Bacillus subtilis fmbJ产Fengycin对Rhizopus stolonifer呼吸链及营养物质利用的影响

研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)fmbJ产生的Fengycin对桃软腐病菌(Rhizopus stolonifer)呼吸代谢、线粒体NADH脱氢酶活性、琥珀酸脱氢酶活性及营养物质利用的影响。通过比较典型抑制剂(磷酸钠、碘乙酸和丙二酸)对Fengycin的叠加率。结果表明,Fengycin主要抑制Rhizopus stolonifer呼吸代谢的HMP途径。酶活性实验结果表明:在体内作用时,随着Fengycin浓度的增大,线粒体NADH脱氢酶活性逐渐减小,而体外活性变化不大;随着Fengycin浓度的增大,体内和体外作用都使琥珀酸脱氢酶活性呈现先降低后升高的现象。此外,Fengycin还使Rhizopus stolonifer对糖和蛋白质的利用受到抑制,蛋白合成受到影响。结论:Fengycin作用后,使Rhizopusstolonifer呼吸代谢受阻,合成和分解代谢的平衡被打破,引起病变,生长受到抑制。

软枣猕猴桃不定根提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌活性及其机制研究

为探明软枣猕猴桃不定根的实际应用,该研究调查了不定根甲醇提取物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌活性及其机制。结果表明:提取物对枯草芽孢杆菌抑制效果良好,抑菌圈直径达到21.33 mm,最低抑菌浓度为4 mg·mL^(-1);经提取物处理后的枯草芽孢杆菌的胞外碱性磷酸酶、核酸、蛋白质和电解质水平明显提高,表明提取物破坏了菌细胞膜使其胞内物质渗漏;扫描电子显微镜观察结果显示提取物处理后的枯草芽孢杆菌菌细胞膜皱缩,并有分泌物积聚;提取物抑制枯草芽孢杆菌的呼吸,提取物与磷酸钠的呼吸叠加率(25.0%)较小,推测提取物可能通过调控磷酸戊糖途径(Hexose Monophosphate Pathway,HMP)抑制菌呼吸。进而,对HMP中关键酶之一的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydrogenase,G6PD)的活性进行了检测,发现提取物处理后G6PD活性降低,从而证明了提取物参与调控HMP。该研究结果可以为今后利用软枣猕猴桃不定根生产抑菌相关产品提供参考。

新生儿呼吸道革兰阴性杆菌感染

目的 为了探讨新生儿呼吸道 G-杆菌感染原因、病原菌、耐药情况及相应防治措施。方法 分析 168例新生儿气管插管下取痰培养情况。结果 2 4 1份痰标本中培养阳性 2 0 8份 ,阳性率为 86.3 0 %。共检出病原菌 2 3 2株 ,其中 89.66%为 G- 杆菌 ,醋酸不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌是 3种主要致病菌。耐药率高 ,对泰能、环丙沙星较为敏感。结论 G- 杆菌是新生儿呼吸道感染重要病原菌 ,耐药率高 。

实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法的建立

目的建立CAR杆菌的PCR监测方法 ,筛查国内部分实验动物样本中CAR杆菌携带状况。方法利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列片段267bp设计引物,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法。结果利用建立的CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法对国内455份实验动物样本进行筛查,未检出CAR杆菌感染。结论建立了敏感性好,特异性高的实验动物CAR杆菌PCR监测方法 ,未见动物携带CAR杆菌。

地衣芽胞杆菌对鸡呼吸系统黏膜免疫的影响

将162只1日龄健康麻羽肉用仔鸡随机分成3组,每组3个重复,每个重复18只,CK组饲喂基础日粮,A、B组在基础日粮中分别添加50 mg.kg-1地衣芽孢杆菌制剂、30 mg.kg-1杆菌肽锌,饲养期28 d,观察3组肉鸡肺、气管、初级支气管肥大细胞、浆细胞的数量,淋巴组织的分布及气管SIgA阳性细胞的数量,研究地衣芽胞杆菌对鸡呼吸系统黏膜免疫的影响.结果表明:A组肺、气管、初级支气管浆细胞及气管SIgA阳性细胞的数量显著多于CK组(P<0.05),肥大细胞的数量显著低于CK组(P<0.05),A、B组间肥大细胞、浆细胞的数量差异不显著(P>0.05);A、B组均能增加肺、气管、初级支气管中淋巴组织的分布.可见,地衣芽孢杆菌对鸡呼吸系统的黏膜免疫有一定的促进作用.

3657株下呼吸道感染革兰阴性杆菌的临床分布及其耐药性分析

目的探讨百色地区下呼吸道感染革兰阴性菌的临床构成和优势菌的耐药情况。方法对右江民族医学院附属医院从2012年1月至2014年12月住院下呼吸感染患者标本进行分离培养，并采用Vitek2微生物鉴定系统进行鉴定和药敏分析。结果共分离鉴定出革兰阴性杆菌共3657株，构成比前5位病原菌分别为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌。临床科室中主要分布在儿内科、神经外科、呼吸内科、重症医学科和神经内科。儿内科构成比前5位病原菌分别为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌；而其他4个科室位于前两位的病原菌为肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞。耐药分析结果显示，革兰阴性杆菌对氨苄西林平均耐药率高达96．18％；对头孢呋辛酯平均耐药率高达90．36％。鲍曼不动杆菌只有3种抗菌药的耐药率低于40％；铜绿假单胞菌对氨苄西林等9种抗菌药耐药率都超过了90％；阴沟肠杆菌对氨苄西林等4种抗菌药的耐药率达到100Vo。结论下呼吸道感染常见的革兰阴性杆菌为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌；其对氨苄西林、头孢呋辛酯、头孢唑啉等抗生素的耐药性较高，鲍曼不动杆菌对多药耐药性较为严重。

整肠生对新型冠状病毒肺炎患者细胞因子水平和临床预后的影响

目的:探讨整肠生(地衣芽孢杆菌活菌胶囊)改善新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease-19,COVID-19)患者高细胞因子水平和临床预后的效果,为临床开展肠道微生态疗法提供实验依据。方法:回顾性分析2020年2月至3月武汉市同济医院中法新城院区收治的38例成年重症/危重症COVID-19患者,其中,18例患者接受了整肠生治疗(治疗组),20例患者未接受整肠生治疗(对照组)。两组患者除接受常规治疗外,治疗组患者每天还服用整肠生以调节肠道微生态。记录两组患者临床基本特征,治疗前后白细胞、淋巴细胞及血小板计数,TNF-α、IL-1β、IL-6、PCT、CRP、ALT、白蛋白和肌酐水平,以及临床预后指标。结果:治疗2周后,治疗组和对照组患者外周血中淋巴细胞计数明显高于治疗前(P<0.01),血清C反应蛋白水平显著低于治疗前(P均<0.01),但两组患者间淋巴细胞计数和C反应蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。经整肠生治疗2周后,治疗组患者血清中TNF-α和IL-1β水平显著低于治疗前,并低于对照组(P<0.05),但是两组患者的临床结局尚无显著差异(P>0.05)。结论:整肠生可以降低COVID-19患者血清中TNF-α和IL-1β水平,但尚未观察到患者临床结局的显著改善。

医院内下呼吸道革兰阴性杆菌感染59例临床分析

目的 :探讨医院内下呼吸道革兰阴性杆菌感染的病原菌谱、药物敏感性及主要危险因素。方法 :回顾性分析我院 1998年 1月～ 2 0 0 1年 12月医院内获得性下呼吸道感染 ,所取痰标本行细菌学培养 ,阳性菌以K B纸片法行药物敏感性测定。结果 :共获 73株革兰阴性杆菌 ,其中 ,铜绿假单胞菌 (2 8.77% ) ,克雷伯杆菌 (2 6 .0 3% ) ,大肠埃希菌 (2 3.2 8% )等 ,共同构成我院医院内下呼吸道感染的主要致病菌。基础疾病以气管插管或气管切开机械通气、昏迷、患有慢性阻塞性肺疾病、使用广谱抗生素以及高龄患者是造成医院内感染的主要危险因素。第三代头孢菌素、氟喹诺酮类和氨基甙类抗生素为治疗革兰阴性杆菌的有效抗生素。结论 :抵抗力低下、不合理应用抗生素及基础疾病严重是造成医院内下呼吸道感染的主要危险因素。下呼吸道感染以革兰阴性杆菌感染为主。出现多重耐药菌 ,应根据药敏选择抗生素 ,必要时联合用药。

2008～2010年我院下呼吸道感染革兰氏阴性杆菌的耐药分析

了解我院2008～2010年医院下呼吸道感染主要病原菌的分布及其耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。回顾性调查下呼吸道感染者中的2555株革兰阴性杆菌的菌种分布及耐药性。分离菌株用全自动微生物鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验。结果表明:连续三年分离率居前五位的革兰氏阴性杆菌为:铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌和嗜麦芽窄食单胞菌。大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南100.0%敏感,对哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星较敏感,但对两药的耐药率呈逐年上升趋势;铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对各类抗菌药耐药率较高,在这三年中耐药率呈逐年上升趋势,且出现泛耐药菌株。应定期监测下呼吸道感染病原菌分布和耐药情况,为临床合理使用抗菌药提供依据。

卡介苗素联合左旋咪唑治疗小儿反复呼吸道感染的疗效研究

目的探讨卡介苗素联合左旋咪唑治疗小儿反复呼吸道感染(RRTI)的临床效果。方法将2008年1月～2009年1月间在我院住院治疗的RRTI患儿随机分为治疗组和对照组,两组均给予常规治疗,治疗组同时给予卡介苗素联合左旋咪唑治疗。结果治疗组CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组在呼吸道感染次数、发热时间、咳嗽时间、抗生素使用时间方面明显优于对照组,两者分别比较差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组总有效率为95.00%,对照组为65.00%,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05);两组患儿均未见明显的治疗不良反应。结论卡介苗素联合左旋咪唑治疗小儿反复呼吸道感染的临床效果确切,无毒副作用,值得推荐应用。

PCR技术在小鼠CAR杆菌检测中的初步应用

目的 建立有效的CAR杆菌（Cilia-associated respiratory bacillus）PCR检测方法,并进行初步应用.方法 针对NCBI公布的CAR杆菌序列,选取大小合适的序列,合成质粒,并设计特异性引物,对实际样品进行检测,扩增出的阳性片段进行测序,验证该方法的可靠性.结果 成功建立了CAR杆菌的PCR检测方法,初步应用验证了该方法的可靠性.结论 该方法的建立为实验动物CAR杆菌的检测奠定基础.

某医院患者下呼吸道感染革兰阴性杆菌的分布特点及药敏分析

目的了解下呼吸道革兰阴性杆菌感染构成及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法对2007年1月—2008年5月在内蒙古医学院附属人民医院住院及门诊下呼吸道感染患者合格痰标本进行细菌学培养,细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司API-20E检定系统,用K-B法做药敏监测。结果共分离到612株致病菌,其中革兰阴性杆菌502株(82%),主要以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌和费劳地枸橼酸杆菌多见。体外药敏结果显示:革兰阴性杆菌除铜绿假单胞菌外,亚胺培南敏感性最高(100%),最低为氨苄西淋(均值15.6%),铜绿假单胞菌对阿米卡星敏感性最高(92.6%)。结论医院下呼吸道感染以革兰阴性杆菌为主,不同的细菌对同一抗菌药物有不同的敏感性,应依据药敏试验结果合理选择抗菌药物。

儿童急性下呼吸道肺炎克雷伯菌感染的临床及抗菌药药敏分析

目的:了解儿童急性下呼吸道肺炎克雷伯菌(Klebsiella basillus,KB)感染状况和特点及细菌耐药性,指导临床合理用药。方法:采用回顾性分析方法,对湖南省人民医院2006年4月～2007年4月下呼吸道感染697例患儿中,161例KB感染惠儿和同时期住院的536例非KB患儿进行临床分析。结果:小儿肺炎克雷伯菌感染具有起病急,进展快,并发症多等特点。且肺炎克雷伯菌对几种常用抗菌药物的耐药性较高。结论:临床上应采用合理手段降低耐药率的发生。

CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

目的建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2012年期间采集的1 344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1 344份标本进行检测,结果 TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40 min。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。

实验动物CAR杆菌PCR监测方法的建立

CAR杆菌(cilia-associated respiratory bacillus)是目前尚未分类的、一种实验啮齿类和兔类的呼吸道感染细菌。CAR杆菌体外培养困难,因为CAR杆菌不能在无细胞培养基上生长,给CAR杆菌的检测带来了困难。目前国际上公认的检测方法有PCR,免疫组化和组织病理学以及血清学方法;PCR方法是目前针对CAR杆菌最迅速和特异的一种诊断方法。本研究利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立CAR杆菌的PCR监测方法。特异性实验证明,不能在金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌,大肠杆菌中扩增出CAR杆菌特有的16SrRNA基因267bp片段。经过标准DNA作为对照,证明建立的方法切实有效。并对国内约400只大小鼠进行筛查,经过筛查发现,未见CAR杆菌感染。

新生期小鼠卡介苗接种和呼吸道合胞病毒感染对肺部炎症和免疫状态的影响

目的研究小鼠新生期卡介苗(BCG)接种对呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺部炎症和免疫状态的影响。方法新生BALB/c小鼠分4组:A组为对照组、B组为BCG接种组、C组为RSV感染组、D组为BCG接种后RSV感染组。RSV感染后1周观察肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及分类,ELISA法检测BALF中IFN_γ、IL_4、IL_10含量,RT_PCR检测肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达,HE染色进行肺组织炎症病理评分。结果C、D两组BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、IFN_γ含量以及肺组织TLR4mRNA表达量和炎症病理评分显著高于A、B组(P<0.01或0.05),BALF中IL_4、IL_10含量4组间差异无显著性,C、D两组之间在各项指标上差异无显著性。结论小鼠新生期BCG接种对RSV感染诱发的肺组织炎症和免疫状态无影响。

口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌对提高牛呼吸道先天免疫力的研究

本研究采用O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌喷鼻气雾免疫健康牛,并设单独使用枯草芽孢杆菌组、灭活病毒、常规疫苗免疫组和空白对照组,评价O型口蹄疫灭活病毒配合免疫增强剂枯草芽孢杆菌通过喷鼻气雾免疫健康牛对其呼吸道先天免疫力的影响。通过免疫组织化学染色显示,免疫后灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛鼻黏膜与肺内支气管黏膜中TLR7的表达和CD3^+淋巴细胞呈极显著增多(p<0.01);而常规口蹄疫灭活苗对其TLR7的表达和CD3^+淋巴细胞数量的影响不显著(p>0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛呼吸道组织中IL-12水平呈极显著增加(p<0.01),IL-4和IL-10水平无明显差异(p>0.05);而常规口蹄疫灭活苗对牛呼吸道组织中IL-4、IL-10和IL-12的影响不明显(p>0.05)。表明O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌能够提高牛呼吸道先天免疫力。本研究为研发口蹄疫灭活病毒的鼻腔疫苗提供重要的试验数据和参考。

恶性肿瘤患者医院内下呼吸道感染临床分析

目的探讨医院内恶性肿瘤患者的下呼吸道感染病原菌谱、药物敏感性及主要危险因素。方法对我科住院的恶性肿瘤患者下呼吸道感染作一回顾性分析。结果以食管癌和肺癌放化疗后医院下呼吸道感染发生率较高;在获得的54株致病菌中,革兰阴性杆菌38株,以铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌为主;革兰阳性球菌12株,以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌为主;真菌4株,药敏显示耐药现象严重。肿瘤分期晚、高龄、白细胞低下、气管插管或气管切开机械通气、昏迷、使用广谱抗生素等的患者与医院下呼吸道感染密切相关。结论下呼吸道感染以革兰阴性杆菌感染为主,为减少下呼吸道感染的发生率,对白细胞减少者进行保护性隔离,合理使用抗生素,严格无菌操作,并加强对放化疗的扶正支持治疗。

凝结芽孢杆菌活菌片预防小儿反复呼吸道感染前瞻性研究

目的评价凝结芽孢杆菌活菌片对3岁以下婴幼儿反复呼吸道感染的预防效果.方法采用前瞻性随机对照临床试验方法,选取213例6个月~3岁的反复呼吸道感染患儿,随机分为观察组、对照组、空白组,每组各71例,观察组和对照组研究期间各失访2例.观察组患儿口服凝结芽孢杆菌活菌片2个月,对照组患儿口服匹多莫德2个月,空白组患儿不给予任何干预,停药后随访观察4个月,记录每个月3组患儿呼吸道感染次数、发热、咳嗽、喘息时间、抗生素使用时间、不良反应.结果第4个月起,观察组患儿发热、咳嗽、喘息的发生率明显低于空白组;第5个月起,对照组患儿发热、咳嗽、喘息的发生率明显低于空白组;研究期间观察组患儿累计呼吸道感染、发热、咳嗽、喘息的发生率明显低于对照组和空白组,差异具有统计学意义（P〈0.05）.观察组患儿发热、咳嗽持续时间从第3个月起明显短于空白组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;对照组患儿从第5个月起发热、咳嗽、喘息持续时间明显短于空白组,差异具有统计学意义（P〈0.05）.观察组累计抗生素使用率明显低于空白组累计使用率,差异具有统计学意义（P〈0.05）;观察组与对照组累计抗生素使用率之间差异无统计学意义（P〉0.05）.研究及观察期间均未发生药物相关不良反应.结论凝结芽孢杆菌活菌片可有效降低婴幼儿反复呼吸道感染的次数,缩短发热、咳嗽、喘息时间,抗生素的使用量减少.

东革阿里不定根粗提物对枯草芽孢杆菌呼吸抑制及生物膜清除的影响研究

为探究东革阿里不定根对枯草芽孢杆菌呼吸代谢及对生物膜的清除作用,试验以东革阿里不定根粗提物为材料,测定其对枯草芽孢杆菌呼吸抑制率及呼吸代谢相关酶活性的影响,并进一步测定其对菌生物膜的清除率。结果表明:东革阿里粗提物对枯草芽孢杆菌的呼吸有显著的抑制作用,且主要影响三羧酸循环和糖酵解途径。东革阿里粗提物浓度为4 mg/mL时,对枯草芽孢杆菌生物膜的清除率最高(67%),并在该浓度下,细菌生物膜内蛋白质及多糖含量也明显降低。