乳及乳制品中乳铁蛋白含量的快速SDS-PAGE荧光检测方法

该研究采用新型的Chromeo P503(P503)染料替代考马斯亮蓝染色方法,以克服脱色染色步骤繁琐、耗时长(≥5 h)的不足,建立一种乳及乳制品中乳铁蛋白的快速简便十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)检测方法。P503染料标记蛋白产生强烈的红色荧光发射,在30 min内一步操作即可完成,并且进行脱铁处理后消除乳铁蛋白铁饱和度对于荧光信号的干扰,保证定量的准确性。根据凝胶成像图中78 ku蛋白条带是否存在及其灰度值的大小,实现乳铁蛋白的定性与定量检测。在优化的实验条件下,线性范围为15~75μg/mL,检出限为5.11μg/mL,加标回收率在75.79%~108.09%之间,表明该方法具有较高的灵敏度和准确性。SDS-PAGE和P503结合无需进行肝素亲和柱前处理,便可直接应用于乳及乳制品中乳铁蛋白快速简便的准确定量检测,P503染料标记还可以用于其它乳蛋白的SDS-PAGE快速低成本定量检测,从而为乳品质量控制和营养评价及加工工艺研究提供有力工具。