Chrysanthemum indicum ethanol extract attenuates hepatic stellate cell activation in vitro and thioacetamide-induced hepatofibrosis in rats

Objective:To investigate the antifibrotic effects of Chrysanthemum indicum ethanol extract(CIEE)against activated hepatic stellate cells(HSC)and thioacetamide(TAA)-induced hepatofibrosis in rats.Methods:Cell viability and proliferation of HSC-T6 cells were measured using MTT assay.Primary HSCs were used to study morphology.TAA(200 mg/kg)was used to induced hepatic fibrosis in rats.CIEE(100 and 500 mg/kg)and silymarin(50 mg/kg)were administered orally.Liver functions including alanine transaminase,aspartate transaminase,glutathione,and hydroxyproline levels were measured using commercial kits.Liver sections and fibrotic biomarker expression were measured using hematoxylin and eosin staining and real-time polymerase chain reaction.Results:In vitro study revealed that CIEE(0.1,0.25,and 0.5 mg/mL)inhibited the proliferation of activated HSCs exposed to transforming growth factor(TGF)-β and restored the activated primary HSC morphology.In in vivo studies,TAA-induced increase in liver/body weight ratio(5.46±0.26)was significantly reduced(4.13±0.22)by CIEE(P<0.05 at 500 mg/kg).CIEE(100 and 500 mg/kg)improved the liver functions by significantly attenuating changes in alanine transaminase,aspartate transaminase,glutathione,and hydroxyproline levels(P<0.05).Further,CIEE(100 and 500 mg/kg)ameliorated the histological changes in liver tissue and TGF-β expression significantly(P<0.05)in TAA-induced rats.Conclusions:CIEE significantly protects against TAA-induced liver damage in rats and can be used in the treatment of liver fibrosis.

A NEW SESQUITERPENE FROM CHRYSANTHEMUM INDICUM

A new sesquiterpene with an eudesmane skeleton,named Chrysantherol was isolated from the flowers of Chrysanthemum indicum.Its structure was elucidated as 1 mainly by the analysis of spectral data.

Two New Eudesmane Sesquiterpenoids from the Flowers of Chrysanthemum indicum

The fowers of Chrysanthemum indicum,i.e.Ye-ju-hua recorded in the Chinese Pharmacopoeia,has been widely used in China as an important heat-clearing and detoxifying herb for the treatment of infammation,headache,and vertigo.A phytochemical investigation of this herb has led to the isolation of two new eudesmane sesquiterpenoids,7-epi-eudesm4(15),11(13)-diene-1β,3β-diol(1)and 7-epi-1β-hydroxy-β-eudesmol(2).The molecular structures of these new sesquiterpenoids were established based on the comprehensive spectroscopic analyses,including NMR,MS,and IR,and comparing with the literatures.

A New Compound from the Bud of Chrysanthemum indicum L.

A new bicyclic spiroketone was isolated from the bud of Chrysanthemum indicum L. The chemical structure was elucidated as （1R, 9S, 10S）-10-hydroxyl-8 （2＇, 4＇-diynehexylidene）- 9-isovaleryloxy-2, 7-dioxaspiro [5, 4] decane based on the X-ray crystallography.

Chrysanthemum indicum linné extracts attenuate the mitogenic effect of epinephrine on human HCC cells

Objective： To investigate the stimulatory effect of epinephrine（Epi） and the antagonistic effect of Chrysanthemum indicum Linné extracts （CILE） on Epi-induced growth of human hepatocellular carcinoma（HCC） cells. Methods： The stimulatory effect of Epi and inhibitory effect of CILE on the growth of HepG2 and MHCC97H cells were investigated using a proliferation assay in correlation with β adrenergic receptor（ β2-AR） blockade, a MEK1/MEK2 inhibitor, and assessment of MAPK/ERK1/2 intracellular activity. Results： Epi transiently activated MAPK/ERK1/2 in HepG2 and MHCC97H cells, resulting in a burst of growth. The effect of Epi was significantly attenuated by ICI 118551 and U0126. CILE exhibited a dose-dependent attenuation of the stimulatory effect of Epi on the growth of both cell lines and inhibited the Epi-induced activation of MAPK/ERK1/2. Conclusion： Epi, mimicking a mitogen, stimulated the growth of HepG2 and MHCC97H cells, and CILE was effective in attenuating this effect of Epi on tumor cells by inhibiting the β2-AR-mediated activation of MAPK/ERK1/2.

Induction of apoptosis and cell cycle arrest in human HCC MHCC97H cells with Chrysanthemum indicum extract

AIM:To investigate the effects of Chrysanthemum indicum extract(CIE)on inhibition of proliferation and on apoptosis,and the underlying mechanisms,in a human hepatocellular carcinoma(HCC)MHCC97H cell line. METHODS:Viable rat hepatocytes and human endothelial ECV304 cells were examined by trypan blue exclusion and MTT assay,respectively,as normal controls.The proliferation of MHCC97H cells was determined by MTT assay.The cellular morphology of MHCC97H cells was observed by phase contrast microscopy.Flow cytometry was performed to analyze cell apoptosis with annexin V/propidium iodide(PI), mitochondrial membrane potential with rhodamine 123 and cell cycle with PI in MHCC97H cells.Apoptotic proteins such as cytochrome C,caspase-9,caspase-3and cell cycle proteins,including P21 and CDK4,were measured by Western blotting. RESULTS:CIE inhibited proliferation of MHCC97H cells in a time-and dose-dependent manner without cytotoxicity in rat hepatocytes and human endothelial cells.CIE induced apoptosis of MHCC97H cells in a concentration-dependent manner,as determined by flow cytometry.The apoptosis was accompanied by a decrease in mitochondrial membrane potential, release of cytochrome C and activation of caspase-9 and caspase-3.CIE arrested the cell cycle in the S phase by increasing P21 and decreasing CDK4 protein expression. CONCLUSION:CIE exerted a significant apoptotic effect through a mitochondrial pathway and arrested the cell cycle by regulation of cell cycle-related proteins in MHCC97H cells without an effect on normal cells. The cancer-specific selectivity shown in this study suggests that the plant extract could be a promising novel treatment for human cancer.

神农香菊R2R3-MYB转录因子CiMYB4在镉胁迫中的功能分析

为探究CiMYB4在镉胁迫下的功能,以课题组已获得的过表达CiMYB4烟草(CiMYB4-S)、野菊(CiMYB4-OE)和抑制表达野菊(CiMYB4-Ri)为材料,在镉胁迫条件下分别测定其生长相关指标、抗氧化酶活性、光合指标、地上部及根系的镉含量,并对耐镉相关基因PCS1、GSH1、ABCC1、HMA3的表达模式进行分析。研究结果表明:镉处理后,CiMYB4-S和CiMYB4-OE株系的根长、茎粗、株高和叶长、叶宽显著大于野生型对照(WT)株系,丙二醛(MDA)含量显著降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著增强,叶片的光合能力和叶绿素含量显著增加,具有更强的镉富集和转运能力。同时,耐镉相关基因PCS1、GSH1、HMA3的表达水平显著提高;而CiMYB4-Ri株系的株高、地上部干重显著小于WT株系,MDA含量显著增加,SOD、POD、CAT活性显著降低,叶片的光合能力和叶绿素含量显著降低,镉富集和转运能力减弱。同时,耐镉相关基因PCS1、GSH1、HMA3的表达水平显著降低。上述结果表明CiMYB4能提高烟草和野菊对镉的耐受性。

盐胁迫下野菊离子的吸收转运情况及相关基因的表达

明确抗盐能力不同的野菊(Chrysanthemum indicum)株系在盐胁迫情况下的离子分布运输情况及相关基因的变化规律,从更深层次上认识野菊的抗盐机理。以前期筛选的2个高抗株系(H1、H2)、2个中抗株系(M1、M2)和2个低抗株系(L1、L2)的扦插苗为试验材料,置于含有NaCl(浓度为150 mmol/L)的霍格兰营养液中进行盐胁迫处理。测定6个离子指标(根、茎、叶的钠、钾离子的质量分数),并计算各株系中根、茎、叶钾钠离子质量分数比值(w(K^(+))∶w(Na^(+)))和不同部位离子选择性运输能力(S_((K^(+),Na^(+)))),分析盐胁迫对抗盐能力不同的野菊株系各部位离子质量分数、比例及运输情况的影响。采用生物信息学方法对野菊进行Na^(+)和H^(+)逆向转运蛋白基因(NHX)家族成员和高亲和性钾离子转运蛋白基因(HKT)的鉴定。并利用qRT-PCR技术,测定盐胁迫下抗盐能力不同的野菊株系在根、茎、叶中NHX、HKT基因不同时间点的表达水平。研究结果表明:与对照组相比,野菊各株系根、茎、叶的Na^(+)质量分数显著增加(P<0.05),K^(+)质量分数及w(K^(+))∶w(Na^(+))值均显著降低(P<0.05);多数情况下,野菊高、中抗株系各部位间的S_((K^(+),Na^(+)))值高于对照组。随着株系抗盐能力的降低,根、茎和叶中的Na^(+)质量分数呈持续上升趋势,而K^(+)质量分数及w(K^(+))∶w(Na^(+))值则呈持续下降趋势,各部位间的S_((K^(+),Na^(+)))值均呈现先升高后下降的趋势。共鉴定出6个野菊NHX家族成员(CiNHX1-6),1个野菊HKT基因(CiHKT1)。在盐胁迫后,野菊CiNHX2基因在高抗株系根部的表达上调幅度明显高于低抗株系,而该基因在H1、H2株系根、茎部中有着相同的表达模式。同样,CiNHX4基因在高抗株系根、叶部的相对表达量也大幅上调,该基因在H1、H2株系根、叶部中有着相同的表达模式。CiNHX1、CiNHX3、CiNHX5、CiNHX6在各株系的根、茎、叶中的表达水平并无显著变化,且总体上表达水平较低,其中CiNHX3在根部的表达量略高,CiNHX1、CiNHX6在叶部的表达量略高。野菊CiHKT1基因在根、叶部的表达受盐胁迫的影响较为明显,高抗株系的相对表达量上调幅度明显。野菊抗盐能力越强,其离子吸收、转运、分布情况受盐胁迫影响越小;盐胁迫下高抗株系能有效地外排Na^(+)并选择性地吸收K^(+),稳定体内的离子质量分数与分布;中抗株系受胁迫影响相对较大,但可以通过选择性运输K^(+)来防止Na^(+)的过量对地上部分造成毒害。CiNHX2、CiNHX4、CiHKT1与野菊株系抗盐能力强弱密切相关,是野菊抵御盐胁迫的关键基因。

神农香菊CibHLH1的鉴定及对光合特性的影响

bHLH家族是植物中第二大转录因子家族,对植物的生长发育、次生代谢和环境胁迫应答都起着重要的作用。本研究以神农香菊叶片cDNA为模板克隆了CibHLH1的全长序列,该基因全长738 bp,开放阅读框为630 bp。多序列比对分析及系统进化树结果表明,CibHLH1与菊花的CmbHLH1同源性最高。不同组织部位的荧光定量数据显示该基因在花中表达量最高,在根中表达量最低,亚细胞定位结果显示该基因定位在细胞核中。为进一步研究CibHLH1的功能,通过叶盘法将其转化烟草,发现过表达CibHLH1烟草叶片黄化,测定叶绿素含量发现,叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量均显著降低。测定转基因烟草的光响应曲线及光合生理指标,结果表明过表达CibHLH1降低了烟草的最大净光合速率、表观量子效率、光饱和点和水分利用率,但其蒸腾速率、气孔导度和光补偿点均增加。综上所述,CibHLH1能够通过降低光合色素的含量而影响植物的光合能力。

野菊中一个新的吉马烷型倍半萜

研究野菊Chrysanthemum indicum L.地上部分中萜类成分及其抗炎活性。采用MCI、ODS、SephadexLH-20凝胶柱色谱和pre-HPLC等方法分离纯化,再通过对其波谱数据分析鉴定化合物的结构。从野菊二氯甲烷提取物中分离纯化得到6个单体化合物,分别是chrygermalide A(1)、3β-hydroxy-oxo-7α,11β-germacra-4 Z,10(14)-diene-12,6α-olide(2)、deacetylherbolide A(3)、9β-hydroxy costunolide(4)、3β-hydroxycostunolide(5)、3β-hydroxy-11α,13-dihydrocos-tunolide(6)。其中化合物1为新化合物,2~6为首次从该属植物中分离得到。采用LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞的炎症模型测试了化合物1~6的抗炎活性,其NO抑制率IC 50值在17.9~33.9μmol/L之间。

不同采收期野菊花的有机酸含量变化

野菊花作为常用中药材,具有多种药效成分,但其采收期对药材质量的影响少有报道。本研究以野菊花中3种代表性有机酸类成分(绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)为指标,利用UPLC法测定野菊花不同花期3种成分的含量,以确定采收期对有机酸含量的影响,为野菊花药材的质量控制研究提供进一步的依据。结果表明野菊花整个花期3种有机酸含量逐渐减少:蕾期>初花期>盛花期。结合药材产量因素,确定蕾期和初花期都是野菊花适宜的采收期。

野菊抗盐株系筛选与抗盐机理初探

为发掘抗盐性强的野菊(Chrysanthemum indium L.)株系并揭示野菊抗盐的部分生理机制,以150 mmol/L NaCl水培作为胁迫方式,基于表型变化结合聚类分析对207个引种野菊株系进行抗盐性筛选,从得到的高、中、低抗3类中分别选择2个株系,使用霍格兰营养液(对照)、150 mmol/L NaCl(处理)两种方式对各株系进行分组处理,72 h后进行表型观察与相关生理指标测定。结果表明,引种野菊可根据抗盐性分为高、中、低抗3类,高抗株系111个,中抗株系44个,低抗株系52个。处理组与对照组在表型上差异明显,且处理组中抗盐性越弱的株系出现的胁迫症状越严重。处理组中除高抗株系的水分利用效率,高抗与中抗株系的气孔限制值,低抗株系的胞间CO_(2)浓度高于对照组外,其余的光合指标均低于对照组。处理组的光合色素含量均低于对照组。处理组的渗透调节相关物质含量均高于对照组。处理组中,株系A到株系F的胞间CO_(2)浓度均为先降后升趋势,表观叶肉导度、气孔限制值为先升后降趋势,丙二醛含量为上升趋势,叶绿素a/b的趋势不具明显规律,其余指标均为下降趋势。综上,引种207个野菊株系中有111个株系对盐有较强的抗性,抗盐性较强的野菊株系在盐胁迫下较强的渗透调节能力与水分代谢能力使其表型未发生明显变化。

镉胁迫对野菊幼苗生长特性的影响

笔者使用不同浓度的氯化镉(CdCl_(2))溶液处理野菊(Chrysanthemum indicum)幼苗,研究镉胁迫对野菊幼苗生长特性的影响。结果表明,Cd浓度为0 mg/L~50 mg/L时,野菊的地上部分和地下部分生物量均随试验时间的延长而增加;Cd浓度为100 mg/L时,野菊的地上部分和地下部分生物量在处理后第35天均出现明显的降低现象,且野菊地下部分对镉胁迫处理的敏感性更高。镉胁迫处理下,野菊第3片和第4片功能叶的面积及根表面积均小于对照,当Cd浓度为100 mg/L时,野菊第3片和第4片功能叶的面积及根表面积均为最小,佐证了野菊地上部分和地下部分对镉胁迫处理的敏感性。

野菊花黄色素提取工艺研究

对野菊花黄色素的提取条件进行了系统的研究。结果表明 ,提取的最佳工艺条件是 :以pH值为 5 0的体积分数 99 7%的无水乙醇为浸提剂 ,按每克野菊花粉加浸提剂 10mL的比例投料 ,在温度 60℃下 ,浸提时间为

野菊花主要活性成分的药理作用研究进展

野菊花是一味具有疏散风热、消肿解毒作用的中草药,含有黄酮类、挥发油和萜类、多糖等多种化学成分,研究表明,野菊花具有抗菌、抗炎免疫、抗肿瘤、保护心血管系统、保肝等多种药理作用,有较好的临床应用价值。综述了近5年来野菊花主要活性成分黄酮类、挥发油和萜类药理作用的相关研究,为野菊花资源进一步的研究开发提供参考。

野菊花化学成分的研究

目的:研究野菊(Chrysanthemum indicum L)的干燥头状花序中的化学成分。方法:用硅胶柱色谱法及Sephadex LH-20柱色谱法进行分离纯化,依据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构。结果:从野菊花的80%乙醇提取物中分离得到了7个黄酮化合物,分别被鉴定为:金合欢素(acacetin、1)、金合欢素-7-O-(6″-O-乙酰基)β-D-葡萄糖苷[acacetin-7-O-(6″-O-acetyl)β-D-glucopyranoside、2]、蒙花苷(linarin、3)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside、4)、绿原酸(chlorogenic acid、5)、香草酸(vanillic acid、6)和蔗糖(sucrose、7)。结论:化合物2、4、6和7为首次从野菊花中分离得到。

野菊花不同提取物的红外光谱分析

利用红外光谱的宏观指纹特性,对野菊花不同溶剂提取物的红外光谱图和二阶导数红外光谱图进行了整体分析。可知,野菊花石油醚提取物主含长链脂肪酸(酯)、不饱和酮以及小分子萜类等低极性化合物,乙酸乙酯提取物主含萜类和黄酮类化合物,无水乙醇提取物主含黄酮及黄酮苷类化合物,95%乙醇提取物主含黄酮苷类化合物,去离子水提取物主含多糖及鞣质类等大极性成分。此外,与野菊花指标成分蒙花苷的红外光谱分析比较,可知野菊花无水乙醇提取物中所含有的黄酮量是最多的。因此,利用红外光谱法对中药提取物直接进行分析,可初步识别其主体成分,为下一步制定药效成分的提取方案和检测方法提供方向性参考。

野菊花提取物对慢性支气管炎大鼠血清和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6含量及肺组织病理形态学的影响

目的研究野菊花提取物对慢性支气管炎(CB)大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-6含量以及肺组织病理形态学的影响,探讨其治疗CB的机制。方法制备野菊花提取物;Wistar大鼠随机分为空白对照组,CB模型组,喘息灵对照组,野菊花提取物低、中、高剂量组;气管内注入脂多糖建立CB大鼠模型,药物干预后,ELISA法测定大鼠血清及BALF中TNF-α及IL-6含量,观察肺组织的病理形态学变化。结果模型组大鼠血清及BALF中TNF-α及IL-6含量较空白对照组明显升高,肺组织发生明显病理损伤,野菊花提取物可显著降低上述异常升高的指标、改善肺组织的病理损伤。结论降低CB大鼠体内TNF-α、IL-6含量,改善肺组织的病理损伤,可能是野菊花提取物减轻CB炎症效应机制之一。

野菊花总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用

目的观察野菊花总黄酮(TFC)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及部分机制。方法用TFC(125、250、500 mg/kg)连续给小鼠灌胃4后,腹腔注射0.1%CCl4(10ml/kg)致小鼠急性肝损伤模型,测定不同剂量的TFC对肝损伤血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性、肝匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;并通过放射免疫分析法测定肝匀浆中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNFα-)的表达量;同时对肝组织进行病理学检查。结果TFC能降低CCl4致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST值的升高,降低肝匀浆中MDA含量,增强SOD的活性,TNFα-表达降低,减轻CCl4对肝组织的病理损伤。结论TFC对CCl4致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能主要与清除自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制TNFα-表达有关。

野菊花茎叶挥发油的化学成分及其对植物病原真菌抑制作用

用水蒸气蒸馏法提取野菊花茎叶中的挥发油,采用GC-MS联用技术分析其挥发油中的化学成分,并用生长速率法检测其挥发油对5种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明,从野菊花茎叶挥发油中分离和鉴定出32种化合物,其挥发油对实验的植物病原真菌均有抑制作用,特别是对油菜菌核病菌的抑制作用更加显著,野菊花茎叶挥发油的浓度为500μg/mL时抑制率高达81.63%。