重楼皂苷Ⅶ、H及总皂苷镇痛抗炎作用研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅶ、H和总皂苷镇痛、抗炎作用。方法:采用小鼠热板法实验和小鼠醋酸扭体实验观察重楼皂苷Ⅶ、H和总皂苷的镇痛作用;采用二甲苯引起的小鼠耳肿胀炎症实验和角叉菜胶引起的小鼠足肿胀炎症实验观察重楼皂苷Ⅶ、H和总皂苷的抗炎作用。结果:重楼皂苷Ⅶ组给药后90min,各剂量组均能提高小鼠的痛阈值,和空白对照组比较,有统计学意义(P<0.01,P<0.05),10、20、40mg/kg组分别在给药后90min、60min、60min起效。重楼皂苷H 10、40mg/kg组在给药后90min提高小鼠痛阈值(P<0.05),重楼总皂苷40mg/kg组在90min后提高小鼠痛阈值(P<0.05)。在小鼠醋酸扭体实验中,重楼皂苷Ⅶ40mg/kg组、重楼皂苷H40mg/kg组的镇痛抑制率分别为27.35%、23.67%,和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。重楼总皂苷组作用不明显。重楼皂苷H 20、40mg/kg及总皂苷1000、2000mg/kg组均能使小鼠耳廓肿胀度明显降低,抑制率分别为34.07%、23.63%、30.22%、47.80%,其差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。重楼皂苷Ⅶ组能减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀,作用较弱。重楼皂苷H 20、40mg/kg及总皂苷1000、2000mg/kg组均能使小鼠耳廓肿胀度明显降低,抑制率分别为25.35%、29.43%、27.82%、44.47%,其差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。重楼皂苷Ⅶ组减轻足肿胀不显著(P>0.05)。重楼皂苷H 20、40mg/kg及总皂苷1000、2000mg/kg组使血清中SOD活力明显升高,MDA和PGE2的含量降低。与空白对照比相比,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);重楼皂苷Ⅶ对各指标无明显影响。结论:重楼皂苷Ⅶ和H具有较好的镇痛作用,重楼总皂苷镇痛作用不明显,重楼皂苷Ⅶ比H作用强、起效快;重楼皂苷H和总皂苷具有较好的抗炎作用,重楼皂苷Ⅶ抗炎作用不明显。重楼皂苷H及总皂苷能使血清中SOD活力升高,MDA和PGE2的含量降低。

川续断皂苷Ⅶ对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的干预作用

目的:评价川续断皂苷Ⅶ对肝细胞脂肪堆积的干预效果。方法:采用1 mmol·L^(-1)油酸作用HepG2细胞24 h建立脂肪堆积模型,以甘油三酯(TG)的含量变化为指标,评价川续断皂苷Ⅶ对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的干预作用。结果与结论:川续断皂苷Ⅶ具有一定的体外降脂活性,其中100μmol·L^(-1)川续断皂苷Ⅶ对TG的清除率达22.6%。

重楼中皂苷类成分抗肿瘤作用及机制研究进展

重楼作为清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的传统中药,近年来因其较好抗肿瘤活性逐渐得到重视,重楼皂苷是重楼最主要的抗肿瘤活性成分。大量科学研究表明其主要活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为抗肿瘤的物质基础,以上成分抗肿瘤机制主要是通过诱导细胞凋亡和自噬、抑制细胞生长增殖和阻滞增殖周期、抑制肿瘤转移、抑制肿瘤耐药,增强化疗敏感性、影响细胞器(线粒体、内质网)的功能活动、抑制肿瘤血管生成等途径抑制多种恶性肿瘤细胞生长。本文对重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ在抗肿瘤研究方面的成果及作用机制进行归纳总结,为重楼皂苷类药物的开发和利用及临床抗肿瘤的应用进一步提供思路。

HPLC测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ的含量

目的：建立同时测定彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ高效液相色谱分析方法。方法：采用高效液相色谱法对彝肤软膏中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ同时进行含量测定：Hypersil ODS2（4．6mm×150mm，5μm）；预柱：IBBM-612111，C-18柱芯；乙腈-0．02％磷酸（43：57）为流动相，流速1mL·min^-1，检测波长203nm，柱温40℃。结果：重楼皂苷Ⅰ在0．1024～3．2μg线形关系良好，r=0．9998，平均回收率97．4％，RSD1．8％（n=6）；重楼皂苷Ⅱ在0．064—2．0μg线形关系良好，r=0．9999，平均回收率101．4％，RSD1．0％（n=6）。结论：本方法准确可靠、重复性好，能有效控制该制剂的质量。

热毒清胶囊质量标准研究

目的研究并建立中药热毒清胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）法对方中的重楼、南板蓝根和冰片进行了色谱鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法测定了重楼中重楼皂苷Ⅰ（C51H82O20）的含量。结果鉴别方法重复性好，专属性强。当进样量在0．0792～0．7920mg范围内时，重楼皂苷Ⅰ进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，平均回收率为98．49％，RSD=1．58％。结论所研究的方法可有效地控制热毒清胶囊的质量。

重楼皂苷对肝纤维化大鼠纤维化标志物的影响及其相关性分析

目的:探讨重楼皂苷对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝功能以及肝纤维化标志物的影响及其相关性。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组,重楼皂苷低、中、高剂量组,复方鳖甲软肝片组、秋水仙碱组。除正常组外,其余各组采用CCl4致肝纤维化造模。第7周后,正常组灌胃生理盐水,其余各组灌胃相应药物,1次/d。末次给药后,禁食8 h,处死动物取血,ELISA法检测大鼠血清ALT、AST、肝纤四项指标(CⅣ、PCⅢ、LN、HA)含量以及肝组织HYP水平。结果:与模型组比较,重楼皂苷各剂量组大鼠血清ALT、AST和肝纤四项指标含量、肝组织HYP含量降低(P<0.05,P<0.01)。ALT、AST含量与CⅣ、PCⅢ、LN、HA含量具有相关性(P<0.05,P<0.01)。结论:重楼皂苷具有一定的保肝降酶作用,能减轻肝纤维化程度。

反相高效液相色谱法测定季德胜蛇药片中重楼皂苷I的含量

目的建立反相高效液相色谱法测定季德胜蛇药片中重楼皂苷Ⅰ的含量。方法采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-水（45：55）；流速1．0ml／min，柱温30℃，检测波长为210nm。结果重楼皂苷Ⅰ在0．009645-0．9645mg／ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=1．0000；平均加样回收率为99．21％，RSD为0．75％（n=9）。结论该法简便、准确，重复性较好，可用于测定季德胜蛇药片中重楼皂苷Ⅰ的含量。

重楼皂苷I对大鼠原代成骨细胞增殖的影响及机制研究

目的:研究重楼皂苷I(PPL I)对大鼠原代成骨细胞增殖的影响及其机制。方法:选择酶消化法分离大鼠原代成骨细胞并进行培养,加入含不同浓度PPL I(3、10、30、100μmol/L)的培养液,采用CCK-8试剂盒、EdU试剂盒、碱性磷酸酶活性试剂盒检测大鼠原代成骨细胞的增殖情况,采用免疫印迹法观察PPL I(3、10、30μmol/L)对大鼠成骨细胞中骨保护蛋白(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。结果:PPL I可有效地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,降低RANKL的表达,升高OPG的表达,呈浓度依赖性。结论:PPL I可能通过影响OPG/RANKL通路,发挥促进大鼠原代成骨细胞增殖与分化的作用。

Paris saponin Ⅶ,a direct activator of AMPK,induces autophagy and exhibits therapeutic potential in non-small-cell lung cancer

Paris saponinⅦ(PSⅦ),a bioactive constituent extracted from Trillium tschonoskii Maxim.,is cytotoxic to several cancer types.This study was designed to explore whether PSⅦprevents non-small-cell lung cancer(NSCLC)proliferation and to investigate its molecular target.AMP-activated protein kinase(AMPK)has been implicated in the activation of autophagy in distinct tissues.In cultured human NSCLC cell lines,PSⅦinduces autophagy by activating AMPK and inhibiting m TOR signaling.Furthermore,PSⅦ-induced autophagy activation was reversed by the AMPK inhibitor compound C.Computational docking analysis showed that PSⅦdirectly interacted with the allosteric drug and metabolite site of AMPK to stabilize its activation.Microscale thermophoresis assay and drug affinity responsive target stability assay further confirmed the high affinity between PSⅦand AMPK.In summary,PSⅦacts as a direct AMPK activator to induce cell autophagy,which inhibits the growth of NSCLC cells.In the future,PSⅦtherapy should be applied to treat patients with NSCLC.

HPLC测定不同生长年限安徽地产重楼中重楼皂苷的含量

目的:采用HPLC法测定不同生长年限安徽地产重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent SB-C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长为203nm,流速:1.0mL·min^(-1),柱温30℃。结果:安徽地产重楼中含有重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ,但其含量低于药典标准规定,而且不同生长年限中重楼皂苷的含量差异较明显,5年生药材含量最高。结论:研究结果可为重楼资源的开发利用和确保临床用药质量提供依据。

HPLC法测定宫血宁胶囊中重楼皂苷Ⅵ的含量

目的建立RP-HPLC法测定宫血宁胶囊中重楼皂苷Ⅵ的含量。方法用Chromatorax C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(50∶50),流速1.0mL·min-1,检测波长203nm,柱温30℃进行测定。结果重楼皂苷Ⅵ进样量在1.015～7.105μg(r=0.9999,n=6)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)为101.5%。结论用ODS柱可对宫血宁胶囊中重楼皂苷Ⅵ的含量进行测定,该方法简便、快速、准确,可用于宫血宁胶囊的质量控制。

超高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定重楼消瘤方中5种皂苷类成分含量

建立了同时测定抗肿瘤中药复方——重楼消瘤方中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅶ、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d 5种皂苷类成分含量的超高效液相色谱-蒸发光散射检测(UPLC-ELSD)法。复方制剂经甲醇提取,采用Waters Cortecs UPLC C18(150 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱分离,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器进行检测,以外标法定量。结果显示,5种皂苷类成分的分离度良好,分别在7.1174~177.94μg/mL、 9.4072~235.18μg/mL、 8.8726~221.82μg/mL、 7.4862~187.15μg/mL、9.761 3~244.03μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.999 2~0.999 8,检出限为0.7~1.0μg/mL,定量下限为1.8~2.4μg/mL;平均回收率分别为93.9%、103%、102%、104%、105%,相对标准偏差(RSD)分别为3.8%、4.0%、4.2%、3.6%、3.2%。该方法简便、快速、准确,可同时对重楼消瘤方中的5个皂苷类成分进行分析,能有效地消除杂质干扰,为重楼消瘤方的质量评价提供实验依据。

Biopharmaceutics classification evaluation for paris saponin Ⅶ

To study the biopharmaceutics characteristics of paris saponin Ⅶ(PSⅦ). The solubility of PSⅦ was evaluated by measurement of the equilibrium solubility in different solvents and media. The permeability of PSⅦ was evaluated by measuring the oil/water partition coefficient(lgP_(app)) and determining the apparent permeability coefficient(PC_(app)) on a mono-layer Caco-2 cell model. The effects of p-glycoprotein and multidrug resistance related protein 2 on PSⅦ transport in mono-layer Caco-2 cell model were further investigated. Finally, the small intestinal absorption of PSⅦ was investigated in rat. In solvents of different pH, the equilibrium solubility of PSⅦ was quite low, and the dose number of PSⅦ was larger than 1. The lgP_(app) of PSⅦ was less than 0. The apparent permeability coefficient [PC_(app)(AP-BL)] of PSⅦ in mono-layer Caco-2 cell model was less than 14.96 × 10^(-6) cm·s^(-1), and the efflux ratio of PSⅦ in mono-layer Caco-2 cell model was less than 1. The transport rate of PSⅦ in mono-layer Caco-2 cell model was not affected by the inhibitors of p-glycoprotein and multidrug resistance related protein 2. After oral administration, PSⅦ could be detected in rat intestinal contents, but could not be detected in the small intestinal mucosa. PSⅦ showed low solubility and permeability,which would result in low oral bioavailability in clinic. PSⅦ belonged to Class IV compound in biopharmaceutics classification system.

高效液相色谱法测定加味去伤片重楼皂苷Ⅵ的含量

目的：建立测定加味去伤片中重楼皂苷Ⅵ含量的方法。方法：采用高效液相色谱法测定重楼中重楼皂苷Ⅵ的含量，色谱柱为ThermoC8（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（40：60），检测波长为205nm，流速为1．0ml·min-1。结果：重楼皂苷Ⅵ在0．6395-1．1877,ug线性关系良好（r-0．9998），平均回收率为100．98％，RSD为0．49％。结论：该实验方法线性关系良好、简便、准确、专属性强，可作为加味去伤片控制原药材和成品的质量方法。

UPLC-ELSD法同时测定重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ

目的建立同时测定重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的超高效液相色谱-蒸发光散射(UPLC-ELSD)分析方法。方法采用WatersAcquity UPLC H-Class色谱系统,ELSD检测器,BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水,以体积流量0.45 mL/min进行梯度洗脱,柱温30℃。结果被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系(r>0.999 5);平均回收率在98.36%～100.11%,RSD≤1.56%。结论 UPLC法分离效果及重现性好,且快速、简便,可作为重楼的质量控制方法。

重楼皂苷Ⅶ与二氧化硅纳米复合体对卵巢癌耐药性的体外影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对于卵巢癌的耐药性.方法 应用MTT法测定重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的增殖抑制率;流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达改变.结果 重楼皂苷Ⅶ对SKOV3/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系（P＜0.05）.重楼皂苷Ⅶ、二氧化硅纳米复合体对SKOV3/DDP细胞作用48、24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高（P＜0.05）.Hoechst 33342染色结果显示,50及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用SKOV3/DDP细胞24 h后,不同剂量均能引起细胞出现凋亡的典型表现,即细胞核的深染、凝集和固缩.与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高.蛋白灰度分析结果,与对照组比24 h重楼皂苷Ⅶ处理SKOV3/DDP细胞,50和100 μmol/L剂量组组裂解caspase 3分别增高了5.71倍和11.06倍,Bcl-2表达分别下降了33.3％和61.1％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 重楼皂苷Ⅶ、二氧化硅纳米复合体对SKOV3/DDP增殖有明显抑制作用,呈明显的浓度依赖性,与时间有相关性,它可引起早期凋亡SKOV3/DDP细胞比例显著增加.

HPLC-ELSD法测定清咽胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量

目的:采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定清咽胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:以乙腈-水(48∶52)为流动相,Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为固定相,流速1.0 mL.min-1,漂移管温度45℃,载气流量1.5L.min-1。结果:重楼皂苷Ⅰ的回收率97.27%,RSD为1.22%(n=6);重楼皂苷Ⅱ的回收率97.09%,RSD 1.40%(n=6)。结论:该方法简便、快速、重复性好,可用于清咽胶囊的质量控制。

双标多测法Ⅱ—检测波长选择对定量分析的影响

目的:为解决替代对照品法或一测多评法在相对校正因子法定量和相对保留时间法定性方面的误差有时偏大的问题,建立了一种新的替代对照品模式的多指标含量测定法—双标多测法。方法:在3台不同品牌的高效液相色谱仪和23种不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定重楼中4个皂苷类成分的峰面积和保留时间,计算相应的相对校正因子和相对保留时间,再进行数据偏差的比较和分析。结果:定量方面,解释了检测波长和仪器波长偏移影响相对校正因子的机制,并据此提出了波长选择建议;定性方面,证明了梯度条件下,双标线性校正法预测保留时间的效果仍明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面具有较好的实用价值和较广的应用前景。

重楼药材多指标含量分析及化学计量学综合质量评价

目的：建立基于化学计量学的综合质量评价方法,用于评价重楼药材的质量。方法：使用HPLC色谱仪,建立同时进行多指标含量测定和指纹图谱分析的测定法;采用液质联用推测指纹图谱中未知峰的可能结构,使用相似度分析、聚类热图分析和主成分分析等方法,从获得的数据分析重楼药材的质量。结果：鉴别了重楼指纹图谱的10个共有峰可能的结构,其中5个为偏诺皂苷,5个为薯蓣皂苷;化学计量学可以对10批样品进行区分和评价;10批样品的总皂苷含量为11.7~78.4 mg·g^-1,云南重楼的总偏诺皂苷比为14.9%~40.9%。结论：建立的综合质量评价法简便、专属,可用于重楼的质量评价。

重楼皂甙Ⅰ对肺腺癌细胞株PC9增殖及凋亡的影响

[目的]评价重楼皂甙Ⅰ对肺腺癌细胞株PC9增殖和凋亡的影响。[方法]以体外培养的肺腺癌细胞株PC9为研究对象,MTT法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞周期的影响,Annexin-V-FITC/PI双染法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞凋亡的影响,Western blot法检测重楼皂甙Ⅰ对PC9细胞Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达的影响。[结果]不同浓度重楼皂甙Ⅰ能有效抑制PC9细胞的增殖,且呈时间浓度依赖性(P<0.01)。2.5μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞12h、24h、48h后,出现G2/M期阻滞。2.5μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞24h、48h后,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,具有统计学差异(P<0.01)。2.5μg/ml重楼皂甙Ⅰ作用PC9细胞48h后,Bcl-2蛋白表达降低、Bax及caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,亦具有统计学差异(P<0.01)。[结论]重楼皂甙Ⅰ能抑制PC9细胞的体外增殖,且抑制作用表现出时效和量效关系,其机制可能与G2/M期阻滞、促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax及caspase-3蛋白表达有关。