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霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄中表达的研究 被引量:9
1
作者 彭志强 贺竹梅 +2 位作者 俞守义 余迪求 李宝健 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第3期259-264,共6页
将霍乱肠毒素 B亚单位 (CT-B)基因及内质网引导序列 (SEKDEL)克隆到质粒 p RTL2和 p BI1 2 1中 ,分别构建植物双元表达载体 p BI-CTB和 p BI-CTBK,CT-B基因由 Ca3 5 S启动子控制表达 .采用叶盘法经根癌农杆菌介导转化番茄 (金丰 1号 ,Ji... 将霍乱肠毒素 B亚单位 (CT-B)基因及内质网引导序列 (SEKDEL)克隆到质粒 p RTL2和 p BI1 2 1中 ,分别构建植物双元表达载体 p BI-CTB和 p BI-CTBK,CT-B基因由 Ca3 5 S启动子控制表达 .采用叶盘法经根癌农杆菌介导转化番茄 (金丰 1号 ,Jinfeng1 ) ,各表达载体得到一批转基因植株 .经 PCR和 Southern blot分析表明 CT-B基因整合到了番茄基因组中 ;ELISA和 Western blot分析表明 p BI-CTB和 p BI-CTBK的转基因植株能够有效表达 CT-B多肽 ,分别占番茄叶片可溶性蛋白的 0 .0 5 5 %和 0 .0 84% . 展开更多
关键词 霍乱肠毒素b亚单位 转基因番茄 基因表达
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幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:5
2
作者 姜云水 方平楚 +1 位作者 付亚萍 朱诚 《科技通报》 北大核心 2004年第3期189-193,共5页
目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和... 目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论 成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础. 展开更多
关键词 生物工程 幽门螺杆菌 CAGA基因 CTb基因 水稻Wx启动子 基因融合 植物表达载体
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丙型肝炎病毒抗原决定簇与霍乱毒素B亚基的融合表达以及融合蛋白的抗原性 被引量:2
3
作者 曹诚 马清钧 +5 位作者 石成华 于公义 李平 李杰之 张艳红 张京生 《病毒学报》 CSCD 北大核心 1995年第2期99-106,共8页
通过固相化学合成法,合成了编码丙型肝炎病毒(HCV)结构区和非结构区的4个抗原决定簇基因,这些抗原决定簇基因片段以不同方式串朕后与ctxB基因融合,构建了12种表达不同嵌合蛋白的重组质粒。各重组质粒转化大肠杆菌后均能... 通过固相化学合成法,合成了编码丙型肝炎病毒(HCV)结构区和非结构区的4个抗原决定簇基因,这些抗原决定簇基因片段以不同方式串朕后与ctxB基因融合,构建了12种表达不同嵌合蛋白的重组质粒。各重组质粒转化大肠杆菌后均能高效分泌性表达融合蛋白,表达产量随所融合的抗原决定簇不同在10~50μg/ml之间,表达水平主要与抗原决定簇的氨基酸组成有关,而与抗原决定簇的大小及串联次数关系不大。融合蛋白通过亲和层析纯化达到了电泳纯。对11种融合蛋白中HCV抗原决定簇的反应原性的研究表明,多数融合蛋白中HCV抗原决定簇均能与对应的HCV抗体结合。其中以融合蛋白95082为抗原研制的抗-HCVELISA试剂具有良好的灵敏度和特异性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 霍乱毒素b亚基 基因融合
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幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达 被引量:2
4
作者 邓颖 杨致邦 +3 位作者 王勇 黄进 张绍兰 叶翠莲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期172-175,共4页
目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达... 目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 中性粒细胞激活蛋白 霍乱毒素b亚单位 融合基因
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免疫佐剂分子CTB基因的克隆与表达 被引量:1
5
作者 王涛 陈建平 +2 位作者 张雷 王玉芳 马莹 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第2期255-258,共4页
我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、We... 我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们成功地扩增出 376 bp的霍乱弧菌 B亚基基因 ;构建免疫佐剂分子的重组质粒 p CTB;并在原核系统中表达出 12 KD的霍乱弧菌 B亚基抗原区带。 展开更多
关键词 免疫佐剂 CTb基因 克隆技术 基因表达 聚合酶链式反应
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宋内Ⅰ相O抗原及霍乱毒素B亚基在福氏2a痢疾菌中的表达及其免疫保护效果的观察 被引量:4
6
作者 钱锋 芮贤良 +1 位作者 苏国富 黄翠芬 《Acta Genetica Sinica》 CSCD 1996年第4期322-328,共7页
本文利用基因重组的方法,将宋内I相O抗原基因以及霍乱毒素B亚单位基因(ctx-B)克隆至带链球菌的asd基因的表达载体,然后转化至asd-痢疾菌苗株福氏2aT32。脂多糖银染以及Westernblotting实验证实... 本文利用基因重组的方法,将宋内I相O抗原基因以及霍乱毒素B亚单位基因(ctx-B)克隆至带链球菌的asd基因的表达载体,然后转化至asd-痢疾菌苗株福氏2aT32。脂多糖银染以及Westernblotting实验证实以上两基因都能在宿主菌中稳定表达。动物(小白鼠)保护实验表明,该重组菌对福氏2a、宋内氏痢疾菌的保护效率达100%,对霍乱弧菌的保护效率也达70%。该菌具有稳定、无抗生素标记、多价的特点。 展开更多
关键词 细菌性痢疾 痢疾菌 霍乱毒素b 亚单位 基因表达
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霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建 被引量:1
7
作者 曹诚 石成华 +1 位作者 张京生 马清钧 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第5期579-583,共5页
霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,... 霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达CTB与β-半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与GM1结合,说明融合蛋白保持CTB的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗-CTB抗体结合,说明融合蛋白具有CTB的抗原性。以上结果表明:通过将外源抗原决定簇基因融合至ctxB的3′端,在大肠杆菌中表达融合蛋白,构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响,构建了高效表达融合蛋白的载体-宿主系统。 展开更多
关键词 霍乱毒素b亚基 基因融合 肽苗
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霍乱毒素B亚基基因上游序列对B亚基表达水平的影响
8
作者 曹诚 石成华 +1 位作者 李平 马清钧 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1994年第6期479-485,共7页
本研究通过缺失突变和移码突变研究了ctxB基因上游A基因部分序列对ctxB表达水平的影响,结果表明:(1)将霍乱毒素操纵子XbaI-EcoRI片段克隆至pUC19,构建的质粒pUC19CTB中A亚基的部分序列不能翻译... 本研究通过缺失突变和移码突变研究了ctxB基因上游A基因部分序列对ctxB表达水平的影响,结果表明:(1)将霍乱毒素操纵子XbaI-EcoRI片段克隆至pUC19,构建的质粒pUC19CTB中A亚基的部分序列不能翻译,该质粒转化大肠杆菌后CTB的表达产量为30μg/μl;(2)在质粒pUC19CTB的XbaI位点引入移码突变,构建质位pMC02C,使A亚基基因部分序列能够翻译至自然的终止密码,B基因的表达水平却降低一倍;(3)质粒pUC19CTB缺失XbaI-ClaI(550bp)的非翻译序列,构建质粒pMC03(A亚基序列不翻译),该质粒转化大肠杆菌后ctxB基因的表达水平降低1倍;(4)在质粒pMC03中ctxB基因上游引入移码突变,构建质粒pMC03C,其A亚基部分序列能够表达,这时CTB的表达水平较pMC03低得多,较pUC19CTB低20倍以上。进一步研究表明,在XbaI-ClaI片段之间存在具有较强启动子活性的DNA序列是550bp非翻译序列缺失后CTB表达水平降低的原因。对A基因的阅读框架变化影响CTB表达水平的可能机理进行了讨论。 展开更多
关键词 霍乱毒素 启动子 基因调控
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pBR322-Red介导的E.coli染色体基因敲入、位点及表达研究
9
作者 陈伟 李山虎 +2 位作者 于梅 王鸣刚 周建光 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期71-77,共7页
应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coliW 3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌... 应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coliW 3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6。荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达。为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1。证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中。结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达。 展开更多
关键词 pbR322-Red 重组工程 基因敲入 霍乱毒素b亚单位
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粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位的克隆与表达
10
作者 吴利先 杨致邦 林珊 《大理学院学报(综合版)》 CAS 2003年第3期5-7,共3页
目的 :构建表达粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 :用PCR方法从霍乱弧菌中扩增CTB片段 ,将其转入原核载体质粒pET-32a( +) ,在大肠杆菌Top10克隆 ,并在BL21中表达。结果 :重组质... 目的 :构建表达粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法 :用PCR方法从霍乱弧菌中扩增CTB片段 ,将其转入原核载体质粒pET-32a( +) ,在大肠杆菌Top10克隆 ,并在BL21中表达。结果 :重组质粒PET-CTB的全长序列经分析与基因文库公布的一致 ;表达蛋白经SDS-PAGE分析 ,相对分子量与文献相符 ;重组蛋白竟Westernblot检测有抗原性。结论 :基因重组菌表达的CTB蛋白可能作为有效。 展开更多
关键词 粘膜佐剂 霍乱毒素b亚单位 基因重组 基因克隆 基因表达 霍乱弧菌 PCR方法
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乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达
11
作者 石成华 曹诚 +1 位作者 张京生 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 1994年第1期4-8,共5页
本研究通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了HBV PreS_2抗原决定簇基因,与ctxB基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/ml,表达产物95%以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说... 本研究通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了HBV PreS_2抗原决定簇基因,与ctxB基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/ml,表达产物95%以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了CTB的基本高级结构和生物学功能;ELISA实验证明融合蛋白具有CTB和HBV PreS_2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白的免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。 展开更多
关键词 基因融合 霍乱毒素b亚基 乙型肝炎病毒 抗原决定簇 肽苗
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乙肝PreS_2抗原决定簇和霍乱毒素B亚基基因的融合与表达
12
作者 石成华 曹诚 +1 位作者 张京生 马清钧 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第5期533-538,共6页
通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了乙肝炎病毒(HBV)前S2抗原(PreS2)抗原决定簇基因,与霍乱毒素B亚基基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/mL,表达产物95%以上... 通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了乙肝炎病毒(HBV)前S2抗原(PreS2)抗原决定簇基因,与霍乱毒素B亚基基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/mL,表达产物95%以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了霍乱毒素B亚基(CTB)的基本高级结构和生物学功能;酶联免疫吸附实验证明融合蛋白具有CTB和HBVPreS2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。 展开更多
关键词 霍乱毒素b亚基 乙型肝炎病毒 抗原决定簇 肽苗
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含幽门螺杆菌CagA、UreB蛋白与霍乱肠毒素B亚单位(CTB)融合基因的植物表达载体的构建及遗传转化 被引量:4
13
作者 程畅 陈珍 朱诚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期29-33,共5页
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便... 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便是现有疫苗的良好替代品。将Hp相关蛋白与免疫佐剂CTB的融合基因(ctb-linker-cagA和ctb-linker-ureB)利用PCR、酶切、连接等一系列方法从载体p1300-WxCLCN和p1300-WxCLUN中重组到载体pCAMBIA2301中(含35S启动子),重组载体分别命名为p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN。通过冻融法将载体导入农杆菌EHA105菌株中,以农杆菌介导的方法,将重组载体p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN转化烟草黄苗榆和心叶烟,获得了具有卡那霉素抗性再生植株,经过酶切、PCR、GUS染色和PCR-Southern鉴定结果表明,目的基因分别正确插入载体中并稳定整合到植株中,为利用植物反应器生产幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 CAGA基因 ureb基因 ctb基因 基因融合 表达载体
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霍乱毒素B亚单位与胰岛素原融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析 被引量:2
14
作者 陈丽 欧阳凤秀 +7 位作者 钱炳俊 任宏 王强 姜庆五 王玉炯 刘静波 梁婉琪 张大兵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期204-210,共7页
构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱... 构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱导后 ,其表达产物经过 15 %SDS PAGE分析表明该菌株可以表达融合蛋白 ,其分子量约为 2 1. 6kD ,且主要以包涵体形式存在 ,约占全菌蛋白的 2 5 %。含CTB- PROIN重组蛋白的包涵体经过变性和复性后 ,CTB- PROIN可以在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果表明重组CTB PROIN蛋白可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别 ,说明该蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性。同时在体外 ,CTB PROIN蛋白可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合 ,表明了该融合蛋白在体外具有生物活性。这些研究结果为利用原核生物表达系统研制廉价、高效的I型糖尿病口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 霍乱毒素b亚单位 胰岛素原 融合基因CTb-PROIN 神经节苷脂GMI
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转基因烟草表达霍乱毒素B亚单位的研究 被引量:1
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作者 王新国 张国华 +2 位作者 方荣祥 刘传暄 肖成祖 《生物技术通讯》 CAS 2000年第2期98-102,106,共6页
将霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因克隆到质粒pBin4 38中 ,分别构建了植物表达载体pBI CTB、pBI SPCTB和pBI CTBER。采用叶盘法分别转化烟草K32 6,各表达载体得到了一批转基因植株。转基因烟草的PCR和Southernblot分析表明CTB基因整合到了烟... 将霍乱毒素B亚单位 (CTB)基因克隆到质粒pBin4 38中 ,分别构建了植物表达载体pBI CTB、pBI SPCTB和pBI CTBER。采用叶盘法分别转化烟草K32 6,各表达载体得到了一批转基因植株。转基因烟草的PCR和Southernblot分析表明CTB基因整合到了烟草基因组中。转基因植株的ELISA和Westernblot分析表明pBI SPCTB和pBI CTBER的转基因植株能有效表达CTB蛋白 ,分别占烟草叶片可溶总蛋白的 0 .0 95 %和 0 .115 % ,比pBI CTB转基因植株大约高 2 7倍。转基因烟草表达的CTB能够形成寡聚体或五聚体。 展开更多
关键词 霍乱毒素b亚单位 转基因烟草 基因表达
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流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建与细胞转染研究 被引量:1
16
作者 寇静远 潘兴 +10 位作者 李婉宜 邝玉 周琳琳 杨靖 石新丽 陆顺顺 黄筱钧 邓昭敏 秦臻 王保宁 李明远 《西部医学》 2015年第2期182-185,189,共5页
目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/... 目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/CTB-Eg;用脂质体法转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察和PCR法检测其转染效率。结果成功构建了真核表达质粒pEGFP-C2/CTB-Eg,且该重组质粒能在HEK293T细胞中瞬时转染,转染效率在50%~70%之间。结论本研究成功设计、构建了CTB-Eg融合基因,其在HEK293T细胞中转染效率较高,为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 流感病毒 核酸疫苗 多表位基因 霍乱毒素b亚单位
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霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析
17
作者 陈丽 欧阳凤秀 +7 位作者 钱炳俊 任宏 王强 姜庆五 王玉炯 刘静波 梁婉琪 潘爱虎 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期56-61,共6页
构建了霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因 CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该 质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后... 构建了霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因 CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该 质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15%SDS-PAGE分 析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的 30%。含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Western blotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有 霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可 与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的 高级结构,具有生物活性。 展开更多
关键词 霍乱毒素b亚单位 融合基因 胰岛素 表达分析 b SDS-PAGE Western 原核 大肠杆菌 分析结果 神经节苷脂 表达载体 基因克隆 重组质粒 融合蛋白 表达产物 IPTG 重组菌株 重组蛋白 特异结合 高级结构 生物活性 分析表 分子量
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霍乱毒素B亚单位基因的克隆和表达
18
作者 田季德 徐兆炜 +1 位作者 高庆申 刘延清 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第5期332-337,共6页
用DNA重组技术构建CT-B表达性质粒pXB1及进一步修饰的pXB2,使CT-B基因在大肠杆菌中得到较高水平的表达(280~350ng/ml),且有71.5%分泌率。表达动力学研究阐明,克隆子培养24h产物收率较高。一定浓度的Mg^(2+)、L-组氨酸和天冬酰胺能刺激... 用DNA重组技术构建CT-B表达性质粒pXB1及进一步修饰的pXB2,使CT-B基因在大肠杆菌中得到较高水平的表达(280~350ng/ml),且有71.5%分泌率。表达动力学研究阐明,克隆子培养24h产物收率较高。一定浓度的Mg^(2+)、L-组氨酸和天冬酰胺能刺激CT-B的表达。GM1-ELISA、CHO细胞测毒结合间接免疫荧光检测和家兔肠段结扎试验证实,表达的CT-B能与游离的或活细胞膜上的GM1受体结合,但无细胞和肠段毒性。这种细胞测毒结合免疫荧光序贯试验,为客观证实CT-B的生物学活性开拓了新途径。 展开更多
关键词 霍乱毒素 b亚单位 基因克隆
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Effects of p75 neurotrophin receptor knockout on axonal regeneration in a mouse model of facial nerve injury 被引量:3
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作者 Fenghe Zhang Ping Huang +1 位作者 Pishan Yang Xue Zhang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第8期565-569,共5页
BACKGROUND: Previous studies have shown that p75 neurotrophin receptor plays an important role in peripheral nerve injury. However, the role of p75 neurotrophin receptor in the regeneration of peripheral nerves remai... BACKGROUND: Previous studies have shown that p75 neurotrophin receptor plays an important role in peripheral nerve injury. However, the role of p75 neurotrophin receptor in the regeneration of peripheral nerves remains poorly understood. OBJECTIVE: To study the effect of p75 neurotrophin receptor on facial nerve regeneration. DESIGN, TIME AND SETTING: A randomized controlled experiment was performed in the Regeneration Laboratory of Flinders University, Australia and the Biomedical Laboratory of Dentistry School, Shandong University from March 2005 to February 2006. MATERIALS: Cholera toxin B subunit, fast blue, and biotin rabbit-anti goat IgG were provided by Sigma, USA; goat-anti choleratoxin B subunit ant/body was provided by List Biologicals, USA. METHODS: In p75 neurotrophin receptor knockout and wild type 129/sv mice, the facial nerves on one side were crushed. At days 2 and 4 following injury, regenerating motor neurons in the facial nuclei were labeled by fast blue, and the regenerating axon was labeled by the anterograde tracer choleratoxin B subunit. MAIN OUTCOME MEASURES: Axonal regenerative velocity and number were detected by immunohistochemical staining of choleratoxin B subunit, growth-associated protein, protein gene product 9.5, and calcitonin-gene-related peptide; survival of motor neurons in the facial nuclei was detected by retrograde fast blue. RESULTS: Axonal growth in the facial nerve of p75 neurotrophin receptor knockout mice was significantly less than in wild type mice. At day 7 after injury, the number of regenerating motor neurons in p75 neurotrophin receptor knockout mice remained significantly less than in wild type mice (P 〈 0.05). The number of positively stained fibers for growth-associated protein-43, protein gene product 9.5, and calcitonin-gene-related peptide in p75 neurotrophin receptor knockout mice was significantly less than in wild type mice (P 〈 0.01). CONCLUSION: p75 neurotrophin receptor promoted axonal regeneration and enhanced the survival rate of motor neurons following facial nerve injury. 展开更多
关键词 p75 neurotrophin receptors cholera toxin b subunit fast blue REgeneRATION MOUSE gene knockout
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霍乱毒素B亚单位诱导大鼠接触脑脊液神经元、胶质-室管膜细胞c-fos基因表达
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作者 刘智平 万选才 +1 位作者 谭会兵 石葛明 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 1995年第2期61-68,共8页
在立体定位下将CB注入大鼠左侧脑室前角,用Fos蛋白十六肽抗血清进行ABC免疫细胞化学(ICC)方法标记.观察注射后5个不同时程点c-fos基因的表达情况以研究CH对大鼠脑的作用,结果发现注射侧侧脑室前角、第三脑室、... 在立体定位下将CB注入大鼠左侧脑室前角,用Fos蛋白十六肽抗血清进行ABC免疫细胞化学(ICC)方法标记.观察注射后5个不同时程点c-fos基因的表达情况以研究CH对大鼠脑的作用,结果发现注射侧侧脑室前角、第三脑室、中脑导水管及第四脑室室管膜细胞、室管膜下层细胞、部分接触脑脊液神经元(CSF-CN)及其他神经元呈现c-fos基因高表达。表达标记出现在注药后1h,且1和2h为表达高峰,4h标记大部分消失,8h标记全部消失。表明CB能够诱导中枢神经元及非神经元细胞成分表达c-fos。这种诱导在CNS的CSF-CN系统有特异性,但与CSF-CN整体系统又不完全重叠。c-fos表达的时程较短。提示CB对整体动物脑在细胞核水平具生物学作用,推论c-fos表达核蛋白可能是CB这种具生长因子样作用的活性物质发挥生物效应的重要中间途径。 展开更多
关键词 表达 C-FOS基因 室管膜细胞 诱导 脑脊液 Cb CSF 神经元 消失 第三脑室
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