用Blue Sepharose CL-6B快速纯化天花粉蛋白

差光谱显示染料cibacronblueF3GA与天花粉蛋白 (TCS)有特异性结合 ,复合物在可见光部分的最大吸收波长在 690nm ,摩尔消光系数ε =2 6× 1 0 - 3 (mol/L) - 1·cm- 1,解离常数Kd =1 8μmol/L,0 5mol/LNaCl可使复合物解离 .根据这一特点 ,用Blue SepharoseCL 6B凝胶从栝篓块茎中亲和纯化了TCS .此法快速、简便、高效 ,易于大量制备 .

Cibacron Blue亲和层析及应用

以Ｆ３ＧＡ（Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３ＧＡ）为配基建立了一种可用于免疫毒素（ＩＴ）分离纯化的亲和层析方法。实验中用三种不同来源的核糖体灭活蛋白（ＲＩＰ），即蓖麻毒素Ａ链（ＲＴＡ），苦瓜毒素（ｍｏｍｏｒｄｉｎ，ＭＴ）和Ｓａｐｏｒｉｎ，以探讨ＲＩＰ与Ｆ３ＧＡ的相互作用。分析显示三种ＲＩＰ均能引起Ｆ３ＧＡ吸收光诸明显红移，提示ＲＩＰ均可与Ｆ３ＧＡ发生特异结合。将Ｆ３ＧＡ与Ｓｅｐｈａｄｅｘ交联可获得Ｂｌｕｅｄｅｘ。Ｂｌｕｅｄｅｘ亲和层析是一种经济有效，简单易行，便于在各类实验室中使用的蛋白质亲和层析技术。结果表明：在低盐溶液中ＲＴＡ和ＭＴ均可迅速地与Ｂｌｕｅｄｅｘ结合，而在高盐溶液中（０．６５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）又极易被洗脱回收。这一技术用于免疫毒素的研究可有效地去除游离抗体，而不影响其杀伤活性。

小鼠血浆去除白蛋白前后的双向凝胶电泳分析

目的 探索应用DEAE CibacronBlue 3GA去除小鼠血浆白蛋白的条件。方法 在DEAE CibacronBlue 3GA与小鼠血浆结合的不同时间点取样 ,SDS PAGE及蛋白质定量检测去除白蛋白的效果 ,对最佳结合时间点所取的血浆行双向凝胶电泳 ;软件分析去除白蛋白前后双向电泳显示的蛋白质斑点变化。结果 DEAE CibacronBlue 3GA与小鼠血浆结合 40min时 ,小鼠血浆中80 %的白蛋白被去除 ,双向电泳显示的蛋白质点由处理前的 (2 11± 19)个增加到 (3 92± 11)个 ;其中蛋白表达量增加 3、5、10、2 0倍的斑点数目分别为 13、6、6、5。结论 DEAE CibacronBlue 3GA可以有效去除小鼠血浆中的白蛋白 ,该方法可以应用于实验外科领域小鼠血浆蛋白质组的研究。