狗脊化学成分的分离与鉴定

对狗脊Cibotiumbarometz(L .)J.Sm的干燥根茎的氯仿提取物及正丁醇提取物经硅胶柱色谱分离 ,得到了 5个化合物 ,它们分别是金粉蕨素 (Ⅰ ,onitin)、原儿茶酸 (Ⅱ ,protocatechuricacid)、β 谷甾醇 (Ⅳ ,β sitosterol)、胡萝卜苷 (Ⅴ ,daucosterol)、5 羟甲糠醛 (Ⅲ ,2 furancarboxaldehydl 5 hydroxymethyl) ,其中化合物 (Ⅲ )为首次从该属植物中分离得到。

大孔树脂纯化金毛狗脊叶黄酮的工艺研究

比较4种大孔树脂纯化金毛狗脊叶总黄酮的性能及工艺,结果表明,DA-201树脂对金毛狗脊叶总黄酮有良好的吸附及解吸性能。其静态分离纯化工艺的最佳参数为DA-201大孔树脂与提取液的比例为1∶5(W∶V,g∶mL)、提取液pH值为3、恒温振荡时间2 h、解吸液为60%的乙醇。动态分离纯化工艺的最佳参数为吸附和解吸最佳流速均为1 mL/min、解吸液体积为4倍柱体积。

金毛狗转录组测序及生物信息学分析

【目的】利用二代高通量测序技术获得金毛狗的转录组信息。【方法】金毛狗叶片总RNA经过提取、建库、测序和组装,获得单基因簇(Unigene)序列,再进行注释和分析,得到金毛狗转录组信息。【结果】共获得877918条金毛狗Unigene,平均长度为697.85 bp,N50为1262 bp。其中,33682条(38.37%)Unigene在数据库中获得功能注释,并与江南卷柏的序列相似度最高。分别有20379条和25246条Unigene在京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)数据库获得注释,包括代谢过程、刺激响应、生物调节、转运活性等。此外,4605条1000 bp以上Unigene经过卫星识别工具(MISA)进行简单重复序列(SSR)检测,共鉴定到6456个SSR位点,并使用Primer 3.0软件设计引物。【结论】金毛狗的转录组信息为其生物学过程、次生代谢通路和功能基因的挖掘提供了遗传资源信息,有利于其资源保护和开发利用。

傣族药食植物金毛狗栽培方法及采收加工

介绍了傣族药食植物金毛狗的植物形态、利用价值、栽培方法、采收加工以及资源保护。

金毛狗卵发育的观察

用显微镜及透射电镜(TEM)对金毛狗(Cibotium barometz(L.)J.Sm.)卵的发育进行了观察,结果表明,金毛狗幼卵时期,卵细胞与腹沟细胞间的胞间连丝发达,卵细胞内含大量囊泡,质体含淀粉粒;随着生长发育,卵细胞与腹沟细胞之间产生分离腔,但腹沟细胞与卵细胞始终通过孔区相连,发育中期,卵细胞上方开始形成卵膜。电镜观察表明,卵细胞上方的卵膜较厚,由多层膜构成,侧方和下方的卵膜较薄;孔区上方无卵膜覆盖,从而形成受精孔。发育后期,卵细胞内囊泡消失,质体退化,卵核形成大量核外突。

金毛狗的研究进展

金毛狗Cibotium barometz(L.)J.Sm.为桫椤目蚌壳蕨科植物,其根茎称为金毛狗脊。金毛狗含有挥发油类、蕨素类、酚酸类、黄酮类、多糖类、萜类及微量元素等化学成分,具有较高的观赏、药用和食用价值。近年来,金毛狗的野生资源不断减少,现已被列入国家二级保护植物。对金毛狗的资源状况、生物学特性、种苗繁育技术、化学成分和药用价值等方面进行综述,以期为其种苗繁育、野生资源的可持续发展、科学保护和合理的开发利用提供参考。

狗脊炮制工艺优选及色度值测定

目的优选熟狗脊、烫狗脊的炮制工艺,并测定色度值。方法采用HPLC法测定各炮制品原儿茶酸、原儿茶醛、5-羟甲基糠醛的含有量;采用综合评分法,以原儿茶酸、原儿茶醛含有量为指标优选炮制工艺;采用色差仪获取炮制品色度值(L、a、b),考察原儿茶酸、原儿茶醛、5-羟甲基糠醛含有量与色度值的相关性;按照优选的炮制工艺,获得基准炮制品,确定各炮制品与基准炮制品的最大色差值。结果最佳蒸制时间为6 h,最佳烫制时间为24 min;炮制过程中色度值的变化与含有量具有较强的相关性,熟狗脊、烫狗脊与各自基准炮制品最大色差值分别为3.6、4.1。结论该方法稳定可行,可用于狗脊炮制。

金毛狗离体培养及再生植株体系的建立

利用金毛狗孢子进行离体培养及再生植株的研究。结果表明：孢子采用2％次氯酸钠消毒10-12min获得无菌材料最佳。孢子萌发受培养基盐离子影响很小，其平均萌发率为91．25％。形成原叶体需60-90d。原叶体诱导孢子体最佳培养基为1／10MS，生成孢子体需80～110d。原叶体形成孢子体有3种方式。孢子体增殖培养基1／4MS＋KT 2mg／L＋NAA0．1mg／L＋蔗糖30g/L＋卡拉胶4．5g／L，pH5．8；生根培养基为MS＋0．1％AC＋蔗糖30g／L＋卡拉胶4．5g／L，pH5．8；组培苗移栽成活率达98．67％。

Box-Behnken响应面法优化烫狗脊炮制工艺

目的:采用Box-Behnken响应面法进行实验设计,建立模型优化烫狗脊的最佳炮制工艺参数。方法:首先采用高效液相色谱法分别考察了砂量比、砂烫温度、砂烫时间3个因素对烫狗脊中原儿茶酸含量的影响。在单因素试验的基础上,进一步采用Box-Behnken响应面法优选了烫狗脊的最佳炮制工艺。结果:最佳炮制工艺条件为砂量比4.67∶1、砂烫时间5.87 min和砂烫温度177.99℃。工艺验证的实测值与预测值基本一致,偏差率小于1%。结论:优化的炮制工艺参数简单可行,为规范烫狗脊的炮制工艺提供了科学依据。

狗脊升华与挥发性成分的UPLC/Q-TOF-MS分析

目的 研究狗脊升华与挥发性成分，探寻其炮制过程中产生刺激性成分的来源。方法 采用模拟砂烫、升华、水蒸气蒸馏、直接提取挥发油4种不同方式从狗脊中收集升华与挥发性成分，并用UPLC/Q-TOF-MS法进行定性分析。结果 4种方法共检识34个化合物，得出其中26个化合物的推荐分子式和名称，主要为有机酸类、有机酸酯类、生物碱类、嘌呤类、嘧啶类、小分子醛酮类、多酚类、甾体类、单萜类等化合物，相对分子质量集中在100～400。结论 检识的共有化合物柠苹酸、6-姜辣素、5-羟甲基糠醛等具有一定刺激性，应该是狗脊炮制过程中产生的刺激性成分。

狗脊中的酚酸及其苷类成分

目的研究狗脊Cibotium barometz根茎的化学成分。方法采用大孔吸附树脂、柱色谱及制备HPLC进行分离纯化,并采用波谱学分析和化学方法鉴定其结构,筛选其抗炎（LPS诱导小鼠腹腔BAW细胞分泌NO模型）、神经保护（谷氨酸诱导SK-N-SH细胞损伤模型）、肝保护（APAP诱导Hep G2细胞损伤模型）、肿瘤细胞毒（MTT法）、抗糖尿病（α糖苷酶和PTP1B酶抑制模型）和雌激素受体拮抗剂/激动剂等生物活性。结果从狗脊根茎50%乙醇提取物中分离得到了9个酚酸及其苷类化合物,分别鉴定为原儿茶酸-4-O-（6′-O-原儿茶酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、白藜芦醇（2）、对羟基肉桂酸（3）、对羟基肉桂醛（4）、C-藜芦酰乙二醇（5）、4-甲基邻苯二酚（6）、原儿茶醛（7）、对羟基苯甲酸（8）、咖啡酸（9）。在浓度10、1及0.1μmol/L下化合物1对BAW细胞释放NO的抑制率分别为75.3%、72.0%和58.0%,在浓度10μmol/L下化合物1对APAP引起的Hep G2细胞损伤具显著保护作用,细胞存活率与阳性对照双环醇相当,在肿瘤细胞毒、雌激素受体激动剂和拮抗剂筛选模型下均未显示出显著的药理活性。在浓度1μmol/L下化合物2对BAW细胞释放NO的抑制率为50.0%,其他药理模型下均未显示出显著的药理活性。结论化合物1为新化合物,命名为双原儿茶酸苷;且具有较好的抗炎、肝保护活性,化合物2-5均为首次从该属植物中分离得到。

金毛狗脊中的一个新酚苷

目的研究金毛狗脊Cibotium barometz的化学成分。方法采用柱色谱和高效液相色谱法分离纯化金毛狗脊中的化学成分,并采用光谱法鉴定其结构。结果从金毛狗脊中分离得到的6个化合物分别鉴定为6-O-原儿茶酰基-D-葡萄糖(1)、3-O-咖啡酰基-D-葡萄糖(2)、1-O-咖啡酰基-β-D-葡萄糖(3)、咖啡酸(4)、原儿茶酸(5)、对羟基苯甲酸(6)。结论其中化合物1～3、6均为首次从金毛狗脊中分离得到,化合物1为新的酚苷,命名为金毛狗脊苷D。

狗脊药材的化学成分表征及原儿茶酸含量测定

目的鉴定狗脊中的化学成分并建立原儿茶酸的UPLC含量测定方法,比较狗脊药材与饮片中原儿茶酸的含量差异。方法采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)法,ESI电离源,负离子扫描模式采集狗脊药材质谱数据,根据质谱精确相对分子质量、二级碎片离子、紫外特征吸收光谱,并与文献数据或标准品比对鉴定狗脊药材中的主要化学成分;UPLC色谱条件为采用ACQUITY UPLC CORTECS T3(100 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈-甲醇(70∶30,B)为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,进样量4μL。结果从狗脊药材中共鉴定出26个化学成分,主要包括糖苷类成分16个、酚酸类成分2个、皂苷类成分1个、苯丙素类成分1个、脂类成分1个、其他类成分5个;原儿茶酸在0.94~202.00μg/mL(R^(2)=0.9999)线性关系良好,平均回收率为101.90%,检测限为0.20μg/mL,定量限为0.79μg/mL。狗脊饮片中原儿茶酸的含量均符合药典规定标准(大于0.020%);狗脊药材中原儿茶酸的含量(质量分数为0.0038%~0.0053%)显著低于饮片(0.5560%~0.8509%),虽然经酸水解处理后,原儿茶酸的含量显著升高(0.2052%~0.4501%),但仍低于饮片含量。结论建立的UPLC-Q-TOF/MS方法可快速识别狗脊药材中的主要化学成分,可为狗脊药材的质量控制和药效物质基础研究奠定基础;建立的原儿茶酸UPLC含量测定方法灵敏度高,准确度好,具有可行性,可用于狗脊药材的质量控制。