氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对THP-1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流入的影响,探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流入中的作用。方法:用50 mg/L oxLDL分别孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和W estern印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况;用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入。结果:50mg/L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),THP-1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调,油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加,液体闪烁计数发现THP-1巨噬细胞胆固醇流入增加,分别为23.5%、27.8%、39.7%、44.1%和49.7%。结论:oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调,并使细胞胆固醇流入增加。

槲皮素对巨噬细胞胆固醇流入和流出的调节作用

目的研究槲皮素抑制RAW264.7巨噬细胞胆固醇累积、胆固醇流入及促进胆固醇流出作用及其机制。方法氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导产生的胆固醇累积用油红O染色法进行检测,同时用总胆固醇(TC)特定试剂盒检测了RAW264.7巨噬细胞中TC含量。流入和流出均采用荧光检测法,并用RT-PCR检测了流入流出相关基因的表达情况。结果槲皮素能够显著抑制RAW264.7巨噬细胞胆固醇累积及胆固醇流入,同时能够显著促进胆固醇流出,RT-PCR结果显示其能够提高过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)、ATP结合盒A1和G1(ABCA1,ABCG1)亚家族的m RNA表达水平,同时抑制清道夫受体(SR)-A1和SR-A2的表达水平。结论槲皮素可能是一种新型的胆固醇累积抑制剂,其作用可能是通过激活PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路和抑制SR-A1和SR-A2的表达实现的。

姜黄素对LPS和IFN-γ诱导的M1型巨噬细胞脂质转运及炎症的影响

目的观察姜黄素对经LPS和IFN-γ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)脂质转运及炎症的影响。方法LPS和IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞12 h成M1表型。M1巨噬细胞分别进行不同处理:①不同浓度姜黄素(0,6.25,12.5μmol/L)对M1巨噬细胞进行干预;②不同浓度姜黄素(0,6.25,12.5μmol/L)和30 mg/L oxLDL共同干预M1巨噬细胞;③不同浓度姜黄素(0,6.25,12.5μmol/L)和NBD胆固醇与Apo-AI共同干预M1巨噬细胞;④20μmol/L GW9662与12.5μmol/L姜黄素共同干预经oxLDL或NBD胆固醇与Apo-AI刺激的M1巨噬细胞。分别采用油红O染色、BODIPY荧光染色方法检测M1巨噬细胞胆固醇流入/流出,用RT-PCR、Western Blot检测IL-1β、IL-6、ABCA1、CD36、PPARγmRNA及蛋白表达,用ELISA检测TNF-α、MMP-9炎症因子表达。结果姜黄素能减轻M1型巨噬细胞及oxLDL刺激的M1型巨噬细胞的炎症反应(P<0.05);姜黄素能增加oxLDL刺激的M1型巨噬细胞胆固醇流入及NBD胆固醇与Apo-AI介导的M1型巨噬细胞胆固醇流出(P<0.05);姜黄素能上调oxLDL刺激的M1型巨噬细胞CD36和PPARγ表达,姜黄素能上调NBD胆固醇与Apo-AI介导的M1型巨噬细胞ABCA1表达,减少TNF-α和MMP-9的表达(均P<0.05)。结论姜黄素可通过活化PPARγ通路增强M1型巨噬细胞处理有害脂质的能力,促进脂质的加工、清理和去除,维持胆固醇稳态,并减轻其炎症反应。

他汀类药物引起新发糖尿病风险升高的病理机制:LDLR介导胆固醇内流引起胰岛β细胞“脂毒性”

高血脂是心血管病与糖尿病的共同危险因素,然而临床上使用他汀类药物控制血脂却增加了患者新发糖尿病的风险。相反,家族性高胆固醇血症（FH）病人有较高的血脂并长期使用他汀类药物,这类患者罹患糖尿病的风险却降低了。考虑到FH病人主要是由低密度脂蛋白受体（LDLR）突变引起的,这使得LDLR介导的胆固醇代谢是否参与糖尿病的发病成为疑问。他汀类药物能够上调肝脏和某些组织的LDLR表达并促进胆固醇内流,有可能引起某些胰岛细胞＂脂毒性＂的发生。胰岛β细胞对胆固醇较敏感,少量胆固醇蓄积就能造成细胞功能障碍。本文旨在讨论LDLR在他汀类药物诱发的糖尿病中的病理角色,为降低该药的不良反应、促进2型糖尿病的防治提供新的思考。

表松脂醇抑制巨噬细胞泡沫化的作用及潜在机制研究

目的探究表松脂醇在抗巨噬细胞泡沫化方面的作用及潜在机制。方法采用倒置显微镜拍照和用酶标仪检测吸光度等方法,评价表松脂醇对泡沫细胞形成的抑制作用。采用荧光检测法检测胆固醇流入及流出情况,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测流出、流入相关基因的表达情况。结果表松脂醇能够显著抑制RAW264.7巨噬细胞由氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的胆固醇累积,能够显著增强由高密度脂蛋白(HDL)介导的胆固醇流出,同时还能够显著抑制胆固醇的流入。RT-PCR结果表明,表松脂醇能够上调过氧化物增殖激活受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)和ATP结合盒转运子G1(ABCG1)基因m RNA的水平,下调清道夫受体A1(SR-A1)和A2(SR-A2)基因m RNA的水平。结论表松脂醇是一种新的泡沫细胞形成抑制剂,其作用可能是通过上调PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路和下调SR-A1、SR-A2实现的,其可能在防治动脉粥样硬化方面具有潜在的作用。