Studies of Al metabolism in animal by accelerator mass spectrometry

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地黄益智方对老年性痴呆模型大鼠细胞周期蛋白异常表达的影响

目的观察地黄益智方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠细胞周期蛋白异常表达的影响,并探讨其机制。方法 120只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组及地黄益智方小、中、大剂量组。采用大鼠双侧海马CA1区注射Aβ1-40复制老年性痴呆模型,造模24 h后开始灌胃给药,地黄益智方小、中、大剂量组给药量分别为0.12、0.24、0.48 g浸膏/(100 g.d),空白组和模型组给予等体积的蒸馏水,连续4周。免疫组化法动态检测各组大鼠大脑皮层及海马cyclin D1、cyclin E、p16、CDK6的表达变化。结果 Aβ1-40造模后24 h可见cyclin D1、CDK6表达升高,造模后2周时cyclin E表达升高,造模后4周时p16表达升高;小、中、大剂量地黄益智方可改善Aβ1-40诱导cyclin D1、cyclin E、p16以及CDK6异常表达。结论老年性痴呆模型大鼠早期存在脑细胞周期蛋白异常表达现象,地黄益智方对异常表达的cyclin D1、cyclin E、p16及CDK6有一定改善作用。

盐酸多奈哌齐对D-半乳糖致原代培养神经元损伤的保护作用及其机制

目的:探讨盐酸多奈哌齐(安理申)防治D-半乳糖致原代培养神经元损伤的作用机制。方法:在原代培养第6d,以50mM D-半乳糖(D-gal)作用神经元72h造成自由基损伤模型,用10％盐酸多奈哌齐药物血清防治损伤。倒置显微镜下观察神经元的生长发育形态,MTT法在酶标仪上检测神经元代谢率,PI染色在流式细胞仪上检测神经元凋亡构成比,HE染色观察神经元形态、形态计量神经突起密度,RT-PCR检测糖醛还原酶信使RNA(AR-mRNA)的含量。t检验,比较正常对照神经元、受D-gal攻击神经元和受D-gal攻击同时得到盐酸多奈哌齐防治神经元之间的差别。结果与讨论:受D-gal攻击而受损伤的神经元,生长发育显著迟缓,盐酸多奈哌齐防治使其明显恢复;代谢率从0.762±0.030(n=33)降低到0.543±0.064(n=11,P<0.01),盐酸多奈哌齐防治使其回升到0.652±0.028(n=11,P<0.01);凋亡构成比从0.060±0.029(n=19)增高到0.356±0.215(n=19,P<0.01),盐酸多奈哌齐防治使其回降到0.154±0.130(n=19,P<0.01);出现变性坏死的形态变化,盐酸多奈哌齐防治使其好转,但神经突起浆质中出现均匀、细小的颗粒;神经突起密度从0.557±0 0422(n=10)降低到0.468±0.0330(n=10,P<0.01),盐酸多奈哌齐防治使其回升到0.481±0.0387(η=10,P>0.05);无AR-mRNA的表达。

老年性痴呆大鼠模型的研制

目的:研究老年性痴呆病实验动物模型的研制方法。方法:在大鼠腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上,一次性缓慢双侧海马内注射Aβ1-42和Ibo来制作AD模型。结果:光镜观察可见模型组大鼠海马神经细胞之间有大量的SP沉淀存在和NFT形成,大鼠行为学研究提示:模型组大鼠与正常组大鼠相比平均逃避潜伏期明显延长,通过安全区平均次数明显减少,逃避刺激的潜伏期显著延长。结论:腹腔注射D-Gal使其急性衰老并双侧海马内一次性缓慢注射Aβ1-42和Ibo混合液后,神经组织中可出现SP及NFT,并引起大鼠学习、记忆功能下降。

针刺对D-半乳糖复制阿尔茨海默病模型大鼠脑组织中β-AP、Tau蛋白表达的影响

目的:探讨针刺对D-半乳糖复制阿尔茨海默病模型大鼠脑组织中β-AP、Tau蛋白表达影响。方法:对动物模型,选取百会、大椎、肾俞、太溪、足三里等穴,运用电针仪刺激20 min,强度以大鼠肢体轻度抖动为度。结果:模型组与空白对照组相比,大鼠体质量有显著性差异(P<0.05),大鼠脑组织中β-AP含量明显增高,(P<0.01),模型组Tau蛋白含量明显增多(P<0.01);针刺组与模型组比较,大鼠体质量减轻无明显变化(P>0.05),提示针刺干预对改善老年痴呆大鼠体质量减轻症状疗效并不显著,大鼠脑组织中β-AP含量明显下降(P<0.01);针刺组Tau蛋白含量显著降低(P<0.01)。结论:针刺能够阻断β-淀粉样多肽合成和沉积,并能抑制微管理相关蛋白Tau蛋白表达,其机制有待进一步研究。

依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马4-羟基壬烯醛表达的影响

目的:探讨依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)及4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,HNE)表达的影响。方法:采用单次双侧脑室注射Aβ蛋白的方法制备老年痴呆大鼠模型,分依达拉奉治疗组(1次/d,3 mg/kg,皮下注射)、空白对照组和模型组。自手术前1 d起给药,第10 d,各组分别进行Morris水迷宫检测后,处死动物并取脑,生物化学方法测定大鼠海马组织MDA含量,免疫组织化学技术检测海马HNE表达。结果:模型组与对照组相比水迷宫实验潜伏期时间显著延长,目的象限停留时间百分比降低,前脑组织MDA含量增加,海马CA1区HNE表达增多。依达拉奉组较模型组水迷宫结果显著改善,前脑组织MDA含量减少,且海马CA1区HNE表达显著减少。结论:依达拉奉能提高老年痴呆大鼠的学习和记忆能力,这种作用可能通过降低MDA及HNE等自由基氧化损伤产物而得以实现。

单侧穹窿伞损伤对老年大鼠空间记忆及海马胆碱能纤维的影响

对老年大鼠行单侧穹窿伞横断术，术后２周，用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫试验及乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）染色观察大鼠的学习记忆及海马ＡｃｈＥ阳性纤维密度的变化。结果表明：海马ＣＡ１、ＣＡ３及齿状回的ＡｃｈＥ纤维明显减少，而且减少程度与学习记忆的下降成正相关关系。说明该模型既具有老年性痴呆的主要临床表现──学习记忆下降，另一部分模拟了该病的主要神经病理改变──基底前脑的胆碱能纤维溃变。

肾虚型老年痴呆大鼠模型的复制

目的复制肾虚型老年痴呆大鼠模型。方法采用灌胃给予氢化可的松(15mg/kg)复合侧脑室注射β-淀粉样蛋白(25-35)(amyloid beta 25-35,Aβ25-35)10μg复制肾虚型老年痴呆动物模型,每5d记录一次大鼠的体质量,通过体质量变化、自主活动、免疫学指标以及血浆中睾酮和皮质酮含量的变化,评价该模型肾虚的形成情况;通过奖励性操作式条件反射任务和水迷宫实验结合脑组织病理学的变化,评价该模型学习记忆的变化。结果与对照组比较,肾虚组和肾虚型老年痴呆组大鼠体质量增长缓慢,自主活动度显著降低,胸腺和脾指数显著降低,血清中睾酮和皮质酮含量显著降低(P<0.05,或P<0.01)。在水迷宫实验和奖励性操作式条件反射任务中,与对照组比较,肾虚型老年痴呆大鼠的学习记忆能力显著受损(P<0.05,P<0.01)。结论灌胃给予氢化可的松(15mg/kg)复合侧脑室注射Aβ25-35(10μg)可以用于复制肾虚型老年痴呆模型,既可以使Wistar大鼠产生一系列肾虚表现,又可以造成其学习记忆功能障碍。

补肾益智方对老年性痴呆大鼠学习记忆能力保护作用的观察

为寻求防治老年性痴呆的有效措施 ,运用Morris水迷宫评价了中药补肾益智方 (由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参等组成 )对由D_半乳糖致亚急性衰老加上Meynert核损毁所致阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力的保护作用。结果表明 :补肾益智方能够改善模型大鼠的学习记忆成绩 ,包括缩短模型大鼠在Morris水迷宫中寻找到平台的逃避潜伏期 (P <0 .0 1) ,延长其在原平台象限游泳的距离 (P <0 .0 5)。

醒脑益智方对老年性痴呆模型大鼠大脑皮质及海马区nNOS表达的影响

目的：观察醒脑益智方对老年性痴呆模型大鼠大脑皮质及海马区nNOS表达的影响，以研究其作用效果反机制。方法：将Wistar大鼠随机分为6组，按文献复制AD大鼠模型，并用脑复康组进行对比研究。结果：与模型组相比差异有显著意义，P〈0．05～0．10；与阳性对照组相比差异有显著意义，P〈0．05。结论：醒脑益智方能改善模型大鼠海马区NOS神经元的损伤，激活cNOS的活性，促进NO的合成，改善记忆调节过程，可能是本方治疗AD的作用机制之一。

补肾益智方阻抑老年性痴呆大鼠海马突触病理性重构的研究

应用体视学定量分析方法 ,观察补肾益智方 (由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参、首乌等组成 )对D -半乳糖致亚急性衰老合并Meynert核损毁的老年性痴呆 (又称阿尔茨海默病 ,Alzheimer’sdisease ,AD)模型大鼠海马齿状回分子层突触病理性重构的影响。结果显示 ,补肾益智方灌胃组大鼠突触数密度较AD模型组明显增加 (P <0 .0 1)、面密度和平均面积显著减少 (P <0 .0 1) ,而与正常对照组比较无明显差异 (P >0 .0 5) ,表明该方具有阻止AD模型大鼠海马突触病理性重构的作用 。

胶质纤维酸性蛋白在老年痴呆大鼠海马中的表达

为探讨慢性缺血痴呆鼠学习减退与海马内星形胶质细胞表达的关系,基于老年大鼠慢性脑缺血痴呆模型,采用免疫组化技术及迷宫实验,定量分析海马星形胶质细胞变化与学习能力、记忆能力的关系。结果发现,慢性缺血痴呆鼠海马CAl区GFAP阳性细胞数目明显增多,胞体肥大,突起增粗、变长,与对照组相比有显著意义(P<0.05),Y型迷宫测试结果显示,痴呆组大鼠的学习、记忆能力与对照组相比,明显下降。提示海马星形胶质细胞可能参与慢性缺血痴呆大鼠的学习记忆功能。

补肾益智方对老年性痴呆大鼠突触传递长时程增强的影响

观察补肾益智方 (蛇床子、枸杞子、女贞子、人参等组成 )对老年性痴呆 (又称阿尔茨海默病 ,Alzheimer’sdisease ,AD)模型大鼠突触传递长时程增强现象 (long_termpotentiation ,LTP)的影响 ,旨在探讨该方治疗AD作用的神经生物学机制。应用D -半乳糖致亚急性衰老合并Meynert基底核损毁建立AD模型大鼠 ,用补肾益智方对AD大鼠灌胃治疗 4周 ,采用电生理学方法 ,检测大鼠海马齿状回强直刺激诱发的LTP的变化。结果表明 :强直刺激后 ,各组间兴奋性突触后电位增强差异不明显 (P >0 .0 5) ,补肾益智方高、低剂量组群体峰电位幅度增强较模型组明显提高 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1)。

鼠神经生长因子对老年痴呆的疗效及血清细胞因子的影响

目的分析鼠神经生长因子对老年痴呆患者临床疗效及血清细胞因子的影响。方法郑州大学第五附属医院收治的120例老年痴呆患者为研究对象,随机法分为对照组和实验组,实验组除常规治疗外,施以肌内注射鼠神经生长因子,共治疗8周,以相关量表和方法评估患者疗效及血清细胞因子含量。结果与对照组相比,实验组患者认知功能、日常生活自理能力、生活质量均出现显著提升(P<0.05);血清中相关细胞因子IL-1、IL-6、CRP、TNF-α水平均出现显著下降(P<0.05)。结论鼠神经生长因子有可能通过对部分有害细胞因子的抑制,从而改善患者的认知功能和日常生活能力,缓解痴呆症状。

针刺对铝中毒SD痴呆大鼠脑组织内细胞凋亡及Bcl-2影响的实验研究

目的:从细胞凋亡及凋亡相关基因的蛋白表达方面探讨针刺治疗老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)的作用机理。方法:采用AlCl3中毒法制成SD大鼠老年性痴呆模型,连续针刺治疗20d。通过空白组、模型组、西药组及针刺组之间的对照,观察针刺该组穴位对大鼠"Y"型电迷宫行为学改变,应用TUNLE法和免疫组化法对所设各组SD大鼠脑组织细胞凋亡的数目及Bcl-2免疫阳性细胞进行观察。结果:治疗后,Bcl-2免疫阳性细胞数西药组、针刺组与模型组有显著性差异(均P<0.05),西药组、针刺组多于模型组;细胞凋亡数目西药组、针刺组与模型组有显著性差异(均P<0.05),西药组、针刺组少于模型组。结论:铝中毒法复制AD大鼠可行。针刺可减少老年性痴呆大鼠DNA双键断裂(TUNLE阳性),提高海马皮层Bcl-2的含量。

补肾法中药调控ERK/MAPK信号通路对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠模型的神经保护作用研究

目的 观察补肾法中药通过调控ERK/MAPK信号通路关键靶点蛋白,探讨其对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的神经保护作用机制。方法 取36只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组,每组12只。采用Aβ25-35侧脑室注入建立AD大鼠模型,中药组予补肾中药,模型组及假手术组予蒸馏水灌胃,观察各组大鼠认知记忆能力、海马神经元凋亡、p-ERK1/2蛋白表达情况。结果 1)AD认知记忆功能检测:与模型组相比,中药组大鼠定位航行实验显示,平均速度无显著差异(P>0.05),潜伏时间明显缩短,学习能力明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。2)AD海马神经元凋亡检测:光镜下观察尼氏染色结果显示,与模型组相比,中药组神经元凋亡数量明显减少(P<0.01)。3)ERK/MAPK信号通路关键靶点p-ERK1/2蛋白表达的检测:Western blotting检测结果显示,与假手术组相比,模型组p-ERK1/2蛋白的表达均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药组p-ERK1/2蛋白的表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 补肾法中药对Aβ25-35诱导的AD模型大鼠海马神经元损伤具有保护作用,可明显改善AD模型大鼠认知和记忆能力,减少海马神经元的凋亡,其作用机制可能调控p-ERK1/2蛋白表达,激活ERK/MAPK信号通路有关。

复方地黄防治AD大鼠海马CA_1区神经元突触超微结构改变的实验研究

目的 研究复方地黄对AD大鼠海马CA1区神经元突触超微结构改变的影响。方法 在腹腔注射D -半乳糖造成大鼠衰老的基础上 ,海马注射Aβ1-40 造成拟老年性痴呆学习记忆损害模型 ,灌胃复方地黄水溶液 ,观察突触超微结构变化。结果 Morris水迷宫筛选模型 ,统计复方地黄对老年性痴呆大鼠海马神经元突触超微结构的影响。结论 复方地黄能够保护神经元突触超微结构 。

健脑益智汤和益肾通窍汤对老年性痴呆作用机制的实验研究

目的 研究健脑益智汤（ＹＮＹＺ）和益肾通窍汤（ＹＳＴＱ）对痴呆大鼠的行为学、脑内递质及海马形态学的影响。方法 跳台实验、迷路实验、双缩法、紫外线分光光度法。结果 喜得镇、健脑益智汤和益肾通窍汤对改善大鼠行为学、过氧化脂质（ＬＰＯ）、谷氨酸（ＧＬＵ）、胆碱酯酶（ＡＣＨＥ）、Ｂ型单胺氧化酶（ＭＡＯ－Ｂ）有明显效果，而且对海马形态学有保护作用。结论 健脑益智汤、益肾通窍汤可提高大鼠脑内ＬＰＯ、ＧＬＵ、ＡＣＨＥ的表达，降低ＭＡＯ－Ｂ的表达和保护海马形态，可能是其对老年性痴呆的作用机理之一。

大鼠老年性痴呆模型神经行为学观察

目的 :探讨损伤双侧基底核老年性痴呆 (AD)大鼠模型神经行为学变化。方法 :将 2 0月龄雄性Wistar大鼠 2 0只随机分为模型组与对照组各 10只 ,将鹅膏蕈酸 (IBO)注入模型组大鼠双侧基底核中 ,制成AD大鼠模型。用Morris水迷宫 (MWM )技术对对照组、模型组进行神经行为学测试。结果 :模型组逃避潜伏期 (EL)明显延长 ,中环游泳路程、4 0cm环游泳路程、跨平台次数较对照组显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :损伤大鼠基底核能使其空间记忆明显下降。

BMSCs移植对自发性AD鼠神经元及突触变化影响机制的研究

目的:探索骨髓基质干细胞移植对自发性老年痴呆鼠神经元变性及突触可塑性变化的影响。方法:无菌将Wistar大鼠骨髓基质干细胞进行培养及鉴定,实验分为正常对照组、DMEM移植对照组、骨髓基质干细胞移植组。骨髓基质干细胞移植组在PKH26标记后进行尾静脉回输,再用RT-PCR方法、组织形态检测、电镜观察等方法进行研究骨髓基质干细胞移植对老年痴呆鼠神经元变性及突触可塑性的变化。结果:通过RT-PCR方法、组织形态检测、电镜观察,骨髓基质干细胞移植组的神经元细胞数,其得到了补充;同时骨髓基质干细胞分泌的神经营养因子,体内微环境得到改善,进而形成有利于修复的微环境,未坏死的神经元得以相应的保护。其明显高于DMEM移植对照组,接近正常对照组神经元存活细胞数。改善后的微环境,有利于其与周围细胞建立有效的突触联系。结论:骨髓基质干细胞移植对自发性老年痴呆鼠神经元变性及突触可塑性具有保护作用。