Protection of Intellectual Property and Authenticity of Chinese Herbal Medicine Chrysanthemum morifolium

This paper first introduced Chrysanthemum morifolium Ramat. and its medicinal value. Then, it studied agricultural intellectual property resources such as geographical indications, trademarks, patents, new plant varieties, biological genetic resources, and traditional knowledge related to C. morifolium . Finally, it summarized poverty-stricken areas ecologically suitable for planting C. morifolium , analyzed the GAP certification of C. morifolium , pollution-free agricultural product certification, green food certification, and organic food certification, and discussed the strategies for C. morifolium intellectual property protection and authenticity protection in the context of TCM development strategy and rural revitalization strategy.

怀菊花茎叶中聚炔类化合物对ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用

研究怀菊花茎叶中分离得到的聚炔类化合物对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及初步探讨作用机制。采用ox-LDL(200μg/mL)处理HUVECs细胞建立内皮细胞损伤模型,同时给予聚炔类化合物1~10(100μg/mL)干预;通过CCK-8法检测细胞生存率,筛选出有细胞保护作用的目标化合物;采用目标化合物5和9(12.5、25、50、100μg/mL)干预细胞24 h,CCK-8检测细胞生存率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成率,酶联免疫(ELISA)检测细胞上清液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;细胞免疫印迹法(In-Cell Western)检测细胞中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)2p100/p52与NF-κBp65蛋白的相对表达水平。结果显示:与正常对照组(Con)相比,模型组(ox-LDL)中的细胞生存率明显下降,细胞凋亡率、ROS生成,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α明显升高(P<0.01);与ox-LDL组相比,聚炔类化合物5和9可以明显提高HUVECs细胞的生存率、降低细胞凋亡率、ROS生成率,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌(P<0.05或P<0.01),下调NF-κB2 p100/p52、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。综上所述,怀菊花茎叶中聚炔苷类成分可以改善ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤与功能障碍,其作用机制可能与NF-κB信号通路相关。

菊花中216种农药残留检测分析

目的:建立菊花中216种常用农药残留的快速检测方法。方法:样品经乙腈高速匀浆提取后浓缩,采用液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法,以多反应监测模式进行数据采集,采用空白基质匹配法及校准曲线法进行定量检测。结果:菊花中216种农药的线性关系良好,90%以上农药指标r>0.995,各待测农药指标回收率为70%~115%,符合农药多残留的痕量分析要求;78批菊花中检出农药68种。结论:菊花中农药残留检出率较高、检出品种较多,但检出的多为中低毒性农药。建立的方法有针对性地检测了菊花中高风险的农药品种,涵盖了大多数常用农药品种,检测方法快速、准确,适用于菊花中农药多残留的风险监测和日常快速筛查,可为基质类似的中药材农药多残留检测方法研究提供借参考。

39个传统秋菊品种扦插生根能力综合评价

为了筛选出扦插生根能力较强的传统秋菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种,对39个传统秋菊品种扦插12 d的8个根系形态指标进行差异分析、相关性分析和主成分分析,并对这些传统秋菊品种的扦插生根能力进行隶属函数分析和分级。结果显示:供试传统秋菊品种的总根数为3.3~44.0,总根长、平均根长和最长根长分别为2.463~129.174、0.632~4.470和1.610~7.964 cm,根直径为0.200~0.405 mm,根投影面积和根表面积分别为0.102~3.062和0.319~9.619 cm 2,总根体积为0.002~0.079 cm 3,且多数指标以‘火凤凰’(‘Huofenghuang’)最小。这些根系形态指标的变异系数为15.789%~51.605%,其中,总根长的变异系数最大,根直径的变异系数最小,其余指标的变异系数均大于32%。供试传统秋菊品种的多数根系形态指标间存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)正相关。主成分分析结果显示:前3个主成分的累计贡献率达97.976%。隶属函数分析和分级结果表明:供试传统秋菊品种的扦插生根能力分为优秀、良好、中等和偏差4个等级,‘龙都春丽’(‘Longdu Chunli’)、‘玉楼人醉’(‘Yulou Renzui’)、‘龙都月华’(‘Longdu Yuehua’)、‘圣光华宝’(‘Shengguang Huabao’)、‘龙都秋枫’(‘Longdu Qiufeng’)、‘龙都春晓’(‘Longdu Chunxiao’)的扦插生根能力优秀,综合得分均大于0.70。根投影面积、根表面积和总根体积在不同等级间差异显著。研究结果显示:不同传统秋菊品种间扦插苗的根系形态指标变异较大,其中,‘龙都春丽’等6个品种的扦插生根能力较强,可作为传统秋菊品种遗传改良的亲本。

5个栽培类型药菊分枝期抗旱性综合评价

为研究干旱胁迫对不同栽培类型药菊分枝期生长的影响,并评价不同药菊种质资源的抗旱性,以5个栽培类型药菊为试验材料,分别测定其农艺性状、生物积累量、生理特性等相关指标,并利用隶属函数法、主成分分析、相关分析进行抗旱性综合评价和抗旱鉴定指标筛选。结果表明,干旱胁迫下药菊分枝期的生长受到抑制,株高降低、茎粗减小、分枝数变少、生物量积累减少;渗透物质脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量普遍增加;抗逆酶活性增强,膜脂过氧化程度加剧。抗旱性综合评价表明,各栽培类型药菊在分枝期的抗旱性强弱依次为:怀菊(‘怀白菊’)>滁菊>亳菊>皇菊>杭菊(‘大洋菊’)。研究结果为药菊种质选育、高产高效栽培奠定了基础。

杭白菊木脂素类成分研究

目的 研究杭白菊木脂素类成分。方法 采用大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备型HPLC对杭白菊80%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果 从中分离得到11个化合物,分别鉴定为ssioriside (1)、nudiposide (2)、lyoniside (3)、tortoside A (4), viburfordoside E (5)、tiliamuroside A (6)、开环异落叶松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、异落叶松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、异落叶松脂醇-9-O-β-D-吡喃木糖苷(9)、5′-甲氧基-异落叶松脂醇-9′-O-β-D-吡喃木糖苷(10)、(7R,8R)-4,7,9,9′-四羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素(11)。结论 化合物1~11均为首次从该植物中得到。

药用菊花种质遗传多样性和群体结构分析

对不同地理来源的64份药用菊花种质进行遗传多样性和群体结构特征分析。结果表明,从80条SCoT引物中共筛选出20条稳定性好、多态性高的SCoT引物,20条引物在64份种质间共检测出129个等位基因变异,平均每个引物可检测6.45个,变化范围为3~9个,其中SCoT29和SCoT8标记等位基因数量最多;PIC值变化范围为0.571~0.866,其中有18条SCoT标记的PIC值大于0.700。有效等位基因数范围为1.418~1.774,均值为1.583;Nei's多样性指数为0.344~0.427,平均值为0.278,Shannon's多样性指数为0.641~0.892,平均值为0.440。群体遗传多样性显示,江苏群体遗传多样性最高,河南次之,山西最低。群体间遗传距离分析表明,河北与河南、江苏和安徽、山西和江西亲缘关系较近。群体遗传结构分析表明,当K=4时,ΔK最高,群体间存在基因交流现象,基因交流程度较高。聚类分析结果表明,64份材料在0.6处被划分为四大类群,类群间的菊花种质来源地并没有明显地分开。该研究明确了64份药用菊花种质的亲缘关系,为指导亲本选配和高效育种提供重要依据。

怀菊花中化学成分的分离与鉴定

目的研究怀菊花Chrysanthemum morifolium Ramat的化学成分。方法怀菊花提取物采用Diaion HP-20、Toyopearl HW-40、MCI Gel CHP-20、ODS、硅胶、半制备液相等进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从怀菊花提取物中分离得到18个化合物,分别鉴定为3β-hydroxy-β-ionone-3-O-β-D-glucopyranoside(1)、pisumionoside(2)、(2E)-2-methyl-2-butene-1,4-diol-1-O-β-D-glucopyranoside(3)、(Z)-5′-hydroxyjasmone-5′-O-β-D-glucopyranoside(4)、(2E,8E)-十四烯-4,6-二炔-1,12,14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(5)、对羟基苯丙醇(6)、3,4-二羟基苯乙醇(7)、6,7-二羟基香豆素(8)、对羟基苯乙酮(9)、芝麻素(10)、2-methylphenyl-O-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside(11)、chakyunglupalin B(12)、(R)-vicianin(13)、尿嘧啶(14)、胸腺嘧啶(15)、尿嘧啶核苷(16)、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷(17)、L-苯丙氨酸(18)。结论化合物1~17为首次从该植物中分离得到。

药用菊花起源与演化规律研究

基于文献整理,分析药用菊花的历史发展过程,通过地理分布特点及主要类型形态特征分析、比较,探讨药用菊花起源和演化规律。结果表明,药用菊花存在由野生到栽培的发展过程,宋代以前药用种类均来源于野生菊类。栽培菊出现于唐代,宋代是药用菊花形成、发展的关键时期,明清后逐渐发展成为现代药用类型。菊花是由毛华菊、野菊等多种菊属植物杂交后经人工选育、引种形成的不育类型,河南南阳及大别山区是菊花的重要起源地。不同种类菊花演化进程存在差异,小洋菊、大洋菊、福白菊及滁菊属原始平瓣菊类型;亳菊、济菊、祁菊源于怀菊,为后期进化类型;贡菊为过渡类型。菊花的种植类型与规模受商业影响在不断变化,需加强药材质量控制和资源保护,新品种的发现对扩充种质资源具有重要意义。

药用菊花常见病害及其发病规律与防治措施研究进展

菊花是我国传统大宗药材之一,在药品、食品等方面被广泛使用。近年来,随着市场需求逐步增加,人工集约化种植面积不断扩大,菊花病害发生日益严重,已严重威胁到菊花产业的健康可持续发展。其中,菊花枯萎病是最主要的病害,其次为菊花根腐病,叶部病害以黑斑病最为严重。根据目前药用菊花病害研究进展,对菊花栽培中其常出现的根部病害(枯萎病、根腐病、白绢病)、叶部病害(黑斑病、霜霉病、叶枯病、炭疽病、病毒病)的病原物、危害特征、发病规律及防治措施等进行综述,旨在为我国药用菊花的田间病害防控提供参考。

一测多评法同时测定菊花配方颗粒中8个成分的含量

目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定菊花配方颗粒中绿原酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、芦丁、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。方法:采用高效液相色谱法进行含量测定,色谱柱为Agilent TC-C_(18) (250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为348 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL。以木犀草苷为内标物,采用多点校正法计算其他7个成分的相对校正因子,测定8个成分的含量,并比较与外标法测定结果的差异。结果:8个成分在一定质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.7%~102.1%,RSD为1.8%~2.9%。QAMS与外标法测定7批菊花配方颗粒中8个成分含量差异无统计学意义。结论:建立的QAMS简便快速,可以更全面地控制菊花配方颗粒的质量。

高效液相色谱法同时测定不同品种菊花中绿原酸和木犀草苷及异绿原酸A含量

采用Alphasil VC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,选择348 nm作为检测波长,柱温为30℃,进样量为5μL,建立同时测定不同品种菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)中绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A含量高效液相色谱(HPLC)法。结果表明,绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A在相应的进样浓度范围内与对应的峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9929);平均加样回收率为96.40%~98.07%,RSD为0.69%~1.81%。4种菊花品种中上述3个成分含量分别为0.3575%~0.7872%、0.1879%~0.8239%、0.7611%~1.6169%。该方法简便易行、灵敏度高、结果准确,可用于不同品种菊花的质量控制。

外源5-氨基乙酰丙酸激活叶绿素合成诱导菊花抗白粉病研究

以切花菊品种神马为试验材料,设置外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)预处理再接种白粉病菌(A1)、施用ALA和接种白粉病菌同时进行(A2)这2种处理方式(ALA浓度为0、0.1、1、10、25、100 mg/L),探究外源5-氨基乙酰丙酸对白粉菌的抗病效果以及抗病途径。结果表明:与0 mg/L处理相比,喷施适宜浓度的外源ALA均能不同程度地降低白粉病处理下菊花的发病率和病情指数,提高了诱导抗病率;·O_(2)^(-)产生速率、H_(2)O_(2)含量、脂氧合酶(LOX)活性和丙二醛(MDA)含量显著降低;胆色素原(PBG)、原卟啉IX(Proto IX)、镁-原卟啉IX(Mg-Proto IX)、原叶绿素酸酯(Pchl)和叶绿素等含量显著提高,其中A1处理的上述指标均大于A2处理。A1处理的ALA溶液施加浓度以10 mg/L效果最佳,A2处理以25 mg/L效果最佳。综上,外源ALA可通过调节菊花的叶绿素合成途径来增强其对白粉病的抗性,试验结果可为阐明外源ALA介导的抗白粉病机制提供参考依据。

皇菊蚜虫和绿盲蝽防治药剂筛选试验

针对皇菊蚜虫和绿盲蝽难以防治的现状,分别进行了不同药剂大田防治效果及安全性试验。结果表明:30%噻虫嗪悬浮剂与10%丙联苯菊酯乳油双联包对蚜虫有较好的防治效果,药后3、21 d校正防效分别为97.63%、72.93%,具有一定的速效性和持效性,可作为防治皇菊蚜虫的药剂使用;0.5%苦参碱水剂是生物农药,施药前期药效相对较低,后期药效缓慢上升,药后7、21 d校正防效分别达到82.20%、77.73%,可作为蚜虫发生前期的预防药剂;45%丙溴·辛硫磷乳油对绿盲蝽防治表现出良好的速效性和持效性,药后3 d能达到最高防效(95.25%),药后21 d校正防效仍保持在70%左右,可作为防治皇菊绿盲蝽的药剂使用;12%噻虫·高氯氟表现为速效性较差、持效性较好,药后7 d校正防效达到78.09%,药后21 d校正防效仍维持在70%左右,可作为防治绿盲蝽的轮换药剂使用。

杭白菊乙酸乙酯提取物对大鼠实验性心律失常的影响及其机制

目的:研究杭白菊乙酸乙酯提取物(CME)对大鼠实验性心律失常、心肌易损性与动作电位的影响及其机制。方法:采用乌头碱诱发的整体大鼠心律失常模型研究CME对大鼠实验性心律失常的影响。采用Langendorff离体心脏灌流方法,结扎冠状动脉左前降支30 min后复灌复制局部缺血/复灌模型,测定心肌缺血复灌前后的心室电生理学参数:舒张期兴奋阈(DET)、有效不应期(ERP)、室颤阈(VFT)。采用常规微电极技术记录大鼠右心室乳头肌动作电位,观测静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)、有效不应期(ERP)、动作电位的时程(APD90)、动作电位0期最大除极速率(Vmax)。结果:与对照组相比,CME明显降低室性心动过速发生次数,缩短其持续时间,延迟室性早搏、室性心动过速出现时间,心律失常评分显著降低。与对照组相比,CME明显延长离体大鼠心脏的ERP,并对缺血/复灌所致的ERP缩短和VFT降低有明显的减弱作用。与对照组相比,CME明显延长大鼠右室乳头肌动作电位APD50和APD90,降低动作电位Vmax,对动作电位的其他参数影响不显著。结论:CME具有降低大鼠心室易颤性、抗心律失常的作用,其机制可能涉及延长心肌动作电位时程及有效不应期,提高大鼠心脏电生理稳定性。

应用ISSR对25个小菊品种进行遗传多样性分析及指纹图谱构建

【目的】揭示选育出的菊花新品种遗传多样性并建立ISSR指纹图谱,为品种知识产权保护提供依据。【方法】选用21个ISSR引物,对新选育的25个小菊品种的基因组DNA进行随机引物PCR扩增。【结果】共获得122条扩增带,其中多态性谱带114条,占扩增谱带数的93.4%;品种间相似系数变幅在0.282～0.757;平均有效等位基因数为1.6390,平均Nei’s基因多样性指数为0.3620,平均Shannon信息指数为0.5323;在21个引物中,引物ISSR35扩增的谱带可把25个品种完全区分开。【结论】ISSR标记技术能较好地从分子水平揭示出菊花品种的遗传多样性,并能有效应用于菊花品种指纹图谱的构建。

不同花色菊花品种花色素成分的初步分析

为了分析形成菊花花色的色素成分以搞清楚花色形成的机理,该文对17个菊花品种的花瓣进行了花色表型测定、特征显色反应和紫外--可见光谱扫描分析.结果发现:菊花不同花色(黄色、白色、红色、紫色和橙色)品种的色素由类黄酮和类胡萝卜素两大类组成.黄色花主要含有类胡萝卜素和黄酮类化合物;白色花仅含有黄酮类化合物;红色和紫色花主要由花色素苷和黄酮类化合物组成;橙色花的色素包括类胡萝卜素、黄酮类化合物和花色素苷.该项研究为菊花花色素成分的进一步分离和鉴定等工作奠定了基础,同时也为菊花花色的分子育种提供帮助.

不同钾肥用量对福田河白菊产量和质量的影响

目的研究钾肥施用量对福田河白菊产量和质量的影响,为其GAP栽培合理施肥提供指导。方法在中等氮、磷和其他矿质养分为肥底的基础上,设置不同钾肥施用量进行土壤培养试验,分别测定菊花产量和花中的黄酮、绿原酸、可溶性总氨基酸和粗蛋白的量以及苯丙氨酸解氨酶活性。结果盆栽试验结果表明,适量施钾能显著提高菊花产量与质量。在施钾(K2O)量为0～4.0g/株时,菊花产量和花中总黄酮的量与累积量同施钾量及花中钾的量成正比,而与花中N/K成反比;但施钾过高(6.0～8.0g/株)会抑制白菊生长,使菊花产量和花中总黄酮的量与累积量均有不同程度的降低。菊花中绿原酸的量同施钾量及花中钾的量成正比,而与花中N/K成反比。白菊不同花期花中总黄酮和绿原酸的量同花中可溶性总氨基酸和粗蛋白的量之间呈显著负相关。结论在中等氮、磷和其他矿质营养条件下,综合考虑菊花产量和花中总黄酮与绿原酸的量及累积量等因素,福田河白菊钾肥施用量以4.0g/株比较适宜。

菊花的化学成分研究

通过硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析、纯化，从菊花的乙醇提取物中分离得到14个化合物，利用波谱方法分离鉴定为香叶木素（chrysoeriol，1），木犀草素（luteolin，2），芹菜素（apigenin，3），香叶木素7-O-β-D-葡萄糖苷（chrysoeriol 7-O-β-D-glucopyranoside，4），木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside，5），金合欢素7-O-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-β-D-glucopyranoside，6），刺槐苷（acacetin 7-O-β-D-glucopyranosyl（6→1）-α-L-rhamnopyranoside，7），金合欢素7-O-（6″-O-乙酰）-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-（6″-O-acetyl）-β-D-glucopyranoside，8），金合欢素（acacetin，9），山奈酚（kaempferol，10），异泽兰黄素（eupatilin，11），大黄素（emodin，12），大黄酚（chrysophanol，13）和大黄素甲醚（physcion，14）。其中化合物8-14均为首次从菊花中分离得到。

氮、磷、钾配合施用对福田白菊产量和品质的影响

目的研究氮、磷、钾3种养分对福田白菊产量和品质的影响。方法采用湖北省麻城市福田河镇白菊种植基地土壤进行盆栽土培试验。结果在盆栽条件下施肥对白菊产量和品质的影响效应为氮>磷≥钾;氮、磷、钾3要素配合施用能促进白菊的正常生长发育,显著提高白菊的经济学产量、生物学产量、外观品质、茶用和药用品质。其中,白菊中可溶性总糖和总黄酮量呈显著正相关(r=0.813 1**),说明平衡施肥可能通过促进白菊中的可溶性总糖的合成来增加总黄酮的合成与积累。结论在白菊生产上要在合理施用氮肥的基础上增施磷、钾肥。