血管新生抑制因子软骨调节素I前体蛋白的剪切加工研究

目的研究参与血管新生抑制因子软骨调节素I(ChM-I)前体加工的前蛋白转化酶(PCs)的种类及其作用,探讨ChM-I蛋白的翻译后加工成熟机制。方法构建ChM-I前体蛋白真核表达质粒并转染多种细胞,Western Blot检测细胞裂解液和培养基上清中ChM-I的表达变化;将ChM-I前体蛋白表达质粒与5种不同前蛋白转化酶表达质粒在ChM-I前体加工缺陷型细胞COS7中共表达,Western Blot检测细胞裂解液和培养上清中ChM-I蛋白的表达。结果 ChM-I前体荧光表达质粒构建成功,可在多种细胞系中表达ChM-I前体蛋白;ChM-I前体蛋白在COS7细胞中无法被有效地剪切加工成成熟ChM-I蛋白,可作为ChM-I加工缺陷型细胞使用;除PACE4以外,Furin、ΔFurin、PC5A和PC7均能显著提高培养液上清中ChM-I的含量,并缓解过量表达的ChM-I前体在细胞中的堆积。结论PCs中的Furin、PC5A和PC7能将过表达的ChM-I前体酶切加工为成熟ChM-I,提示Furin、PC5A和PC7可能在ChM-I蛋白剪切加工成熟过程中发挥重要作用。

TNF-α对人软骨细胞中ChM-Ⅰ表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子-α(tumor neerosis factor alpha,TNF-α)对人软骨细胞中软骨调节素-Ⅰ(chondro-modulin-Ⅰ,ChM-Ⅰ)表达的影响。方法用浓度为5ng/mL、10ng/mL和20ng/mL的TNF-α处理细胞24h、48h和72h,荧光实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blot)方法检测细胞中ChM-Ⅰ在mRNA和蛋白水平的表达量。结果 TNF-α处理后,各浓度组在各时间点均可下调ChM-Ⅰ的表达(P<0.05),且随浓度和时间的增加,下调作用增强,以20ng/mL处理72h时下调作用最强,下调37%;western blot结果与RT-qPCR相一致。结论肿瘤坏死因子-α可下调人软骨细胞中ChM-Ⅰ的表达。

软骨调节素Ⅰ的研究进展

软骨调节素Ⅰ(ChM-Ⅰ)是软骨调节素家族中效应最强的一种软骨特异性生长因子,早期对ChM-Ⅰ的研究主要集中在软骨组织,之后研究显示在其他的无血管组织,如眼、心脏瓣膜、椎间盘中也存在ChM-Ⅰ的表达。由于ChM-Ⅰ具有抑制血管生长的特性,很多以血管异常生长为主要表现的疾病会出现ChM-Ⅰ的表达变化,提示其参与了众多疾病的发生和发展过程。在体外环境下,ChM-Ⅰ可抑制血管内皮细胞DNA合成和管状结构的形成,提示ChM-Ⅰ作为一种血管生长抑制因子以及软骨细胞生长刺激因子,参与了软骨的生长、发育以及成熟、老化的过程。