慢性乙型肝炎和乙型肝炎肝硬化患者PBMCs信号转导和转录激活因子3及血清可溶性CD30分子水平变化及其临床意义探讨

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)和乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)信号转导和转录激活因子3(STAT3)和血清可溶性CD30分子(sCD30)水平变化及其临床意义。方法2019年12月~2021年12月我院诊治的CHB患者45例(HBeAg阳性25例,HBeAg阴性20例)和乙型肝炎肝硬化患者38例(代偿期22例,失代偿期16例),另选择健康人40例,分离PBMC,采用RT-PCR法检测STAT3 mRNA,采用ELISA法检测血清sCD30水平。给予两组患者抗病毒和护肝治疗。结果肝硬化组PBMC STAT3 mRNA和血清sCD30水平分别为(1.6±0.4)和(60.3±12.9)U/L,均显著高于CHB组【分别为(1.3±0.3)和(51.8±10.2)U/L,P<0.05】或健康人【分别为(0.5±0.1)和(10.6±2.4)U/L,P<0.05】;25例血清HBeAg阳性患者STAT3 mRNA和sCD30水平分别为(1.4±0.3)和(57.2±11.9)U/L,均显著高于20例HBeAg阴性患者【分别为(1.2±0.3)和(45.1±8.1),P<0.05】,16例失代偿期肝硬化患者STAT3 mRNA和sCD30水平分别为(1.8±0.5)和(70.5±14.3)U/L,均显著高于22例代偿期肝硬化患者【分别为(1.4±0.3)和(52.9±11.8),P<0.05】;经抗病毒或/和护肝治疗3个月和6个月,CHB患者STAT3 mRNA和sCD30水平呈进行性降低,其中肝硬化患者STAT3 mRNA和sCD30水平分别为(1.2±0.2)和(43.6±8.3)U/L及(0.7±0.2)和(21.5±3.7)U/L,显著低于治疗前(P<0.05)。结论CHB和乙型肝炎肝硬化患者PBMC STAT3和血清sCD30水平升高,与病情进展关系密切,值得临床进行监测和深入研究。

棉花转录因子GhGT30基因的克隆及转录功能分析

Trihelix转录因子广泛参与植物生长发育、非生物胁迫应答等一系列生理活动。本研究根据表达序列标签(EST)电子拼接,结合cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR技术,从棉花中克隆了一个cDNA全长为2210bp的新基因,其开放读码框为2025bp,编码一个675氨基酸的蛋白,分子量约76.26kD,等电点为6.21。SMART蛋白结构预测发现,该基因在N端和C端各有一个trihelix结构域,属于GT-2型trihelix转录因子,被命名为GhGT30(GenBank登录号为JQ013098)。氨基酸序列比对显示,该蛋白和其他高等植物的GT蛋白有较高的同源性。进化树分析表明,GhGT30基因和大豆GmGT-2B基因处在同一进化树分支。拟南芥原生质体中瞬时表达分析表明,GhGT30主要定位于细胞核中。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在棉花的花、纤维(12DPA)中的表达量明显高于根、茎、叶及胚珠(0DPA),同时,该基因对干旱、高盐、低温及脱落酸(ABA)等处理都有一定程度的响应,推测该基因对棉花非生物胁迫的调控起重要作用。

炎症微环境下miR-30a调控Runx相关转录因子2对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究炎症微环境下微小RNA-30a(miR-30a)调控Runt相关转录因子2(Runx2)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:体外培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs),随机分为对照组、模型组、miR-30a mimics(模拟物)组、miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor(抑制剂)组、miR-30a inhibitor阴性对照组,除对照组外,其余各组以脂多糖诱导细胞炎症微环境,构建体外炎症模型,然后分组处理并诱导其成骨分化,采用碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-30a、成骨相关基因Runx2 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹实验检测各组细胞Runx2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。与模型组相比,miR-30a mimics组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05);miR-30a inhibitor组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均降低(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均升高(均P<0.05);miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor阴性对照组细胞各指标无明显变化(均P>0.05)。结论:炎症微环境下hPDLSCs中miR-30a高表达,可下调Runx2表达,促进炎症进展,进而抑制hPDLSCs成骨分化。

苹果属小金海棠转录因子MxMYB1基因的克隆及其原核表达

MxMYB1是苹果属小金海棠MYB类转录因子。MxMYB1含1个重复序列及MYB蛋白特有的氨基酸组成。酶切、PCR扩增及测序分析表明构建的原核表达载体结构正确,未出现碱基突变及移码现象。1mmol/LIPTG诱导2h后,在预期的蛋白分子量38kD处出现1条表达加强的蛋白条带,而未经诱导的转化子没有此蛋白条带。为进一步目的蛋白的纯化和鉴定提供试验基础。

核转录因子E2F-1和p27在大肠癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1和p27在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例大肠癌、20例正常大肠黏膜和30例大肠腺瘤E2F-1和p27的表达情况。结果 E2F-1在大肠癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。p27在正常大肠黏膜的阳性率明显高于大肠腺瘤和大肠癌。p27表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和p27的表达与大肠癌发生关系密切,可以作为肠癌发生、发展的生物学标志物。

miR-30a-5p通过靶向Runx2基因抑制成骨细胞分化

目的:构建绝经后骨质疏松大鼠模型,分析miR-30a-5p在成骨细胞分化中的功能。方法:将SD大鼠分为雌激素组、假手术组和模型组;取胫骨组织进行miRNA测序并差异表达分析;检测miR-30a-5p在各组大鼠骨中的表达含量;通过qRT-PCR检测miR-30a-5p表达对成骨分化标记相关蛋白胶原Ⅰ、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)表达的影响,同时检测对碱性磷酸酶(ALP)活性的影响;双萤光素酶报告基因检测miR-30a-5p对RUNT相关转录因子2(Runx2)的靶向调控作用。结果:miRNA测序分析结果显示,相对于假手术组、雌激素组,模型组有33种共同miRNA表达上调,选取miR-30a-5p作为本研究对象;qRT-PCR进一步验证miR-30a-5p在模型组骨组织中高表达;miR-30a-5p靶向抑制Runx2的表达,且能够抑制OCN、OPN和胶原Ⅰ的表达,降低ALP活性;而同时过表达Runx2后,OCN、OPN和胶原Ⅰ的表达升高,ALP活性增加,Runx2过表达部分缓解miR-30a-5p对成骨细胞分化的抑制作用。结论:miR-30a-5p在骨质疏松大鼠骨组织中表达上调,并能够靶向抑制Runx2的表达,从而抑制成骨细胞分化,促进骨质疏松进展,为骨质疏松症的诊断提供新的生物标志物。

MTT比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、MALAT1、HOTAIR及UCA1的影响

目的探讨噻唑蓝(MTT)比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)基因及尿路上皮癌相关1(UCA1)的影响。方法按MTT法的相关操作原则与相关流程提取膀胱癌患者的苦瓜MAP30蛋白后进行克隆、表达及纯化处理,接着提取其处理膀胱癌5637细胞并进行MTT检测。探析苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖和对MALAT1、HOTAIR及UCA1表达的相关性。结果抑制率:膀胱癌5637细胞增殖时所产生的抑制率越高时,MAP30蛋白浓度也越高,且时间越长,即MAP30蛋白浓度与膀胱癌5637细胞增殖呈正比(P<0.05)。凋亡率:膀胱癌5637细胞凋亡随MAP30浓度递增而逐渐上升,且MAP30浓度(培养48 h)为400μg/mL时,膀胱癌5637细胞凋亡率达到最高,MAP30浓度与膀胱癌5637细胞凋亡呈正比(P<0.05)。膀胱癌5637细胞lncRNA MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平随苦瓜MAP30蛋白浓度的递增而逐渐降低,检测时间为48 h且苦瓜MAP30蛋白浓度为400μg/mL时上述三项指标的表达水平均显著低于48、24 h的其他苦瓜MAP30蛋白浓度(P<0.05)。结论苦瓜MAP30蛋白对膀胱癌5637细胞增殖的抑制和凋亡诱导方面有较好的效果,且可下调MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平。

肿瘤转移抑制基因Tip30/CC3研究进展

Tip30/CC3是新发现的一种与肿瘤转移抑制相关的基因,在人类的多种组织如心、脑、肺、肾、骨骼肌和胰腺中均有表达,但在多种肿瘤组织中表达下降或缺失。研究表明,一方面,Tip30/CC3是一种转录辅助因子,具有丝/苏氨酸激酶活性,可以和RNA聚合酶Ⅱ最大亚基结合并磷酸化其C末端的七肽重复基序,在特定生理病理环境下调节细胞凋亡和血管生成相关基因的表达,从而促进细胞凋亡和抑制肿瘤转移;另一方面,Tip30/CC3能够以RanGTP非依赖形式直接与Importinβ家族成员及核孔蛋白相结合,抑制核转运蛋白的功能,通过抑制核物质输入促进细胞凋亡来发挥抑癌作用。文章就Tip30/CC3基因的发现、结构特点、与肿瘤的关系、功能、作用机理和应用前景进行了综述。

转基因PnDof30拟南芥非生物胁迫下的抗性分析

Dof(DNA-binding with one finger)转录因子是植物中特有的一类转录因子,是锌指蛋白家族中的一个具有众多成员的家族,氨基酸长度一般在200~400,含有非常保守的N端和较为多变的C端。已有研究表明,Dof转录因子家族在参与植物发育的多种生理途径和调节碳氮代谢、增加氮素的吸收与利用,提高植株抗逆能力中起着重要作用。为了探究小黑杨(Populus simonii×P.nigra)中Dof30基因的抗逆能力,本研究以转基因PnDof30拟南芥为研究对象,对干旱、盐和渗透胁迫后过表达PnDof30拟南芥株系L2和野生型拟南芥WT的生理指标进行比较。发现胁迫后拟南芥株系L2的种子萌发率、根长和鲜重等指标均高于WT;同时SOD、POD、脯氨酸含量高于WT,叶绿素和MDA含量下降;胁迫后L2中的PnDof30基因表达量显著提高。这些结果表明了PnDof30基因具有抗旱、耐盐和渗透胁迫的能力,对全面了解Dof转录因子的抗逆胁迫功能具有重要的意义。

微小RNA-30对非小细胞肺癌侵袭、转移能力的影响及机制研究

目的:研究微小RNA(miR)-30对非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭、转移能力的影响,分析其作用机制。方法:选取30例临床不同病理分期NSCLC患者的癌组织及癌旁组织以及人肺癌细胞系A549细胞和正常肺支气管上皮细胞系HBE细胞为研究对象。比较miR-30在癌组织与癌旁组织、A549细胞与HBE细胞中的表达,分析miR-30对A549细胞迁移、侵袭能力以及白细胞介素-6(IL-6)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响。结果:miR-30在肺癌组织和A549细胞中高表达(均P<0.05)。过表达miR-30的肺癌A549细胞中IL-6/STAT3信号通路分子表达上调,同时细胞的侵袭、迁移能力显著增强,而抑制miR-30表达则可产生相反的结果(均P<0.05)。结论:miR-30能促进NSCLC侵袭和转移能力,其机制可能与激活IL-6/STAT3信号通路有关。

miR-30a-5p通过靶向RUNX2减轻LPS诱导的急性肺损伤实验研究

为探讨上调miR-30a-5p对LPS诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及其与人类runt相关转录因子2(human runt related transcription factor 2,RUNX2)的关系,首先选取肺泡上皮细胞株MRC-5,转染miR-30a-5p mimics、miR-NC,分别记为miR-30a-5p组、miR-NC组,以无任何处理的细胞为Blank组,然后用1 mg/mL LPS处理,分为LPS+miR-30a-5p组、LPS+miR-NC组及LPS组。用LPS腹腔注射C57BL/6小鼠构建ALI模型,分为对照组、ALI组、ALI+miR-NC组及ALI+miR-30a-5p组。H-E染色观察肺组织病理改变并进行肺损伤评分,计算肺湿重/干重(wet weight/dry weight,W/D)比值。ELISA检测血清IL-1β、IL-6及TNF-α水平。qRT-PCR检测细胞、组织miR-30a-5p表达水平。Western blotting检测组织、细胞RUNX2表达水平。双荧光素酶报告基因试验分析miR-30a-5p与RUNX2的靶向关系。结果显示,与Blank组比较,LPS组细胞miR-30a-5p水平降低,RUNX2水平升高(P<0.01)。与miR-NC组、LPS+miR-NC组比较,miR-30a-5p组、LPS+miR-30a-5p组细胞miR-30a-5p水平升高,RUNX2水平降低(P<0.01)。与对照组比较,ALI组肺组织miR-30a-5p水平降低,RUNX2水平升高,肺损伤评分升高,W/D比值升高,TNF-α、IL-1β及IL-6水平升高(P<0.01)。与ALI+miR-NC组比较,ALI+miR-30a-5p组肺组织miR-30a-5p水平升高,RUNX2水平降低,肺损伤评分降低,W/D比值降低,TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低(P<0.01)。miR-30a-5p与RUNX2 miR 3'-UTR存在一定的结合位点,miR-30a-5p+RUNX2-WT组细胞荧光素酶活性低于miR-NC+RUNX2-WT组(P<0.01)。该研究提示,miR-30a-5p在ALI小鼠肺组织中低表达,过表达miR-30a-5p通过调控RUNX2改善小鼠肺损伤。

秦艽转录因子WRKY30的克隆及表达模式分析

以秦艽转录组数据的目标序列为模版,经反转录扩增和RACE等方法,获得一条长1 260 bp的WRKY30转录因子cDNA序列,开放阅读框为975 bp,编码324个氨基酸残基。WRKY转录因子是植物特有的一类大家族,参与植物防卫反应,介导植物应答,在植物生长发育和代谢中起调控作用,参与植物的多种生物学过程,该类家族成员中含有绝对保守的WRKYGQK氨基酸残基,且因此得名。该转录因子含有一个WRKY保守结构域和一个C2HC锌指结构,隶属于WRKY基因家族的第Ⅲ类成员,经序列相似性比对将其命名为GmWRKY30。相对定量2-△△Ct方法分析结果显示,GmWRKY30在秦艽根中的相对表达水平最高,茎中最低,和对照相比有显著性差异。在根中,受花生四烯酸胁迫后GmWRKY30的相对表达水平显著降低,银离子胁迫后表达水平显著升高。这些研究结果说明GmWRKY30基因具有组织表达特异性,对不同诱导子的响应强度有差异,推测其可能参与诱导响应的调控机制不同。

儿童自身免疫性甲状腺疾病Th1/Th2细胞极化偏移的研究

目的从T淋巴细胞分化的多环节观察儿童自身免疫性甲状腺疾病Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)Th1/Th2类细胞的极化偏移方向,探讨其免疫学发病机制。方法采用ELISA和RT-PCR法同步检测GD(46例)和HT(64例)患儿的转录因子、细胞因子以及游离CD30(sCD30)水平,另设24例健康体检儿为对照组。结果GD、HT患儿外周血单个核细胞(PBMC)转录因子GATA-3的表达较正常组明显降低,T-bet、T-bet/GATA-3比值明显升高。GD、HT患儿PBMC产生IFN-γ水平和IFN-γ/IL-4比值较正常组明显增加,而IL-4水平明显减少。GD、HT患儿sCD30水平高于正常对照组。结论GD及HT患儿的前体T细胞具有向Th1分化发育的趋向。

维布妥昔单抗治疗CD30阳性淋巴瘤的研究进展

CD30是一种跨膜蛋白,表达于一部分活化的T淋巴细胞和B淋巴细胞。CD30通过核转录因子kappa B(NK-κB)等不同信号通路发挥作用,最终导致CD30表达上调使细胞获得生存优势。虽然其特异性表达于间变T细胞淋巴瘤(ALCL)和霍奇金淋巴瘤(HL),但在其他淋巴瘤亚型中也有不同程度表达,是潜在的治疗靶点。以CD30为靶点的抗体药物偶联物维布妥昔单抗(BV)能够显著改善CD30阳性淋巴瘤患者的生存,为患者提供新的治疗选择。本文将就BV治疗CD30阳性淋巴瘤的研究进展作一综述。

中间锦鸡儿WRKY30的克隆及生物信息学分析

为了研究CiWRKY30转录因子在植物应对多种胁迫中发挥重要的作用,及对植物形态发育方面的影响。本研究以生长于内蒙古干旱高原地带且具有较高的抗寒抗旱特性的中间锦鸡儿为材料,从本实验室干旱转录数据库中获得胁迫响应转录因子CiWRKY30核苷酸序列,NCBI比对为全长序列,设计引物对该基因进行互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,cDNA)克隆,测序结果显示CiWRKY30的开放阅读框(open reading frame,ORF)长1083 bp,编码361个氨基酸。然后通过生物信息学的比对分析方法,来对CiWRKY30和其它7种WRKY转录因子的分子量、等电点等一级结构,及其它二三级结构加以预测。结果推测这8种同源性较高蛋白很可能在细胞核中发挥作用,由此得到有效信息来对接下来的功能研究起到推动作用。另外,通过对CiWRKY30转录因子氨基酸序列进行生物信息学分析,预测CiWRKY30转录因子的结构,推断其可能的功能,以及对其他同源性较高植物WRKY转录因子结构功能的预测都有助于我们对CiWRKY30转录因子的研究加以深入了解。

细胞内锌离子动态平衡及其与疾病的关系

锌离子是人体的必需微量元素,广泛参与细胞的增殖和分化、核酸与蛋白质的合成以及其它许多重要的生理活动。人体内锌离子缺乏会导致免疫力下降、男性生殖功能减退等问题;然而锌离子过剩,也会引发缺铁性贫血、提高心血管疾病发病率等。因此,维持体内锌离子的动态平衡、对于人体健康有着极其重要的作用。文章就细胞内调控锌离子动态平衡的4大关键成分:金属硫蛋白(MT,Metallothionein)、ZIP/SLC39A家族蛋白(solute-linked carrier 39A,SLC39A)、ZnT/SLC30A家族蛋白(solute-linked carrier 30A,SLC30A)、金属转录因子-1(Metal-response element-binding transcription factor-1)的结构功能及与锌离子动态平衡的关系,以及因锌离子动态平衡失衡而引发的多种疾病进行了总结和归纳。