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霍乱弧菌主要毒力和管家基因序列分析 被引量:11
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作者 芮勇宇 许锐恒 +2 位作者 阚飙 高守一 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-33,共3页
目的分析广东霍乱弧菌(VC)代表菌株主要毒力基因和管家基因序列。方法PCR扩增霍乱弧菌的主要毒力基因(ctxAB和tcpA)和管家基因(dnaE、hlyA、mdh和recA)、基因测序、对序列进行生物信息学分析。结果不同年代分离的2株埃尔托型(EV... 目的分析广东霍乱弧菌(VC)代表菌株主要毒力基因和管家基因序列。方法PCR扩增霍乱弧菌的主要毒力基因(ctxAB和tcpA)和管家基因(dnaE、hlyA、mdh和recA)、基因测序、对序列进行生物信息学分析。结果不同年代分离的2株埃尔托型(EVC)产毒株和1株0139群VC产毒株的主要毒力基因序列与国内外相关报告比较,ctxA基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为99.7%~100%和98.8%~100%.ctxB基因及推测的氨基酸序列的同源性分别为98.8%~100%和96.8%~100%,tcpA基因序列与EVC国际标准株N16961 100%同源。3株产毒株的dnaE、hlyA、mdh和recA基因序列同源性分别为99.8%~100%,100%,99.5%~99.8%和100%,氨基酸序列同源性分别为100%.100%,98.5%~99.3%和100%;3株产毒株和O139群VC非产毒株的管家基因序列同源性分别为97.0%~97.2%,91.8%,94.1%~94.4%,96.9%,氨基酸序列同源性分别为100%,94.6%,94.3%~98.5%和99.7%。结论广东省不同年代EVC产毒株和O139群VC产毒株的群体遗传学关系高度密切,而与O139群VC非产毒株较远,O139群VC产毒株可能起源于EVC产毒株。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 霍乱肠毒素基因 毒力协同调节菌毛A亚单位基因 管家基因 序列分析
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暗纹东方鲀非01霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测 被引量:21
2
作者 杨鸢劼 俞菊华 +2 位作者 陈辉 方苹 郭闯 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期525-530,共6页
在对养殖暗纹东方病害调查中,从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株(J-1和H-3)菌株,经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌(Non-01Vibrio cholerae)。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性,出现症状与自... 在对养殖暗纹东方病害调查中,从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株(J-1和H-3)菌株,经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌(Non-01Vibrio cholerae)。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性,出现症状与自然发病鱼相同。为进一步确认分离菌株的分类地位,使用P1、P2引物,以非01群霍乱弧菌N92001菌株和01群霍乱弧菌N16961菌株为对照,对分离菌株进行PCR扩增,得到451bp的DNA片段。根据现有霍乱弧菌肠毒素ctxA基因序列设计引物P3,P4,以N16961菌株为阳性对照,PCR扩增结果均得到大小为400bp的DNA片段。在对H-3菌株的扩增片段进行纯化、克隆和测序,得到407bp序列,该菌株与N16961菌株中肠毒素ctxA基因序列的完全一致,证实该片段源于ctxA基因。进一步说明从暗纹东方体内分离到的J-1和H-3菌株具有霍乱肠毒素ctxA,有一定的致病力。 展开更多
关键词 暗纹东方纯 非01群霍乱弧菌 肠毒素ctxA
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霍乱毒素及大肠杆菌不耐热肠毒素生物学特性的研究 被引量:8
3
作者 郭学青 邹全明 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第3期325-326,共2页
霍乱毒素(cholera toxin,CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)随着传染病和流行病学的发展得以关注,近年由于疫苗的进展再次得到重视,它们是细菌蛋白毒素家族成员,通过G蛋白的ADP-核糖基化而发挥其毒性。两者关系密... 霍乱毒素(cholera toxin,CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)随着传染病和流行病学的发展得以关注,近年由于疫苗的进展再次得到重视,它们是细菌蛋白毒素家族成员,通过G蛋白的ADP-核糖基化而发挥其毒性。两者关系密切,氨基酸序列同源性约80%,均包括一个240个残基的A链和5个103个残基的B亚单位,即AB_5六聚体,B五聚体与GM_1神经节苷脂受体结合,决定毒素对宿主细胞的选择亲和性,A亚单位有使上皮细胞G蛋白Gsα的一个精氨酸残基ADP-核糖基化的活性,两者具有较强的粘膜免疫原性和粘膜免疫佐剂效应。了解其结构、粘膜免疫机制,对于粘膜疫苗的发展有重要指导意义。 展开更多
关键词 霍乱霉素 大肠杆菌 肠毒素 免疫原性
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鱼用口服疫苗免疫佐剂研究进展 被引量:3
4
作者 黄钧 施金谷 +5 位作者 陈明 黄艳华 温华成 彭民毅 王瑞 梁万文 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期869-872,共4页
免疫佐剂是一种先于或与抗原同时使用,能够增强机体的非特异性免疫能力及相应抗原的免疫原性,但其本身不具备抗原特性的物质。文章对鱼用口服疫苗免疫佐剂的作用机理以及霍乱毒素(CT)、大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、细胞因子等几种主要鱼... 免疫佐剂是一种先于或与抗原同时使用,能够增强机体的非特异性免疫能力及相应抗原的免疫原性,但其本身不具备抗原特性的物质。文章对鱼用口服疫苗免疫佐剂的作用机理以及霍乱毒素(CT)、大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、细胞因子等几种主要鱼用口服疫苗免疫佐剂的应用情况进行综述,发现鱼用口服疫苗免疫佐剂的研究应用过程中仍存在作用机理研究相对滞后、忽略肠道黏膜免疫机理特殊性、使用成本过高、安全性等问题,建议今后加强对鱼类肠道黏膜免疫机理以及口服疫苗免疫佐剂作用机理的研究,优化口服疫苗免疫佐剂的免疫剂量和程序,降低生产成本,研发出更为广泛、廉价的口服疫苗免疫佐剂,提高其安全性等,以促进水产养殖业的健康发展。 展开更多
关键词 鱼用口服疫苗 免疫佐剂 霍乱毒素 大肠杆菌不耐热肠毒素 细胞因子 应用现状
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大肠杆菌热稳定肠毒素与霍乱毒素B亚单位融合蛋白免疫原性的评价 被引量:1
5
作者 任立成 赵志虎 +2 位作者 刘传暄 赵之伟 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期369-371,共3页
构建了霍乱毒素B亚单位CTB和大肠杆菌热稳定肠毒素ST的重组表达载体pMCST1、pMCST2。二者的不同是,前者为单拷贝ST,后者为双拷贝ST。在大肠杆菌DH5α中融合蛋白高效表达。用这两种重组蛋白分别免疫小鼠,都诱导产生了高滴度的抗CTB和抗S... 构建了霍乱毒素B亚单位CTB和大肠杆菌热稳定肠毒素ST的重组表达载体pMCST1、pMCST2。二者的不同是,前者为单拷贝ST,后者为双拷贝ST。在大肠杆菌DH5α中融合蛋白高效表达。用这两种重组蛋白分别免疫小鼠,都诱导产生了高滴度的抗CTB和抗ST的血清。表明这两组融合蛋白具有良好的CTB和ST的免疫原性,为进一步构建抗CTB和抗ST的产毒性细菌腹泻疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚单位 大肠杆菌热稳定肠毒素 疫苗 重组表达载体
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O139群霍乱弧菌16S rRNA基因分型分析
6
作者 严寒秋 马小燕 +3 位作者 李峰 黎新宇 刘桂荣 唐耀武 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第18期3455-3456,3459,共3页
[目的]研究北京市O139群霍乱弧菌的分子生物学特征。[方法]对北京市1998 ̄2000年的30株O139群霍乱弧菌进行PCR霍乱肠毒素(CT)基因检测,以16SrRNA为探针对菌株DNA进行Southern杂交后对图谱进行核糖体基因(RT)分型分析。[结果]对30株霍乱... [目的]研究北京市O139群霍乱弧菌的分子生物学特征。[方法]对北京市1998 ̄2000年的30株O139群霍乱弧菌进行PCR霍乱肠毒素(CT)基因检测,以16SrRNA为探针对菌株DNA进行Southern杂交后对图谱进行核糖体基因(RT)分型分析。[结果]对30株霍乱弧菌RT图谱进行分析,共存在5种16SrRNA核糖体基因型,其中CT阳性的O139群霍乱弧菌为RT1型,CT阴性的O139群霍乱弧菌为RT2-RT5型。[结论]北京市不同年份的O139群霍乱弧菌CT阳性菌株核糖体基因型较为单一,CT阴性菌株基因型具有明显的多样性。提示北京市O139群霍乱弧菌CT阳性菌株和CT阴性菌株遗传发生上相距较远。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 霍乱肠毒素 核糖体基因分型
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霍乱肠毒素ctxA基因真核表达重组质粒的构建及表达
7
作者 张莉 张雷 +1 位作者 陈建平 王涛 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第5期324-326,F0003,共4页
目的构建霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-ctxA上切下ctxA基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子pcDNA3.1-ctxA经限制性酶切分析、PCR鉴定和序列测... 目的构建霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-ctxA上切下ctxA基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子pcDNA3.1-ctxA经限制性酶切分析、PCR鉴定和序列测定正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-ctxA转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western blot对pcDNA3.1-ctxA的瞬时表达产物和稳定表达产物进行鉴定。结果重组质粒pcD-NA3.1-ctxA成功转入NIH3T3细胞,利用免疫荧光技术在NIH3T3细胞膜和细胞浆中检测到了瞬时表达,用Westernblot检测到转染的阳性细胞克隆稳定表达出约29 ku的蛋白。结论成功构建霍乱肠毒素A亚单位基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-ctxA,并在NIH3T3细胞中表达出29 ku的CTA蛋白。 展开更多
关键词 霍乱肠毒素 ctxA基因 转染 体外表达
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海水养殖真鲷最小弧菌外毒素的免疫学特性初步研究
8
作者 吴后波 苏晓波 潘金培 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期535-540,共6页
按常规方法免疫健康家兔进行外毒素抗体的制备。将制备的兔抗血清与等体积的外毒素混合,37℃下作用1h后,观察毒素的溶血性及细胞毒性,取免疫前家兔血清(零号血清)作阴性对照,用毒素作阳性对照。结果表明,兔抗毒素血清能中和毒素,抑制毒... 按常规方法免疫健康家兔进行外毒素抗体的制备。将制备的兔抗血清与等体积的外毒素混合,37℃下作用1h后,观察毒素的溶血性及细胞毒性,取免疫前家兔血清(零号血清)作阴性对照,用毒素作阳性对照。结果表明,兔抗毒素血清能中和毒素,抑制毒素对人血细胞的溶血性及对Vero细胞的细胞毒性,中和毒素的兔抗毒素血清最高稀释度为1∶256,毒素对照显示出溶血性及细胞毒性。毒素与一定浓度的嗜水气单胞菌HEC毒素抗血清、霍乱肠毒素抗血清在37℃下分别作用1 h后,观察其溶血性及细胞毒性。结果表明,这2种抗血清都不能中和毒素,毒素与这2种抗血清作用后,仍然保持其溶血性及细胞毒性。用浓度为0.2%的福尔马林对浓度为5mg/mL的外毒素进行灭活处理,得到的灭活疫苗为毒素苗。一定稀释度的毒素苗,在初次免疫真鲷2周后利用病原菌对免疫组及对照组的实验鱼进行人工攻毒感染,毒素苗的免疫保护率可达80%,强化免疫后,免疫保护率有所提高。注射免疫的免疫保护率比浸泡免疫的高。 展开更多
关键词 Vm-Pm外毒素 HEC毒素 霍乱肠毒素 毒素苗
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霍乱肠毒素分离方法的改进 被引量:1
9
作者 童竞亚 刘琥琥 严宜明 《赣南医学院学报》 1990年第1期1-5,65,共5页
用作者改进的液体培养基在5%CO_2环境中培养霍乱弧菌(Inaba 569B),每ml培养滤液可获得霍乱肠毒素(CT)1.215~2.012μg。在分离提纯CT时,先用DEAE-Sephadex A_(50)除去大部分色素及杂蛋白,再用Sephacryl S_(-200)分纯,效果好,重复性强;... 用作者改进的液体培养基在5%CO_2环境中培养霍乱弧菌(Inaba 569B),每ml培养滤液可获得霍乱肠毒素(CT)1.215~2.012μg。在分离提纯CT时,先用DEAE-Sephadex A_(50)除去大部分色素及杂蛋白,再用Sephacryl S_(-200)分纯,效果好,重复性强;其第Ⅰ组分即为CT,肠襻试验阳性,双向琼脂扩散试验及HPLC检测结果均与上海CT一致。分子量为86000。 展开更多
关键词 霍乱肠毒素 分离 增养基
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大肠杆菌热稳定肠毒素表位与霍乱毒素B亚单位的重组与表达 被引量:1
10
作者 任立成 胥全彬 +3 位作者 张助 赵志虎 刘传暄 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期101-104,共4页
霍乱毒素B亚单位(CTB)是半抗原的良好载体,选择CTB基因的翻译调控元件,实现了串联重复的突变型大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)表位与CTB的重组,在大肠杆菌中高效分泌表达,经过亲和层析获得了高纯度的重组蛋白,ELISA表明重组蛋白仍保留与神经... 霍乱毒素B亚单位(CTB)是半抗原的良好载体,选择CTB基因的翻译调控元件,实现了串联重复的突变型大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)表位与CTB的重组,在大肠杆菌中高效分泌表达,经过亲和层析获得了高纯度的重组蛋白,ELISA表明重组蛋白仍保留与神经节苷脂GM1的结合能力和CTB的免疫原性。 展开更多
关键词 大肠杆菌热稳定肠毒素 霍乱毒素B亚单位 细菌性腹泻 免疫原性 基因重组 基因表达
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霍乱肠毒素基因克隆及A2-B亚单位基因核苷酸序列分析
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作者 朱棣 刘延清 +1 位作者 金奇 刘汉明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期162-166,共5页
霍乱弧菌是引起霍乱的病源菌。霍乱弧菌产生的分泌性毒素CT是致病的主要物质之一。CT是多聚蛋白体,由A、B两个亚单位组成,A亚单位是毒性部分。
关键词 霍乱 霍乱肠毒素 基因克隆 A2-B亚单位 核苷酸
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霍乱弧菌569B菌株产毒条件的探讨
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作者 曲振海 佘雪轩 《徐州医学院学报》 CAS 1990年第4期245-248,共4页
本文对霍乱弧菌569B菌株体外产生毒素的条件进行了探讨。确定了有利于产毒的培养方式、温度、pH等因素,并对蔗糖在霍乱弧菌产毒中的作用进行了讨论。
关键词 霍乱 弧菌 肠毒素 产毒条件
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用中和试验证明空肠弯曲菌产生霍乱样肠毒素
13
作者 顾志学 王焕妞 +1 位作者 徐兴娣 刘静山 《苏州医学院学报》 1990年第3期183-184,253,共2页
本实验应用霍乱肠毒素(CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)抗血清.对3株空肠弯曲菌的粗制肠毒素进行中和试验,观察其是否能中和这些肠毒素使CHO 细胞伸长的活性,以评价空肠弯曲菌肠毒素(CJT)和霍乱肠毒素之间的关系。结果表明,这些肠毒素促... 本实验应用霍乱肠毒素(CT)和大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)抗血清.对3株空肠弯曲菌的粗制肠毒素进行中和试验,观察其是否能中和这些肠毒素使CHO 细胞伸长的活性,以评价空肠弯曲菌肠毒素(CJT)和霍乱肠毒素之间的关系。结果表明,这些肠毒素促使CHO 细胞由圆形变为梭形的活性,可因CT 或LT 抗血清的预处理而消失,从而进一步证明空肠弯曲菌中某些菌株可产生霍乱样肠毒素。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 霍乱样肠毒素 中和试验
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Toxin(s), Other Than Cholera Toxin, Produced by Environmental Non O1 Non O139 Vibrio cholerae 被引量:7
14
作者 Kohinur Begum Chowdhurv R.Ahsan +3 位作者 Mohammad Ansaruzzaman Dilip K.Dutta Qazi S.Ahmad Kaisar A.Talukder 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期115-121,共7页
A total of 39 Vibrio cholerae non O1 non O139 strains were isolated from surface waters of different parts of Dhaka City, Bangladesh. All these strains showed lack of ctx or zot gene, as demonstrated by the PCR analys... A total of 39 Vibrio cholerae non O1 non O139 strains were isolated from surface waters of different parts of Dhaka City, Bangladesh. All these strains showed lack of ctx or zot gene, as demonstrated by the PCR analysis. Eighteen representative strains were tested for enterotoxin production using a rabbit ileal loop model, of which live cells of 8 strains and culture filtrates of 6 strains produced fluid accumulation in ileal loops. However, none of them produced heat stable toxin (ST), as detected by suckling mouse assay. On the other hand, 15% of isolates produced cytotoxin as detected by the Chinese Hamster Ovary (CHO) cell assay. Fifty times concentrated culture filtrates of the representative strains did not give any precipitin band against the anti-cholera toxin, suggesting the strains produced an enterotoxin, which is antigenically different from known cholera toxin (CT). Eighty percent of the total isolates were found to be positive for heat labile haemolysin detected by tube method, whereas, 39% were found positive by the Christie-Atkins-Munch-Petersen (CAMP) method. However, 87% of the isolates were positive for haemagglutinin/protease and all of the strains were positive for mannose-sensitive-haemagglutinin assay. 展开更多
关键词 non O1 non 0139 Vibrio cholerae enterotoxin CYTOTOXIN HAEMOLYSIN haemaglutinin/protease
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聚合酶链反应检测O1群霍乱弧菌肠毒素A亚单位基因 被引量:5
15
作者 任少堂 秦一中 +3 位作者 张晓琴 林代文 晏碧君 汪伟业 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期77-80,共4页
为了加强对霍乱的防治,探索对霍乱弧菌的快速和敏感的检测方法,建立了一种快速标本处理和聚合酶链反应(PCR)扩增O1群霍乱弧菌肠毒素A亚单位(ctxA)基因区的诊断方法。结果表明:在对一组经常规培养、生化鉴定法诊断为霍... 为了加强对霍乱的防治,探索对霍乱弧菌的快速和敏感的检测方法,建立了一种快速标本处理和聚合酶链反应(PCR)扩增O1群霍乱弧菌肠毒素A亚单位(ctxA)基因区的诊断方法。结果表明:在对一组经常规培养、生化鉴定法诊断为霍乱的26份腹泻患者粪便标本检测后,PCR法有24株检测到ctxA基因,培养阳性而PCR阴性的2株为非O1群菌株。虽然现有的O1群血清学诊断方法无法检测新血清型O139,但研究表明O139与O1群霍乱弧菌肠毒素基因的核苷酸序列相同,本文引物序列也能扩增O139。结果提示:本方法具有简便、快速、特异和不需培养等特点,宜于临床应用。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 肠毒素 聚合酶链反应
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2006年-2009年广西水体及海水产品霍乱弧菌监测分析 被引量:4
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作者 权怡 方锦嵩 +3 位作者 周凌云 林玫 王鸣柳 秦卫文 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第2期464-465,共2页
目的:通过水体及海水产品的霍乱弧菌监测,及时发现疫情传播来源,以有效控制霍乱疫情的发生。方法:采集各类海水产品分离培养霍乱弧菌,采用血清学、嗜菌体生物分型、药物敏感试验和分子生物学方法对不同来源的菌株进行鉴定。结果:2006年-... 目的:通过水体及海水产品的霍乱弧菌监测,及时发现疫情传播来源,以有效控制霍乱疫情的发生。方法:采集各类海水产品分离培养霍乱弧菌,采用血清学、嗜菌体生物分型、药物敏感试验和分子生物学方法对不同来源的菌株进行鉴定。结果:2006年-2009年共分离出75株霍乱弧菌,其中小川型霍乱弧菌17株,稻叶型霍乱弧菌48株,O139群霍乱弧菌5株,首次分离出彦岛型霍乱弧菌5株。75株霍乱弧菌中仅3株O139群霍乱弧菌携带霍乱肠毒素(ctxA),其余菌株均为非流行株或非产毒株。药敏结果显示,除对氟哌酸、阿米卡星、环丙沙星、头孢他啶和头孢噻吩五种抗生素未产生耐药外,对庆大、复方新诺明、呋喃妥因、四环素、氨苄青霉素、强力霉素、氯霉素、链霉素和磺胺9种抗生素均产生不同程度的耐药。结论:广西外环境存在霍乱弧菌,但以非流行株或非产毒株为主,不同型别存在不同程度耐药性,未引起霍乱疫情的发生。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 药物敏感性 霍乱肠毒素
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佛山市外环境水体非O_1群霍乱弧菌生物学特性和流行病学研究 被引量:1
17
作者 陈爱贞 蔡戴崧 +4 位作者 朱素仪 黄祖星 廖华乐 严国有 朱文 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期47-49,共3页
目的 了解佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布及毒素携带情况。方法收集外环境水样 ,用常规的细菌培养方法分离非O1群霍乱弧菌。采用分子生物学PCR技术检测霍乱肠毒素 (CT)基因 ,用ELISA检测耐热肠毒素 (ST)和不耐热肠毒素 (... 目的 了解佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布及毒素携带情况。方法收集外环境水样 ,用常规的细菌培养方法分离非O1群霍乱弧菌。采用分子生物学PCR技术检测霍乱肠毒素 (CT)基因 ,用ELISA检测耐热肠毒素 (ST)和不耐热肠毒素 (LT)。结果 共检测水样 16 4 4份 ,分离到非O1群霍乱弧菌 4 78株 ,分离率为 2 9 0 7% ;血清学分型显示近年佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的主要菌型为VBO7。霍乱肠毒素基因检测阳性率为 1 91% ;耐热肠毒素、不耐热肠毒素的检出率分别为 13 14 %和 12 17%。结论 个别非O1群霍乱弧菌可同时带有多种毒力因子 ,提示佛山市外环境水体中存在的非O1群霍乱弧菌具有潜在的致病性 ,加强监测对做好感染性腹泻的防治工作实属必要。 展开更多
关键词 佛山市 外环境水体 非O1群霍乱弧菌 生物学特性 流行病学
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两种PCR方法检测霍乱肠毒素的结果分析 被引量:1
18
作者 严寒秋 黄芳 +4 位作者 曲梅 高志勇 刘园 刘桂荣 李洁 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第9期2037-2038,共2页
目的:对两种PCR方法检测霍乱肠毒素(CT)的结果进行分析与比较。方法:利用普通PCR法和TaqMan荧光PCR法对霍乱弧菌的CT进行检测。结果:85株霍乱弧菌普通PCR法检测CT阳性19株,阴性66株;TaqMan荧光PCR法检测CT阳性20株,阴性65株。结论... 目的:对两种PCR方法检测霍乱肠毒素(CT)的结果进行分析与比较。方法:利用普通PCR法和TaqMan荧光PCR法对霍乱弧菌的CT进行检测。结果:85株霍乱弧菌普通PCR法检测CT阳性19株,阴性66株;TaqMan荧光PCR法检测CT阳性20株,阴性65株。结论:普通PCR法和TaqMan荧光PCR法检测85株霍乱弧菌CT,只有1株前者阴性而后者阳性,其余84株的结果完全相符;DNA模板制备后普通PCR法检测CT需扩增、电泳和产物分析,4-5 h出结果,其过程繁琐;TaqMan荧光PCR法检测CT其操作方便简单,实现一管封闭反应,无需PCR后处理,结果直观,避免人为判断,1.5 h出结果,是一种更灵敏、准确和安全的CT快速检测法。 展开更多
关键词 霍乱肠毒素 PCR法 TAQMAN
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含扩增内对照的霍乱毒素基因ctx和不耐热肠毒素基因elt三重real-time PCR检测体系的建立 被引量:2
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作者 李杰 阚飙 张京云 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期720-723,共4页
目的:建立一个含扩增内对照(IAC)的三重TaqMan real-time PCR体系,以检测霍乱毒素基因ctxA和肠产毒性大肠埃希菌的不耐热肠毒素基因elt。方法针对ctxA、elt和IAC设计引物和探针,进行灵敏性和特异性分析,评价三重反应之间的互相影... 目的:建立一个含扩增内对照(IAC)的三重TaqMan real-time PCR体系,以检测霍乱毒素基因ctxA和肠产毒性大肠埃希菌的不耐热肠毒素基因elt。方法针对ctxA、elt和IAC设计引物和探针,进行灵敏性和特异性分析,评价三重反应之间的互相影响。结果该检测体系灵敏度为ctxA每个反应94拷贝,elt每个反应79拷贝,扩增效率分别为94.7%与98.1%。ctxA与elt拷贝数比例为1∶1~1∶10时,二者均能良好扩增;elt或ctxA的量是IAC的100倍以上时,IAC扩增受到抑制。结论该检测体系具有良好的灵敏性和特异性,可以用于腹泻粪便中感染病原菌的检测,其中内对照检测可以提示粪便样本中是否存在PCR抑制因子。 展开更多
关键词 霍乱毒素 不耐热肠毒素 实时荧光定量聚合酶链式反应
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肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原CS6和霍乱毒素B亚基在人伤寒沙门菌中的共表达及其免疫学效果观察
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作者 应天翼 韩照中 +3 位作者 王恒 冯尔玲 张兆山 苏国富 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第1期5-9,共5页
目的 :构建表达肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原基因CS6和霍乱毒素B亚基 (CTB)基因的细菌性腹泻基因工程多价疫苗。方法 :以基因工程减毒的人伤寒沙门菌为抗原载体 ,利用基于asd基因功能互补的宿主染色体_质粒平衡致死表达系统 ,实现了在没有... 目的 :构建表达肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原基因CS6和霍乱毒素B亚基 (CTB)基因的细菌性腹泻基因工程多价疫苗。方法 :以基因工程减毒的人伤寒沙门菌为抗原载体 ,利用基于asd基因功能互补的宿主染色体_质粒平衡致死表达系统 ,实现了在没有抗生素选择压力的条件下 ,CS6和CTB在人伤寒沙门菌中的稳定表达。结果与结论 :检测结果表明 ,CS6和CTB的表达虽对宿主菌的生长有一定影响 ,但经过一段时间的培养 ,重组菌株仍可达到高密度生长。动物免疫结果显示 ,重组菌株在家兔体内均可诱生相应抗体 ,但从诱生的抗体效价、抗体持续时间方面评价 ,单独表达CS6与CTB的重组菌株的免疫学效果均好于两者共表达的重组菌株 ,提示在以后的疫苗研究实践中 ,可以考虑将分别表达CS6与CTB的重组菌株按一定比例混合 ,组成联合疫苗 ,用于细菌性腹泻的免疫预防。本研究结果对于细菌性腹泻基因工程多价疫苗的构建有指导意义。 展开更多
关键词 肠毒素类 大肠杆菌 细菌性腹泻 基因工程多价疫苗 霍乱霉素 沙门菌 伤寒 宿主-质粒平衡致死系统
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