川贝母药材研究进展

目的:对川贝母药材的相关研究进行梳理与归纳,为该类药材的资源开发与研究提供参考。方法:基于历年,尤其是近年来的文献资料,对川贝母药材的来源植物变迁情况进行梳理,对市场常见的商品规格进行总结;根据川贝母药材实际化学成分的种类,分别按照生物碱类和非生物碱类成分分别进行描述;对川贝母药材的主要药理活性进行归纳分类。结果与结论:川贝母药材的植物来源不断变化,目前有6种植物来源;商品规格主要有松贝、青贝、炉贝、栽培品之分;化学成分以生物碱类成分为主;主要对呼吸系统、抗炎及抗肿瘤方面具有药理活性。对川贝母药材的资源保护与开发及其化学与药理方面的进一步深入研究具有一定的参考价值。

基于数据挖掘和网络药理学探讨川贝母治疗肺系疾病的核心中药和机制

基于数据挖掘川贝母治疗肺系疾病的核心中药和基于网络药理学探讨“川贝母-人参”治疗肺系疾病之支气管哮喘的作用机制。通过数据处理软件,利用统计学方法对所收集的含贝母肺系疾病中药组方进行频数统计、关联规则分析和聚类分析。并利用网络药理学知识对核心药对治疗肺系典型疾病支气管哮喘进行靶点收集筛选、基因本体论(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,最后利用分子对接验证。共筛选出含贝母处方420个,涉及中药463味;高频药物有甘草、杏仁等;聚类分析可得8类;高频核心二联药物组合有“川贝母-阿胶”“川贝母-人参”等,三联药物组合包括“川贝母-天冬-麦冬”“川贝母-天冬-甘草”等,四联药物组合“川贝母-桑白皮-桔梗-甘草”“川贝母-桑白皮-杏仁-甘草”等;由于阿胶为动物药材,则分析“川贝母-人参”药对治疗作为治疗支气管哮喘这一典型肺系疾病的核心药对,其中Hub靶点包括“AKT1”“PTGS2”等;核心活性成分包括“beta-sitosterol”“kaempferol”等;预测跟脂质和动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样硬化、弓形虫病、糖尿病并发症中的高级糖基化终末产物-受体(advanced glycation end products-receptor for AGE,AGE-RAGE)信号通路有关,在分子对接中高频活性药物成分Fumarine与疾病靶点的PTGS2最为紧密。基于统计学方法和网络药理学技术,川贝母常与人参等配伍使用治疗肺系疾病,且药物的活性成分会利用相关AKT1等靶点和脂质和动脉粥样硬化等通路起到治疗作用;本研究揭示了含川贝母治疗肺系疾病方剂潜在的一些规律,为进一步开放川贝母组方药物提供了思路。

川贝母总生物碱纯化工艺研究

目的:确定川贝母主要活性部位总生物碱的纯化条件,为其开发利用和产业化生产提供理论依据。方法:以解析液中的总生物碱含量为指标,分别考察H103型大孔吸附树脂和001x7型离子交换树脂对川贝母提取物的最佳吸附及洗脱条件。结果:经H103型大孔吸附树脂纯化后,所得产物的纯度和收率分别为44.3%和0.71%。而经001x7型离子交换树脂纯化后,所得产物的纯度和收率分别为61.4%和1.24%。因此001x7型离子交换树脂对川贝母总生物碱的纯化效果最好,其最佳纯化条件:上样液pH值为2,上样体积为0.75 BV,水洗体积为8 BV,用含5%氯化钠的60%乙醇洗脱,洗脱剂用量为10BV。结论:两种纯化工艺都具有简便、快速、准确等优点,都可用于川贝母总生物碱的富集纯化。但001x7型离子交换树脂对川贝母总生物碱纯化效果更好。

基于网络药理学及分子对接方法分析川贝母治疗肺炎的分子机制

目的:运用网络药理学分析方法和分子对接分析方法,分析川贝母治疗肺炎的分子机制,为后续研究提供理论依据。方法:根据已发表的文献和数据库及ADEM参数筛选川贝母的有效成分,在Swiss Target Prediction,Similarity ensemble approach等数据库上查找川贝母所有有效成分的靶点,在DisgeNet、GeneCards等数据库中查找肺炎的治疗靶点,通过韦恩图求靶点的交集即为川贝母治疗肺炎的治疗靶点,通过String数据库构建治疗靶点PPI网络图,运用Cytoscape3.8.0自带应用程序CytoNCA筛选出综合集中性前五的靶点即为川贝母治疗肺炎的核心靶点,在Metascape网站上进行靶点基因GO富集和KEGG通路富集,应用Cytoscape3.8.0构建有效成分和治疗肺炎靶点网络图,应用Discovery studio 2019中的Cdocker对选定有效成分和核心靶点进行分子对接。结果:共筛选出59种有效成分,包括生物碱类物质22种,有机酸类物质20种,核苷类物质8种,其他类物质9种,韦恩图筛选出100个川贝母治疗肺炎的靶点,经过集中性筛选选出川贝母治疗肺炎的5个核心靶点,分别为STAT3、AKT1、SRC、MAPK3和EGFR。GO富集和KEGG通路富集分析发现川贝母治疗肺炎的靶点分子功能富集于丝氨酸型肽酶活性、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶活性、激酶绑定等,生物过程富集于白细胞游走、细胞与细胞黏附调节、防御反应调节等,细胞组分富集于膜筏区域、质膜外侧部、囊腔等部位,KEGG通路富集于癌症通路、糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路、乙肝通路等,其中核心靶点均参与的生物过程包括细胞因子信号通路和蛋白质的正调节过程,KEGG通路包括AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、乙型肝炎、趋化因子信号通路等;分子对接显示川贝母的生物碱成分能与STAT3、AKT1进行分子对接,有机酸成分能与EGFR进行分子对接。结论:川贝母通过多种靶点、多通路和多途径治疗肺炎,活性成分具有良好的类药性。

川贝母真伪鉴别方法的研究进展

目的 了解川贝母真伪品的鉴别方法。方法 通过查阅近10年来国内外相关文献并进行归纳总结,对川贝母的真伪鉴别方法进行总结。结果 川贝母真伪品鉴别方法主要有性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、分子鉴定。结论 川贝母的真伪鉴别方法研究已取得一定进展,但部分方法仍存在一些局限性,需要进行进一步研究。

中药川贝母定量分析方法研究

目的:研究常用中药川贝母的定量分析方法。方法:应用高效液相色谱法。以4种川贝母共有的有效成分贝母辛为指标;采用AgilentHypersilBDS C18(4. 0mm×2 5 0mm ,5 μm)色谱柱,以乙腈水 二乙胺(37∶6 3∶0 .0 3)为流动相,流速1 0mL·min-1;Alltech 2 0 0 0蒸发光散射检测器检测,外标两点法定量。结果:贝母辛在0 . 0 3188～1. 0 2 0mg·mL-1呈线性,回收率为10 2. 1% (n =5 ) ,RSD 3. 86 %。根据33批不同产地或来源的川贝母药材中贝母辛的含量结果,确定贝母辛的含量限度为0 . 0 0 70 %。结论:本法为良好的贝母辛的定量分析方法,可用于川贝母药材的质量控制。

川贝母的资源学研究进展

概述了川贝母的来源分布、鉴定、生态学、栽培方面的研究进展,介绍了近年来发展起来的鉴定技术、与川贝母品质相关生态因子的研究及其在人工栽培中的应用,提出了存在的主要问题及今后研究的方向。

川贝母与其他贝母类药材总生物碱和总皂苷的含量测定与比较

目的 :通过测定和比较川贝母与其他贝母类药材在总生物碱和总皂苷的含量上的区别 ,探讨建立合理的川贝母有效成分含量测定标准的途径。方法 :用两相滴定法测定各种贝母的总生物碱含量 ;用重量法测定各种贝母的总皂苷含量。结果 :测定了 4种川贝母 (2 0 0 0年版《中国药典》收载品种 )各 3个样品和浙贝母、伊贝母和平贝母各 2个样品中总生物碱含量和总皂苷含量。结论 :川贝母的总生物碱含量在 0 .0 5 %～ 0 .1% ,总皂苷含量在2 .0 %～ 4 .0 % ;浙贝母、伊贝母和平贝母的总生物碱含量在 0 .1%～ 0 .2 % ,总皂苷含量在 1.0 %～ 2 .0 %。

川贝母药材分子鉴定方法研究

川贝母基源鉴定对于其临床用药的安全性、有效性非常重要,但基于性状、显微或化学成分的鉴定方法缺乏专属性,因此,建立专属性强的川贝母分子鉴定方法具有重要意义。本研究在本实验室前期研究工作的基础上,建立了一种适用于川贝母商品药材(干鳞茎)的简便可行的聚合酶链反应-限制性酶切图谱(PCR-RFLP)分子鉴定法,即称取贝母干鳞茎20mg,依次用75%乙醇和灭菌超纯水清洗后,以新型广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取基因组DNA,以所提取的DNA为模板进行ITS1区PCR扩增和酶切反应,最后将酶切液进行琼脂糖凝胶电泳,所得图谱显示川贝类核糖体DNA的ITS1区存在限制性内切酶SmaⅠ的酶切位点,在100～200bp之间有2条清晰的酶切条带,而非川贝类均不能被酶切,没有这两条特征性条带。该方法应用于12批贝母商品药材的鉴定,可将川贝类药材与非川贝类药材区别开来。

不同品种川贝母生物碱镇咳、抗炎作用比较

目的比较太白贝母(野生、栽培)与松贝、青贝、炉贝生物碱大孔树脂纯化物的镇咳、抗炎药效学差异,为其临床应用和进一步开发利用提供依据。方法通过回流法提取,大孔吸附树脂纯化不同品种川贝母总生物碱;紫外分光光度法测定川贝母总生物碱含量。比较5种不同品种川贝母生物碱(2.3 mg·kg-1)对氨水致小鼠咳嗽及二甲苯致小鼠耳肿胀的镇咳、抗炎药效学差异。对不同品种川贝母生物碱镇咳、抗炎实验结果进行聚类分析。结果经大孔吸附树脂纯化后,各川贝母样品生物碱含量在51.93%~68.38%之间。太白贝母(野生)、太白贝母(栽培)、松贝、青贝、炉贝生物碱均可明显延长小鼠咳嗽潜伏期;太白贝母(野生)、松贝、青贝、炉贝生物碱可明显降低小鼠2 min咳嗽次数。青贝、炉贝生物碱可使二甲苯致小鼠耳肿胀率明显降低,而太白贝母(野生、栽培)抗炎效果不明显。聚类分析表明,松贝、青贝、炉贝数据聚为一类,再与太白贝母(野生)聚集,而与太白贝母(栽培)分离。结论太白贝母与松贝、青贝、炉贝生物碱一样具有镇咳作用,但抗炎效果不明显,其生物碱组成可能与松贝、青贝、炉贝有一定差异。

不同基源川贝母的总皂甙含量以及抗炎作用比较研究

目的:比较不同基源川贝母中总皂苷的含量以及抗炎作用.方法:采用重量法测定各种基源的川贝母的总皂苷含量,并通过角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验及对小鼠毛细血管通透性的影响观察几种川贝母的抗炎作用.结果:不同基源川贝母的总皂苷含量为1.35%-2.52%,其中川贝母的含量较高,太白贝母的含量偏低.川贝母、暗紫贝母、太白贝母和梭砂贝母均能减轻角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀;降低小鼠毛细血管通透性.结论:6种基源川贝母的总皂苷含量具有一定差异.川贝母、暗紫贝母、太白贝母和梭砂贝母均具有一定的抗炎作用,其中以暗紫贝母的作用最强.

基于ITS2序列鉴定川贝母及其混伪品基原植物

本研究对川贝母5种不同基原植物ITS2序列进行PCR扩增和测序;同时扩大研究范围,从GenBank上下载川贝母及其常见混伪品共10个物种13个样本的ITS2序列。用MEGA4.1计算其种间、种内的K-2-P距离,并分析各样本间ITS2序列二级结构的差异,最后利用ITS2序列重构其系统发育树。结果显示川贝母基原植物种内最大K-2-P距离为0.0276,与混伪品的种间最小K-2-P距离为0.0583;川贝母及其混伪品的ITS2二级结构存在明显差异;重构的系统发育树显示川贝母不同基原物种聚为一支,能较好与混伪品区分。研究结果表明ITS2条形码序列能够成功鉴定川贝母及其混伪品的原植物,为川贝母混伪鉴别提供了新工具。

实时荧光定量PCR法鉴别川贝母掺伪

目的 建立实时荧光定量PCR法检测川贝母样品中掺伪程度.方法 利用川贝母ITS1区序列的特点,设计4条用于特异性鉴别川贝母的正向引物1~4.同时,设计相应的反向引物,配合正向引物组成引物对,进行实时荧光定量PCR扩增.利用川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母对照品以及市售川贝母样品,通过PCR扩增来考察引物对1~4鉴别川贝母的准确性.通过实时荧光定量PCR法,考察引物检测川贝母掺伪程度的准确性.结果 引物对1~4可以准确检测川贝母的真伪;通过荧光定量PCR法,可准确检测出川贝母样品中的伪品的掺伪程度.结论 该方法简便、快捷、准确,可用于川贝母样品中掺伪程度的定量鉴别.

中药川贝对哮喘模型小鼠气道炎症的影响及可能机制研究

目的观察中药川贝对哮喘模型小鼠气道炎症及白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素13(IL-13),趋化因子受体CXCR-2和趋化因子配体[肿瘤生长相关因子-α(GRO-α)、上皮细胞嗜中性粒细胞活性蛋白-78(ENA-78)及嗜中性活性肽-2(NAP-2)]的影响。方法 BALB/c小鼠,随机分为正常组、模型组、高剂量组、低剂量组。采用卵蛋白(OVA)致敏激发复制小鼠哮喘模型。造模成功后高剂量组和低剂量组分别按18.0和9.0 mg/kg剂量给予中药川贝灌胃;正常组和模型组等量生理盐水灌胃,每天1次,连续28 d。观察各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞分类计数的变化;光镜下观察病理学变化并进行炎症评分;ELISA检测血清中IL-8和IL-13浓度;免疫组织化学法检测CXCR-2和GRO-α、ENA-78、NAP-2阳性细胞;实时PCR(real-time PCR)检测CXCR-2和GRO-α、ENA-78、NAP-2 m RNA的表达。结果模型组小鼠BALF中中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数及炎症评分较正常组增高,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组和低剂量组则较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠IL-8和IL-13浓度较正常组增高,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组和低剂量组则较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠CXCR-2和GRO-α、ENA-78、NAP-2阳性细胞和m RNA表达水平较正常组增加,差异有统计学意义(P<0.05),而高剂量组和低剂量组则较模型组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药川贝可能通过抑制IL-8、IL-13,CXCR-2和GRO-α、ENA-78、NAP-2发挥对哮喘模型小鼠的抗炎作用。

基于TCMGIS-Ⅰ的暗紫贝母生态气候产地适宜性分析

应用《中药材产地适宜性分析地理信息系统》(TCMGIS-Ⅰ)对暗紫贝母的适宜产地进行分析,得出全国不同级别的暗紫贝母适宜产地,结果与暗紫贝母的生物学特性和分布特点相符。表明TCMGIS-Ⅰ能有效指导中药材的引种栽培和野生抚育,可用于科学地确定中药材的适宜产地。

栽培川贝母的地上部分与鳞茎中总生物碱的比较

目的研究栽培川贝母地上部分的总生物碱。方法采用HPLC-ELSD法测定。结果对比分析了栽培及野生的青贝、松贝和两批栽培川贝母地上部分的生物碱类成分。结论栽培川贝母的地上部分与鳞茎的生物碱类成分保留时间一致,地上部分生物碱的总含量低于青贝、高于松贝。

PCR-RFLP定量检测川贝母真伪的研究

建立了一个适合中药材川贝母的聚合酶链式反应-限制性内切酶(PCR-RFLP)的分子鉴定方法。以提取的DNA为模板进行PCR扩增和酶切反应,真品川贝母扩增产物含有Sam I酶切位点,在100~250 bp之间存在明确的2条酶切条带,而伪品贝母扩增序列中没有Sam I酶切位点不能被切出。此外,还基于PCR-RFLP技术针对川贝母真伪性进行了相对定量分析研究。结果表明,含量10%及以上的真品川贝母能被稳定检测出。

基于遥感与GIS技术的川产道地药材川贝母适宜区研究——以暗紫贝母为例

本文根据川产道地药材暗紫贝母的生长适宜性要求,通过遥感与GIS空间分析、空间数据建库等技术,提取土地利用信息,结合暗紫贝母生长的环境指标进行量化和综合分析,得到川产道地药材暗紫贝母的适宜分布范围。结果表明,四川省红原、松潘、若尔盖、九寨沟、茂县、黑水、理县、平武、马尔康等地等地区为川产道地药材暗紫贝母的适宜分布区域,其中红原、松潘、若尔盖、茂县、黑水、马尔康、九寨沟7个县是暗紫贝母的主要分布地区,占适宜区总面积的45.2%。通过实地暗紫贝母资源调查得知,本次研究结果与暗紫贝母在四川省的实际产地基本吻合。研究表明利用GIS与遥感技术对暗紫贝母适宜区进行研究具有科学性和可行性,为暗紫贝母种植的区域布局提供信息支持。

基于熔解曲线峰形特异性鉴别川贝母真伪

目的探讨基于熔解曲线峰形及退火温度(Tm值)在川贝母真伪鉴别中的应用方法。采用《中国药典》2015年版聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别法检测川贝母样品。使用CLUSTALX软件比对NCBI-Genbank数据库下载的川贝母及其常见伪品特征序列,设计并验证引物与实时荧光PCR,检测市售样品。结果川贝母熔解曲线呈尖锐峰且Tm值为80.98℃,与常见伪品峰形有明显区别。结论此研究利用熔解曲线峰形特异性鉴定川贝母,实验操作简单,鉴定结果直观。

聚酰胺薄膜色谱鉴别栽培的川贝母

目的建立栽培川贝母的薄层鉴别方法。方法将样品的70%甲醇提取物水解并进一步精制后,在聚酰胺薄膜上展开,置365 nm荧光下观察。结果聚酰胺薄膜色谱上可得到栽培川贝母特有的荧光斑点。结论该鉴别栽培川贝母专属性较强,可区别栽培川贝母和其他贝母。