急性及己中毒的实验病理学研究

目的探讨及己对小鼠毒性作用的病理变化及其毒作用机制。方法应用及己水煎液对小鼠经口急性染毒,进行组织病理学观察血清生化、凝血机能检测。结果及己对小鼠的半数致死量(LD50)为41.12g/kg;染毒小鼠血清ALT和BUN升高;血液血小板计数减少、凝血时间延长;肝、脾、肾器官系数增大;肝、肾、心肌细胞变性、坏死明显,全身诸多器官淤血、出血性改变。结论及己毒作用的主要靶器官或靶组织是肝脏、肾脏、心脏和全身血管。毒作用机制是对线粒体、内质网等膜性结构及体内凝血机制的破坏。

瑶药四大天王挥发性成分的GC-MS分析

目的研究瑶药四大天王的挥发性成分。方法采用水蒸气蒸馏法提取四大天王挥发油,并用GC-MS进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构检索,应用色谱面积归一化法计算各成分的相对含量。结果从四大天王中检索出17种化学成分,其中相对百分含量大于5%的组分分别检定为α-荜澄茄烯、榄香醇、愈创木醇、α-古芸烯、喇叭茶烯。结论17种挥发性成分均为首次从该植物中得到,占挥发油气化产物的89%。

宽叶金粟兰及其近缘类群的修订

在标本室研究和野外考察的基础上 ,对宽叶金粟兰Chloranthushenryi及其近缘种进行了分类学修订。确认了宽叶金粟兰、及己C .serratus、华南金粟兰C .sessilifolius和台湾金粟兰C .oldhami,将单穗金粟兰C .monostachys、湖北金粟兰C .hupehensis、C .philippinensis、C .verticillatus和台湾及己C .serratusvar.taiwanensis处理为新异名。通过研究合模式及有关照片 ,指定了宽叶金粟兰、多穗金粟兰C .multi stachys和湖北金粟兰的后选模式。

不同插穗部位与长度对珠兰花扦插成活的影响

通过研究不同部位与长度插穗对珠兰花扦插苗的影响,为珠兰花扦插繁殖提供依据。插穗取材部位分别选取顶部、中部和基部,比较其对扦插苗成活率、主根长、节点气根数、节点根鲜重、节点根干重、皮下气根数、皮下根鲜重、皮下根干重、茎长、茎鲜重、茎干重、叶片数、叶鲜重、叶干重指标的影响;插穗长度分别选取3 cm、6 cm、9 cm、12 cm,比较其对扦插苗成活率、主根长、须根数、根鲜重、根干重、叶片数、叶鲜重、叶干重指标的影响。结果表明:顶部插穗扦插苗生长效果明显优于基部,各指标也大于中部;长插穗(9 cm、12 cm)各指标显著优于短插穗(3 cm、6 cm),而12 cm插穗各指标优于9 cm插穗。综合得出珠兰花枝条顶部长度为12 cm的插穗是繁殖珠兰花扦插苗的最佳选择。

及己根倍半萜类化学成分研究

目的：研究及己根的倍半萜类化学成分。方法：利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱和制备液相等色谱技术进行分离纯化,并应用核磁共振等波谱技术进行化合物的结构鉴定。结果：从及己根中分离鉴定了10个倍半萜类化合物,分别为：1β,8β-dihydroxy-eudesman-4（15）,7（11）-dien-8α,12-olide（Ⅰ）、curcolonol（Ⅱ）、4β,8β-dihydroxy-5α（H）-eudesm-7（11）-en-8,12-olide（Ⅲ）、1β,8β-dihydroxy-eudesman-3,7（11）-dien-8α,12-olide（Ⅳ）、multistalactone E（Ⅴ）、zedoarofuran（Ⅵ）、8β,9α-dihydroxylindan-4（5）,7（11）-dien-8α,12-olide（Ⅶ）、serralactone A（Ⅷ）、8-epi-ivangustin（Ⅸ）、金粟兰内酯E（Ⅹ）。结论：其中,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ~Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ为首次从该植物中分离得到。

及己根、茎、叶醇提取物的心脏毒性和毒性机制

目的比较及己根、茎、叶醇提取物对大鼠心脏毒性的差异,初步探讨其毒性机制。方法将大鼠随机分成空白组、根醇组、茎醇组和叶醇组,每组8只。连续灌胃给药14d后,绘制体质量变化曲线,计算心脏系数,检测各组大鼠血清中肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和α-羟丁酸脱氢酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBDH)的含量及心脏组织中氧化应激指标[总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)]的含量变化,观察各组大鼠心脏的组织病理学改变,检测心肌组织中细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达。结果体质量增长率为茎醇组最小,其次为叶醇组。心脏系数在各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。茎醇组心肌组织损伤程度最严重,其次为叶醇组。茎醇组CK、CK-MB、LDH、α-HBDH含量均升高(P<0.05)。与空白组和根醇组相比,茎醇组MDA含量升高,T-SOD含量降低,叶醇组仅T-SOD含量较空白组降低(P<0.05)。不同提取物干预后,ICAM-1阳性表达均增强,HO-1蛋白表达均降低,变化趋势为茎醇组>叶醇组>根醇组。结论及己茎醇提取物的心脏毒性最大,其次为叶醇提取物,其毒性机制可能与氧化应激有关。

珠兰鲜叶提取液对白菜种子萌发的化感效应

为探究珠兰鲜叶中化感物质的化感效应,通过室内生物测定方法,以白菜种子为对象,研究珠兰鲜叶甲醇、乙醚、乙酸乙酯溶剂不同浓度提取液(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g·mL-1)对白菜种子发芽率、发芽势及幼苗根长、茎长、鲜重等生长指标影响。分析表明:不同浓度梯度的三种有机溶剂提取液对白菜种子发芽情况及幼苗生长均表现出不同的抑制作用。其中甲醇相态液浓度为0.2 g·mL^-1时对白菜种子发芽势发芽率及幼苗的根长茎长具极显著的抑制作用,对幼苗鲜重具显著抑制作用,且对发芽率、发芽势、根长、茎长、鲜重的抑制作用均随提取液浓度升高而增强。乙醚相态液浓度为0.4 g·m L^-1时对白菜种子发芽势发芽率及幼苗的鲜重具极显著的抑制作用,对幼苗根长具显著抑制作用,对白菜幼苗茎长抑制作用不显著,而对幼苗根长、茎长、鲜重的抑制作用在浓度为0.4 g·mL^-1和1.0 g·mL^-1时减弱,即乙醚相态液对幼苗茎长的抑制作用表现为上升的波状曲线。乙酸乙酯相态液浓度为0.4 g·mL^-1时对白菜种子幼苗发芽率、发芽势、幼苗根长、均有极显著的抑制作用,对幼苗鲜重具显著抑制作用,对白菜幼苗茎长抑制作用不显著,且对发芽率、发芽势、根长、茎长、鲜重的抑制作用均随提取液浓度升高而增强。

基于Nrf2/HO-1通路介导的及己根和雷公藤水提取物诱导的大鼠肺毒性比较研究

目的:探究雷公藤与及己根水提取物对大鼠肺的毒性大小及其机制.方法:24只雄性SD大鼠,随机等分为空白(KB)组、雷公藤水提取物(LS)组和及己根水提取物(GS)组.将雷公藤和及己根水提取物配成水溶液,每天灌胃给药1次,KB组给予等量蒸馏水,连续灌胃14天,称重,绘制体重变化率曲线,计算肺系数;检测肺组织匀浆中MDA、T-SOD、GSH和CAT水平;观察肺组织HE染色病理变化;Western-blot法检测肺组织中Nrf2、HO-1蛋白表达情况;利用免疫组化法检测ICAM-1阳性表达情况.结果:从体重变化曲线可知LS组体重增加最少;从肺系数可知LS组增加最多;从肺组织切片来看,LS组可见支气管呈锯齿状增生,支气管周围有大量以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,肺泡间质内大量充血且肺泡间隔有不同程度增生,部分支气管腔内有大量红细胞,有的视野肺组织实质化,可见淤血,淀粉样变性.GS组支气管周围有炎性细胞浸润,肺泡间质间偶见充血和增生等现象;从肺组织匀浆中的氧化指标来看,LS组MDA含量高于KB和GS组,T-SOD、GSH、CAT含量均低于KB和GS组;从免疫组化结果来看,LS组ICAM-1有显著性阳性表达,而GS组阳性表达不具有显著性;Western-blot结果显示,LS组Nrf2、HO-1蛋白含量极显著性降低,而GS组Nrf2、HO-1蛋白含量下降不明显.结论:LS、GS对大鼠肺均具有毒性作用且毒性LS>GS,其毒性机制可能与氧化应激及Nrf2/HO-1通路有关.

Nrf2/HO-1通路介导的及己根与雷公藤水提取物致大鼠心脏毒性的比较研究

目的:比较及己根与雷公藤水提取物致大鼠心脏毒性大小并探讨其毒性机制.方法:将30只SD雄性大鼠随机均分成空白(KB)组、及己根水提取物(GS)组、雷公藤水提取物(LS)组.GS组、LS组大鼠分别用及己根水提取物或雷公藤水提取物溶液灌胃,KB组大鼠给予等量蒸馏水,每天1次,连续灌胃14天.绘制体重变化曲线;计算心脏脏器指数;测定血清中CK、CK-MB、LDH、AST、α-HBDH含量及心脏匀浆中T-SOD和MDA含量;HE染色法观察各组大鼠心脏组织病理变化;免疫组化法检测心脏组织中ICAM-1阳性表达情况;蛋白免疫印迹法检测心脏组织中HO-1、Nrf2蛋白表达情况.结果:与KB组相比,GS组、LS组大鼠体重增长较KB组缓慢,且LS组大鼠实验后期体重出现负增长;GS组、LS组大鼠心脏脏器指数均升高,但仅LS组的升高具有显著性.与KB组和GS组相比,LS组CK、CK-MB、LDH、AST、α-HBDH、MDA、ICAM-1均明显升高,T-SOD及HO-1、Nrf2蛋白表达均极显著性降低.组织病理学结果显示,GS组存在少量炎性细胞浸润,而LS组观察到明显的血管扩张充血,心肌纤维排列紊乱,纤维间出血及部分细胞核固缩现象.结论:雷公藤水提取物引起的大鼠心脏毒性较大,其毒性机制可能与氧化应激及Nrf2/HO-1通路的抑制有关;及己根作为抗炎药有进一步的研究价值.

Nrf2/HO-1通路及氧化应激介导的及己地上部分醇提取物致大鼠肺毒性研究

目的:探索及己地上部分醇提取物对大鼠的肺毒性及其机制.方法:取24只雄性SD大鼠随机分为空白组(KB)、DC低组(50倍)以及DC高组(100倍).提取物组灌胃给予不同剂量及己地上部分醇提取物混悬液,KB组用同等剂量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,给药14天,计算大鼠体重变化率和肺脏器系数;检测肺匀浆中氧化应激指标含量;苏木精-伊红染色法考察肺组织病理变化;免疫组化法和Western blotting法分别检测ICAM-1阳性表达水平和Nrf2/HO-1蛋白表达情况.结果:与KB组相比,DC高组体重增长率较低.提取物组肺表面有明显出血点,且DC高组更明显.光镜下DC高组支气管炎性浸润较多,管壁纤维紊乱呈锯齿状增生,血管壁有纤维淀粉样变性和出血,DC高组症状较DC低组明显.与KB组相比,DC高组T-SOD、GSH和CAT水平显著性降低,MDA水平极显著性升高,DC低组氧化应激指标无统计学差异;提取物组ICAM-1阳性表达显著性增加,而Nrf2和HO-1蛋白表达量显著性下降,且DC高组较DC低组更明显.结论:及己地上部分醇提取物高剂量组致大鼠肺毒性大于低剂量组,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1通路及氧化应激有关.

珠兰花组织培养体系建立

珠兰花具有重要的观赏价值与药用价值,本试验以珠兰花茎段为外植体,选取不同外源激素配比处理茎段诱导丛生芽与不定根,探究丛生芽诱导分化与组培苗生根的最佳培养基,以期建立珠兰花快繁体系。在丛生芽诱导中,以MS为基本培养基,采用不同浓度6-BA(0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L)与NAA(0.5、1.0、1.5 mg/L)正交配比处理茎段诱导丛生芽;在生根诱导中,以MS与B5培养基为基本培养基,附加不同浓度的IBA(0.2、0.5、1.0 mg/L)或NAA (0.2、0.5、1.0 mg/L),并添加0.2%活性炭,诱导珠兰花茎段生根;组培苗高度到达2 cm以上时移栽至温室土壤中栽培,并喷施一定量的日本园艺均衡营养液保证其良好生长。结果表明:珠兰花丛生芽诱导分化的最优培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为71.7%,且丛生芽生长良好;诱导根效果以培养基配方为1/2MS+IBA 0.5 mg/L最好,诱导率为75%。

HPLC法测定及己不同部位伞形花内酯和异嗪皮啶的含量

目的采用HPLC-DAD法测定及己不同部位(根、茎、叶)伞形花内酯和异嗪皮啶的含量,为金粟兰科药材及己资源深入开发提供试验依据。方法色谱柱:Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)。流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B),进行梯度洗脱:0~5 min,10%~20%A;5~15 min,20%~30%A;15~30 min,30%~40%A;30~35 min,40%~55%A;35~45 min,55%~10%A。流速:1.0 ml/min。检测波长320 nm,柱温30℃,进样量20μl。结果伞形花内酯和异嗪皮啶分别在0.3281~10.50μg/ml(r=0.9995)和1.8840~60.30μg/ml(r=0.9996)范围内线性关系良好,伞形花内酯和异嗪皮啶平均回收率分别为99.16%(RSD=1.31%)、99.68%(RSD=1.46%)。及己不同部位伞形花内酯和异嗪皮啶的含量次序为:根>茎>叶。结论本方法简便、准确,重现性高,可为及己的质量控制提供依据。及己根、茎、叶中均含有伞形花内酯和异嗪皮啶,但不同部位的含量差异较大,其根中伞形花内酯和异嗪皮啶含量最高,具有较高的药用开发价值。

及己根、茎、叶醇提取物诱导肺毒性的比较研究

目的:探究及己根、茎、叶醇提取物诱导大鼠肺损伤的程度及机制。方法:将SD大鼠随机等分为正常(KB)组、根醇提取物(GC)组、茎醇提取物(JC)组和叶醇提取物(YC)组。计算大鼠体质量变化率和肺脏指数;观察肺组织病理学变化;检测肺组织中过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)阳性表达率及血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:第15天JC、YC组大鼠体质量增长率较GC组低,且大鼠肺表面出血点较明显。镜下见JC和YC组肺组织较GC组有大量炎细胞浸润、脂肪变态反应及淀粉样变性,且YC组肺间质实质化。与KB和GC组相比,MDA水平、ICAM-1阳性表达的升高和GSH、SOD、CAT水平及HO-1蛋白表达的降低仅在JC和YC组表现明显的统计学意义,且YC组更明显。结论:及己JC、YC提取物能通过氧化应激诱导较严重的大鼠肺损伤;其根醇提取物毒性较小,可作为新型抗炎药物进一步研究。

不同居群草珊瑚的ITS序列分析及模式识别研究

目的通过分析不同居群草珊瑚Sarcandra glabra和金粟兰属5种近缘植物的核糖体基因内部转录间隔区（rDNA-ITS）序列,为草珊瑚鉴定和品种鉴别提供模式识别与思路。方法采集不同产地的草珊瑚18份、金粟兰6份,所有样品提取总DNA,并对其ITS片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的其他4种金粟兰属植物的ITS序列,运用ClustalX 2.1软件比较不同产地草珊瑚与其他金粟兰属植物的ITS序列差异,并对其进行聚类分析。结果草珊瑚样品不同居群间的ITS序列相似度达99%,其中位点总突变率ITS1（2.7%）〉ITS2（1.4%）,而与金粟兰属其他植物相比,位点总突变率ITS2（20.3%-22.7%）〉ITS1（15.9%-18.3%）。聚类分析表明18个不同种群的草珊瑚居群间变异极小,且与金粟兰属5种近缘植物具有显著差异的聚类识别。结论草珊瑚ITS1与ITS2分别为不同居群间及与不同属近缘植物间比较有效的鉴别序列,具有较多个特异性信息位点的草珊瑚ITS序列用于鉴别金粟兰属5种近缘植物,具显著差异的聚类识别,是草珊瑚和金粟兰属近缘植物鉴定和品种鉴别的有效分子标记。

及己根的化学成分研究

目的对金粟兰属植物及己Chloranthus serratus根乙醇提取物的化学成分进行研究。方法利用多种色谱技术从及己根的氯仿萃取物中分离得到15个化合物。结果通过理化性质和波谱数据鉴定其结构为1α,9α-二羟基-8,12-环氧桉叶-4,7,11-三烯-6-酮（1）、1β,5α-愈创木-4β,10α-二醇-6-酮（2）、zedoalactone A（3）、multistalactone C（4）、1β,8β-二羟基-桉叶-3,7（11）-二烯-8α,12-内酯（5）、1β,8β-二羟基-桉叶-4（15）,7（11）-二烯-8α,12-内酯（6）、水合蒎醇（7）、伞形花内酯（8）、异嗪皮啶（9）、5-甲氧基-6,7-亚甲二氧基香豆素（10）、N-p-香豆酰酪胺（11）、N-反式-阿魏酰基酪胺（12）、N-顺式-阿魏酰基酪胺（13）、儿茶素（14）、7-羟基-5,8-二甲氧基二氢黄酮（15）。结论化合物2、5~7、10、14、15为首次从金粟兰属植物中分离得到,化合物1、3、4为首次从该植物中分离得到。

氧化应激反应介导的及己地上部分醇提物心脏毒性研究

目的:探讨及己地上部分醇提物心脏毒性及其毒性机制。方法:将30只大鼠随机等分为空白组、及己地上部分醇提取物1. 58g/kg(50倍量)组、3. 16g/kg(100倍量)组。将及己地上部分醇提取物用0. 5%CMC-Na溶液配成混悬液灌胃给药,空白组给予等体积0. 5%CMC-Na溶液。每天给药1次,连续给药14d,大鼠称重,绘制体重变化率曲线,计算心脏脏器指数,采用HE染色法观察各组大鼠心脏组织病理变化,检测各组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟基丁酸脱氢酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)及氧化应激指标总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测HO-1蛋白水平,免疫组化法(IHC)检测ICAM-1的阳性表达情况。结果:及己地上部分醇提物1. 58g/kg、3. 16g/kg组体重变化率明显低于空白组,1. 58g/kg组体重增长率明显大于3. 16g/kg,3. 16g/kg组心脏脏器指数大于1. 58g/kg组。3. 16g/kg组血清中CK、LDH、CK-MB、α-HBDH含量较空白组显著升高,1. 58g/kg组对应指标增幅均不明显,3. 16g/kg组心肌组织中MDA含量较空白组显著升高,T-SOD含量显著降低,1. 58g/kg组对应指标无明显变化。镜下见空白组心肌排列整齐,结构完整,1. 58g/kg组可见少量炎细胞浸润,局部淤血和心肌纤维间隙变宽,3. 16g/kg组心肌纤维阵列解体紊乱,炎细胞浸润,血管扩张充血,组织严重出血,间质水肿,核周空泡形成,心肌纤维间隙明显增宽,可见脂肪变态反应及嗜酸性变。Westernblot结果显示与空白组相比,1. 58g/kg组HO-1蛋白含量下降不明显,3. 16g/kg组显著降低,IHC结果显示空白组呈阴性表达,1. 58g/kg组呈弱阳性表达,3. 16g/kg组呈强阳性表达。结论:3. 16g/kg组毒性大于1. 58g/kg组,毒性机制为氧化应激损伤,且在一定剂量范围内,药物毒性和氧化损伤程度呈剂量依赖性。

Nrf2/HO-1通路介导的及己醇提取物致大鼠肾毒性研究

目的研究及己根、茎、叶醇提取物所致大鼠肾毒性及机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分成空白(KB)组、根醇(GC)组、茎醇(JC)组和叶醇(YC)组,每组10只。GC、JC、YC三组分别给予相应醇提取物4.14、3.21、1.17 g/kg灌胃。KB组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃,每天1次,连续灌胃14天。绘制体重变化曲线,计算肾脏指数,制作肾脏组织切片,进行HE染色及组织病理学观察。检测血清尿素氮(BUN,速率法)、肌酐(SCr,酶法)和尿酸(UA,酶法)及肾脏组织总超氧化物歧化酶(T-SOD,羟胺法)和丙二醛(MDA,TBA法)含量;Western Blot法检测Nrf2/HO-1通路中Nrf2、HO-1蛋白含量;免疫组化法检测肾脏TGF-β1阳性表达情况。结果与KB组比较,JC组BUN、UA含量升高(P<0.01);JC组和YC组SCr、MDA含量升高(P<0.01),T-SOD含量及HO-1、Nrf2蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05);GC组、JC组和YC组大鼠肾脏TGF-β1表达水平升高(P<0.01)。与GC组比较,JC组BUN、UA含量升高(P<0.01);JC组和YC组SCr、MDA含量及TGF-β1表达升高(P<0.01,P<0.05),T-SOD含量及HO-1、Nrf2蛋白表达降低(P<0.01)。与JC组比较,YC组BUN、SCr、UA、MDA含量降低(P<0.01,P<0.05),T-SOD含量升高(P<0.01)。KB组镜下未见明显病理变化;GC组偶见肾小管出血和上皮细胞脱落;JC组肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落,炎细胞浸润明显,并出现严重的血管扩张充血和淤血;YC组肾小管上皮细胞脱落坏死,伴有淤血现象。结论及己茎和叶部位的肾毒性较大,根部位的肾毒性较小,其机制可能与氧化应激损伤有关。