0.05)。Vp1蛋白组GPIC包涵体数显著低于Tris甘氨酸溶液组、s蛋白组及培养液组(P〈0.05),而后3组之间差异无统计学意义(P〉0.05)。与阴性对照组(培养液组)相比,Vp1蛋白对GPIC的抑制率为(80.2±3.99)%。此外,Vp1蛋白对E型沙眼衣原体的抑制率为(77.2±1.79)%,t检验示Vp1对GPIC的作用与对E型沙眼衣原体的作用差异无统计学意义(t=2.057,P〉0.05)。结论Vp1蛋白可明显抑制GPIC的感染,同时对E型沙眼衣原体有相似的抑制作用。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 鼠衣原体 衣壳蛋白质类 噬菌体 VP1蛋白
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M13-IN5重组噬菌体对沙眼衣原体的抑制机制
8
作者 王江懿 尤聪 +5 位作者 赵乐然 王梅 魏世娟 练婷婷 邵丽丽 刘全忠 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期877-883,共7页
目的探索重组M13-IN5噬菌体抑制沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)生长作用的机制。方法通过噬菌斑法测定M13-IN5噬菌体的滴度;CCK-8法检测M13-IN5噬菌体和青霉素对HeLa细胞的毒性作用;将不同滴度的M13-IN5噬菌体与50 U/mL的青霉素... 目的探索重组M13-IN5噬菌体抑制沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)生长作用的机制。方法通过噬菌斑法测定M13-IN5噬菌体的滴度;CCK-8法检测M13-IN5噬菌体和青霉素对HeLa细胞的毒性作用;将不同滴度的M13-IN5噬菌体与50 U/mL的青霉素作用于沙眼衣原体后,通过免疫荧光计数包涵体数量;将滴度为10^(7)pfu/mL M13-IN5噬菌体与50 U/mL的青霉素作用于沙眼衣原体后进行子代感染力实验;采用定量逆转录PCR检测两组干预后CT_046、CT_111、CT_395、CT_443、CT_666、CT_823基因的转录变化,未干预沙眼衣原体感染组为阳性对照。两样本均数间比较采用t检验,多组样本均数间比较采用单因素ANOVA方法,多个样本间两两比较采用Bonferroni校正。结果滴度≤10^(9)pfu/mL的M13-IN5噬菌体以及50 U/mL的青霉素对HeLa细胞无毒性作用,10^(7)pfu/mL M13-IN5噬菌体与50 U/mL青霉素干预后,48 h形成的包涵体数量无明显区别,抑制率分别为19.62%和21.09%(P>0.05);M13-IN5噬菌体组干预形成的子代包涵体数量较青霉素干预组减少20.26%(P<0.05)。CT_046、CT_443在两个干预组转录水平均下降,M13-IN5噬菌体组较青霉素组下降明显(P<0.05);M13-IN5噬菌体干预组CT_666转录水平下降(P<0.05),青霉素干预组无变化(P>0.05);青霉素干预组压力应答基因CT_111、CT_395、CT_823转录水平增高(P<0.05),M13-IN5噬菌体干预组以上基因转录水平无变化(P>0.05)。结论重组M13-IN5噬菌体对沙眼衣原体的抑制作用强于青霉素,CT_046、CT_443、CT_666基因是重组噬菌体抑制沙眼衣原体生长的作用靶点。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 M13噬菌体 IN5 青霉素
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