低强度脉冲超声波对髁突软骨细胞炎症状态的作用研究

目的 观察低强度脉冲超声波对白介素-1β制造的大鼠髁突软骨细胞炎症模型中MAPK信号通路相关因子磷酸化的表达变化。方法 二次酶消化法分离髁突软骨细胞并完成鉴定。将分离出的大鼠髁突软骨细胞随机分为3组,加入3种不同浓度的IL-1β处理并进行Ⅱ型胶原与MMP-13免疫细胞化学染色,筛选出最佳致炎浓度。再次将所提取的大鼠髁突软骨细胞随机分为3组:NC组、OA组、LIPUS组,处理后对Ⅱ型胶原、p38、p-p38、ERK1/2、pERK1/2进行免疫细胞化学染色,观察蛋白表达情况。结果(1)成功提取大鼠髁突软骨细胞。(2)IL-1β:10 ng/mL组Ⅱ型胶原表达量降低最明显,差异有统计学意义(P<0.05),MMP-13表达量升高最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)OA组与LIPUS组Ⅱ型胶原表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05),OA组降低更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。3组的p38、ERK1/2表达量无明显差异(P>0.05)。OA组与LIPUS组p-p38、p-ERK1/2表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05),OA组升高更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)二次酶消化法成功提取大鼠髁突软骨细胞。(2)10 ng/mL为IL-1β最佳致炎浓度。(3)LIPUS处理可减少炎性髁突软骨细胞中Ⅱ型胶原的降解,抑制了MAPK通路相关因子p38、ERK1/2的磷酸化。

硬脑膜修复生物膜的大鼠原位脑植入局部神经毒性评价方法

目的采用大鼠原位脑植入模型评价硬脑膜修复生物膜的局部神经毒性,旨在建立脑部原位植入局部神经毒性评价方法。方法选择硬脑膜修复生物膜为研究对象,以上市同类产品为对照品,经大鼠原位脑植入,获取包含颅骨、硬脑膜、植入材料及其周围大脑组织的标本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Fluoro-Jade C(FJC)特殊染色与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光考察植入物周围脑组织的局部组织学反应、神经元降解退行性变与星形胶质细胞增生来综合评价植入物的潜在神经毒性风险。结果植入4周、13周、26周后,与对照品相比,供试品的局部组织学反应均为无刺激反应;FJC染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的神经元降解程度与对照组相比不存在显著性差异;GFAP染色单位面积阳性细胞数量不存在显著性差异(P>0.05),提示供试品的星形胶质细胞增生程度与对照组相比不存在显著性差异。结论可以采用HE染色、FJC特殊染色与GFAP免疫荧光染色联合评价硬脑膜修复生物膜经大鼠原位脑植入后的局部神经毒性。

改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用

目的探讨改良六胺银染色方法在肾组织活检病理中的应用价值。方法随机选取2020年9月至2022年3月80例确诊的肾活检病理穿刺标本(IgA肾病20例,膜性肾病20例,糖尿病肾病20例,微小病变20例)。采用硫代氨基脲改良六胺银染色法,并与常规六胺银染色法进行比较。结果采用改良六胺银染色法,肾小球基底膜及肾小管基底膜的染色强度均提升;且不同疾病、不同部位染色强度差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良六胺银染色法,能提升染色的敏感性和特异性,具有方便、快捷、可靠等特点,适合临床应用。

多组织对照体系在HE染色和特殊染色质控中的应用

目的探索多组织对照在HE染色和特殊染色质控中的应用。方法使用本科室构建的多组织对照体系,作为染色质控品应用于HE染色及常用的特殊染色项目。结果多组织对照可用于每日HE染色质量预检测。HE染色优良时(试剂新鲜)细胞核蓝色鲜艳、胞质红色明亮,背景干净;染色不良时(试剂陈旧),细胞核细胞质的染色变暗,结肠的上皮组织细胞间隙变得灰蓝不透亮;多组织对照使用在日常特殊染色,可对改良Gomori染色、Masson染色、PAS染色、AB染色、改良Weigert染色、Hexamine silver染色等多种特殊染色项目进行染色质控。结论多组织对照使用在常规HE染色及部分特殊染色项目,可在同一染色中提供多种组织的阳性对照及阴性对照,使检测结果更准确、更稳定,取得满意染色质控效果,值得推广应用。

心肌纤维化特殊染色方法比较与优化

目的 对目前已有心肌纤维化染色方法进行优化,弥补目前心肌纤维常用染色方法在定量分析中存在的胶原纤维漏读及误读等问题,为心肌纤维化半定量及诊断提供参考。方法 利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT~(R141W)基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色(Masson’s trichrome, Masson)染色法、天狼星红(picric sirius red, PSR)染色法、天狼星红-品红(van Gieson, VG)染色法、天狼星红-固绿(sirius red/fast green staining, SR/FG)染色法染色,利用Image J 2.1.0软件对胶原纤维面积进行定量比较,并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染3个方面对SR/FG染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。结果 4种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的SR/FG染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5 min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1 h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。结论 本文优化后的SR/FG染色法较其他传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮、颜色对比明显、稳定性佳、方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。

特殊染色联合免疫组化染色在肿瘤诊断中的应用与价值分析

背景肿瘤的准确诊断对患者治疗和预后至关重要。特殊染色和免疫组化染色各具优势,但两者单独使用时仍存在局限性。将两者相结合可能提供更全面、更准确的诊断信息,但其临床应用价值尚需系统评估。目的探讨特殊染色联合免疫组化染色在肿瘤诊断中的应用价值,评估其诊断效能。方法选取2021年1月至2023年12月在郑州颐和医院接受诊治的80例肿瘤患者,包括转移性肿瘤患者25例、原发性肝癌患者20例、血管瘤患者15例、内胆管瘤患者20例。对患者组织样本分别进行免疫组化染色、Masson染色、PAS染色和刚果红染色。以病理确诊结果为金标准,比较各染色方法的诊断效能,包括准确度、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。采用ROC曲线分析各染色方法的诊断效能。结果特殊染色联合免疫组化染色的ROC曲线下面积最大(0.943),显示出最高的诊断效能。该方法的准确度为97.50%,敏感度为98.57%,特异度为90.00%,均在不同程度上高于单一染色方法(P<0.05)。单独使用免疫组化染色时的准确度为92.50%,敏感度为95.71%,特异度为70.00%。Masson染色、PAS染色和刚果红染色的准确度分别为82.50%、87.50%、80.00%,均低于特殊染色联合免疫组化染色(P<0.05)。结论特殊染色联合免疫组化染色在肿瘤诊断中具有较高的应用价值,能够显著提高诊断的准确度、敏感度和特异度,优于单一染色方法。该联合技术可为临床肿瘤诊断提供更可靠的依据。

宫颈脱落细胞特殊染色技术在宫颈病变筛查中的应用价值

目的:探讨宫颈脱落细胞特殊染色技术在宫颈病变筛查中的临床应用价值。方法:选取2022年8月-2023年5月在山东第二医科大学附属医院及潍坊市人民医院进行宫颈病变筛查的女性共2000例,所有对象均进行宫颈脱落细胞特殊染色技术(FRD)检测、人乳头瘤病毒(HPV)和液基薄层细胞(TCT)检测。3种筛查方法任一结果阳性病例行阴道镜检查,阴道镜下有病变者行宫颈活检。以宫颈组织病理结果为金标准,比较FRD、TCT、HPV、HPV+TCT组的检测效能及受试者工作特征曲线下面积(AUC)。结果:FRD检测灵敏度为83.8%、特异度为90.0%,Kappa值为0.618,AUC为0.869;TCT检测的灵敏度为65.1%、特异度为89.5%,Kappa值为0.485,AUC为0.773;HPV检测的灵敏度为94.6%、特异度为71.7%,Kappa值为0.387,AUC为0.832;HPV+TCT联合检测的灵敏度为98.9%、特异度为70.2%,Kappa值为0.391,AUC为0.846。结论:宫颈脱落细胞特殊染色试验用于宫颈病变筛查有较好的效果,可用于基层宫颈病变筛查。

宫颈脱落细胞特殊染色技术在宫颈癌筛查中的应用效果

目的探讨宫颈脱落细胞特殊染色技术在宫颈癌筛查中的应用效果。方法选取本院妇科门诊101名宫颈癌筛查女性为研究对象,均进行液基薄层细胞(TCT)和宫颈脱落细胞特殊染色技术检查,以阴道镜下宫颈活检病理结果为金标准,比较两种检查方法的诊断效能。结果宫颈组织病理学检查显示阳性35例,阳性率为34.7%;TCT检查的敏感度为31.7%、特异度为61.0%、阳性预测值为54.3%、阴性预测值为37.9%、准确度为43.6%,低于宫颈脱落细胞特殊染色技术的46.5%、74.1%、57.1%、65.2%、62.3%。结论宫颈脱落细胞特殊染色技术为无损伤检查,具有便携性高、操作简单、检测快速、经济实用和不依赖病理医师等特点,适用于人群普查或检测技术设备相对落后的偏远地区宫颈癌普查,也适合基层医院宫颈癌普查。

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用

目的探讨多种特殊染色技术在软骨细胞中的染色规律及其应用价值。方法选取出生7 d内的C57BL/6J小鼠12只,处死后取双侧膝关节软骨行软骨细胞原代培养,并行Ⅱ型胶原免疫荧光鉴定,取5代以内的原代细胞制作细胞爬片,细胞爬片制备完成后行HE染色、番红O-固绿双染色、SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色,观察软骨细胞组织形态变化,并对几种染色方式进行比较。结果 HE染色中细胞核呈紫蓝色,细胞质呈粉红色,细胞形态结构清楚;番红O-固绿双染色中细胞核呈粉红色,细胞质呈蓝绿色,细胞形态结果较清晰;SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色时,衰老软骨细胞呈绿色,未衰老细胞无着色;Ⅱ型胶原免疫组化染色时,Ⅱ型胶原呈棕黄色,细胞核呈紫蓝色。结论 HE染色和番红O-固绿双染色可以清晰分辨细胞核和细胞质等细胞结构,对单个细胞形态的显示比较清楚;SA-β半染糖苷酶半乳糖苷酶衰老染色可以显示出衰老细胞的数量及衰老的程度;Ⅱ型胶原免疫组化染色可以对Ⅱ型胶原进行定位与定量。

先天性肾盂输尿管连接部梗阻的临床病理分析

目的研究先天性肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)的发病因素。方法采用常规病理、特殊染色、免疫组化染色和电镜检查,观察95例UPJO的病理改变。结果60例(63.2%)UPJO病例平滑肌纤维中见较多纤维组织无序增生,使平滑肌纤维排列紊乱,肌层厚度明显增加,电镜示平滑肌细胞内线粒体肿胀,细胞间隙内充满了胶原纤维;23例(24.2%)UPJO病例黏膜息肉形成或息肉样增生,12例(12.6%)UPJO病例为机械性梗阻。结论UPJO的形成有多方面的原因,局部的纤维组织的增生及平滑肌细胞的发育异常是UPJO的主要原因。

“新生食管”再生过程的组织学观察

背景与目的:在器官及组织重建过程中,由于植入材料的组织相容性及材料界面不同可诱发不同的愈合结果。本研究通过观察新型生物材料人工食管植入后诱导机体修复、再生“新生食管”的生理过程,从而探讨“新生食管”的愈合机制。方法:以病理大切片技术及特殊染色法对术后1、3、6、12、24个月的实验犬“新生食管”标本进行组织学研究,观察其组织结构的动态变化、食管重塑及其组织结构再生的过程。结果:人工食管植入后早期可替代食管缺损,术后1个月左右人工食管完全脱落;诱导的“新生食管”于术后3～6个月完成粘膜爬覆,12个月左右出现粘膜下肌层、神经纤维、粘液腺、毛细血管等结构的再生,并完成纤维结缔组织层的重塑;“新生食管”术后3～6个月新生管腔狭窄较明显,12个月后狭窄缓解。结论:新型生物材料人工食管通过早期替代并诱导纤维结缔组织沉积、裹覆而形成“新生食管”;“新生食管”经过1年左右粘膜上皮爬覆、肉芽组织增生、血管、组织结构形成等过程而再生出可完成食物正常通过的再生食管;“新生食管”的狭窄与疤痕过度增生及收缩有关。

可注射海藻酸钙水凝胶的制备研究

海藻酸钙水凝胶因其良好的生物相容性广泛应用于组织工程支架材料的研究。以海藻酸钠(SA),碳酸钙,葡萄糖酸内酯(GDL)为原料,通过原位相转变制备可注射凝胶,用于软骨组织微创修复材料的研究。测定了单一变量条件下不同海藻酸钠浓度、f值(钙离子与羧基的摩尔比)及n值(葡萄糖酸内酯与钙离子的摩尔比)对海藻酸凝胶力学强度、溶胀率、浸提液pH值等的影响,从而获得各组分最适的配比;另外,通过原位接种软骨细胞,研究了软骨细胞在凝胶中的生长行为。综合海藻酸钙凝胶性能,最终确定海藻酸钠浓度为2.5%、f=0.5及n=0.6为最佳配比;细胞培养结果表明软骨细胞在凝胶中具有较高的活性且维持了其软骨细胞形态,证实了研究制得的海藻酸钙水凝胶是一种优良的可注射软骨组织工程支架材料。

胶原纤维特殊染色法在心肌纤维化诊断中的应用比较

目的观察对比Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色法在评价心肌纤维化中的阳性表达及分布特征。方法取10例心脏移植受者纤维化心肌标本分别进行Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色,镜下观察对比胶原纤维的沉积特点。结果 Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色均能清楚地标记出胶原纤维的分布及排列特点;3种染色方法显示出的心肌纤维化面积及胶原纤维总量,在统计学上无显著性差异(P>0.05);但苦味酸-天狼猩红染色法能够在偏振光显微镜下明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,Masson及VG染色法则不能区分。结论苦味酸-天狼猩红染色较Masson三色染色和VG染色法,能够更好的评价心肌纤维化程度及其类型。

多种特殊染色法在骨关节炎组织形态学研究中的应用比较

目的探讨多种特殊染色法在骨关节组织中的染色规律及其在骨关节炎形态学研究中的应用价值。方法 6月龄健康新西兰大白兔20只,随机分为正常组和造模组各10只,根据改良Hulth法造模,6周后膝关节取材。对标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。分别采用HE、番红-固绿、AB-PAS、甲苯胺蓝、Van Gieson染色和Mallory染色,观察骨关节组织的形态学变化,并对几种染色方法进行比较。结果 HE染色显示关节一般组织形态结构,可见模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理变化;番红-固绿染色法中软骨和软骨下骨的界限(黏合线)以及潮线显示清晰,软骨基质中糖胺聚糖含量减少,纤维成分增多;AB-PAS染色显示骨关节炎软骨基质糖胺聚糖尤其是酸性糖胺聚糖含量减少;甲苯胺蓝染色显示骨关节炎软骨的酸性糖胺聚糖减少;Van Gieson染色和Mallory染色可显示骨关节组织中的胶原纤维,但组织结构界限不够清晰。结论在骨性关节炎的组织形态学研究中,通过常规HE染色,结合番红-固绿染色法和AB-PAS染色法,能较客观全面地获得关节组织形态学相关信息。

钟状晚期牙胚和牙及牙周组织的特殊染色应用探讨

目的:探讨钟状晚期牙胚和成熟牙及牙周组织的特殊染色应用。方法:钟状晚期的人牙胚和成年大鼠的牙及牙周组织石蜡切片,用改良的Gomori和Mallory染色法染色,镜检染色结果。结果:改良Gomori染色,可将钟状晚期牙胚中的釉质基质与牙本质基质、牙及牙周组织中的硬组织与软组织、骨与软骨、染成2种不同的颜色,便于识别和区分。各种组织结构和细胞形态清晰。结论:牙发育和牙及牙周组织教学科研切片,用改良的Gomori染色,利于观察研究,取得满意结果。

规范化特殊染色技术对肺真菌感染性疾病病理诊断的意义

目的探讨规范化特殊染色技术在肺真菌感染性疾病病理诊断中应用的意义。方法选取2011年9月~2016年3月北京朝阳医院最终病理诊断为肺真菌感染性疾病104例,行HE染色、HE染色联合传统手工特殊染色法染过碘酸雪夫氏染色(PAS)及六胺银和HE染色联合全自动特殊染色法染PAS及六胺银,将两种特染技术规范化比较,镜下观察分析结果(均为初次染色结果,不包括复染结果),以最终病理诊断结果为标准,与临床初诊结果比较。结果肺真菌感染性疾病确诊率和真菌分型率,从低到高顺序一致,为临床初步诊断(29.8%和19.2%)、HE染色法(32.7%和32.7%)、HE染色联合传统手工特殊染色法染PAS和六胺银(90.4%和87.5%)、HE染色联合全自动特殊染色法染PAS和六胺银(98.1%和94.2%)。这4种方法从两方面比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01),第4种方法与前两种比较方法差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01),与第3种方法比较确诊率差异有统计学意义(P<0.05),分型率差异无统计学意义(P>0.05)。但全自动特殊染色法染PAS及六胺银操作步骤更简单,化学试剂规范化,无人工和环境因素影响,耗时短,脱片和复染张数更少。结论 HE染色法联合全自动特殊染色法染PAS和六胺银更加规范化,有助于提高肺真菌感染性疾病的确诊率和真菌分型率。

免疫组化、特染套染技术在硬化性胆管炎病理诊断中的应用

目的探讨免疫组化、特染套染技术在硬化性胆管炎(sclerosing cholangitis,SC)病理诊断中的应用价值。方法通过对10例临床送检肝穿诊断为硬化性胆管炎组织标本,分别进行CK7染色、Masson染色和CK7+Masson套染,对比观察分别染色和套染对病理医师诊断的影响。结果对硬化性胆管炎病例采用免疫组化、特染套染技术,具有定位准确、结果稳定可靠、制片效果好、便于病理分析与判断等特点。结论免疫组化、特染套染技术在硬化性胆管炎病理诊断中的应用,更便于病理医师观察病变组织胆管及其周围纤维化程度,为病理医师诊断提供可靠的诊断依据。

20例睾丸和附睾腺瘤样瘤的临床病理、特染及免疫组化观察

目的 :用特殊染色、免疫组化的方法探讨男性生殖系统腺瘤样瘤的组织发生、特性及鉴别诊断。方法 :收集睾丸和附睾腺瘤样瘤病例 2 0例 ,选用细胞角蛋白 (CK) ,波纹蛋白 (VIM) ,上皮膜抗原 (EMA) ,癌胚抗原 (CEA) ,S— 10 0蛋白 ,血管VⅢ因子相关抗原 (FVⅢ ) ,平滑肌肌红蛋白 (SMA) ,溶菌酶 (LYS) ,神经原纤维 (NF)作为第一抗体 ,应用免疫组化方法 (SP法 )以及特殊染色 :AB—PAS染色 ,网状纤维染色 ,Masson三色染色 ,观察其临床病理特征。结果 :免疫组化结果显示 2 0例睾丸和附睾腺瘤样瘤的CK及VIM均呈强阳性 ,EMA8例阳性 ( 4 0 % ) ,S— 10 0蛋白 2例阳性 ( 10 % ) ,SMA10例阳性 ,CEA ,EMA ,FVⅢ ,MYO及NF均无表达。AB—PAS染色 2 0例均有阳性反应 ,网状纤维染色见瘤细胞周围网状纤维少 ,Masson三色染色部分间质呈红色。结论 :男性生殖系统腺瘤样瘤为间皮起源 ,附睾及其附近为最常见部位 ,CK ,VIM及AB—PAS染色是睾丸及附睾腺瘤样瘤的阳性标记物 ,特染及免疫组化结果可作为诊断及鉴别诊断的重要参考依据。其生物学行为为良性 ,预后良好。

大鼠弥漫性脑损伤后早期病理学及烯醇化酶表达

目的观察烯醇化酶(NSE)在弥漫性脑损伤(DB I)动物模型中的变化。方法采用M arm arou的弥漫性脑损伤模型,于伤后15m in,30m in,1h,3h,6h,12h,24h取脑组织,运用免疫组化SABC法染色结合北航MAIS图像分析系统进行图像分析。结果打击后15m in,阳性细胞灰度值较正常对照组减弱,随伤后时间的延长,灰度值持续下降,伤后6h为最低(P<0.01),伤后24h仍显著低于正常对照组。伤后12h阳性细胞数明显减少(P<0.01),并持续到伤后24h。特殊染色观察到轴突断端球形改变及神经纤维脱髓鞘改变。结论DB I具有复杂的病理学改变,烯醇化酶(NSE)可用于早期鉴定及损伤经过时间的推断。

乳腺纤维上皮肿瘤性病变中不同纤维分布特点

目的探讨乳腺纤维上皮性肿瘤间质中不同纤维成分的分布特点。方法利用组织学三联特殊染色法检测26例乳腺纤维腺瘤和14例乳腺分叶状肿瘤中不同纤维的染色分布。结果乳腺纤维腺瘤和分叶状肿瘤中肿瘤间质均以网状纤维与胶原纤维两种成分为主,前者主要分布于导管的基膜,后者在导管周围间质中最丰富,二者在不同肿瘤中的分布有明显差异。结论乳腺纤维上皮性肿瘤中纤维分布的特点及其不同纤维的分布差异,为探索乳腺纤维上皮性肿瘤的发生、发展、鉴别诊断提供基础理论依据。