目的:基于网络药理学与细胞实验探讨加味黄芪桂枝五物汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis ...目的:基于网络药理学与细胞实验探讨加味黄芪桂枝五物汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform, TCMSP)、BATMAN-TCM数据库检索并筛选加味黄芪桂枝五物汤的活性成分和作用靶点。在GeneCards数据库、OMIM数据库检索RA的作用靶点,将加味黄芪桂枝五物汤与RA的靶点取交集。通过Bioconductor平台和R软件对交集基因进行基因本体(Gene Ontology, GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)分析。将20只SD大鼠随机分为加味黄芪桂枝五物汤组(1.8 g·kg^(-1))和正常组,每组各10只。灌胃7 d后,制备体积分数为5%、10%、20%的含药血清。利用CCK-8法检测MH7A细胞的增殖情况;Annexin V-PI双染色法检测MH7A细胞凋亡情况;Western Blot检测MH7A细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase, PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平;ELISA检测MH7A细胞白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果:共检索加味黄芪桂枝五物汤的活性成分141个,作用靶点303个。RA的作用靶点4 937个,加味黄芪桂枝五物汤与RA的交集靶点127个。GO分析主要涉及对脂多糖的反应、对细胞增殖的负反馈调节、对细胞因子的反应、细胞活化调节、细胞凋亡过程的正调节等。KEGG通路主要包括PI3K/AKT信号通路、TNF信号通路、钙信号通路等。细胞培养12 h、24 h、48 h时,与对照组比较,加味黄芪桂枝五物汤高剂量组、中剂量组与低剂量组细胞的增殖抑制率升高(P<0.05)。细胞培养24 h时,与对照组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞PI3K、p-AKT表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞PI3K、p-AKT表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞IL-17、TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);与模型组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞IL-17、TNF-α、IL-6含量下降(P<0.05)。结论:加味黄芪桂枝五物汤可能通过调节PI3K/AKT信号通路等相关途径、抑制MH7A细胞增殖、促进细胞凋亡、降低炎症因子水平,从而发挥抗RA的作用。展开更多
目的:运用网络药理学和分子对接研究桂枝汤治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的分子机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)...目的:运用网络药理学和分子对接研究桂枝汤治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的分子机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)获取桂枝汤组方中药的活性成分及相关靶点,通过Cytoscape 3.9.1构建“桂枝汤-活性成分-作用靶点”网络并进行拓扑分析,筛选桂枝汤治疗AS的关键活性成分。借助GeneCards、DisGeNET、DrugBank数据库筛选AS疾病靶点;将中药活性成分相关靶点与疾病靶点导入Venny 2.1.0软件,获取交集靶点,即为桂枝汤治疗AS的潜在靶点。将潜在靶点导入到STRING 11.0数据库构建蛋白质互作(protein-protein interaction, PPI)网络并进行拓扑分析筛选核心靶点。使用R软件对潜在靶点进行基因本体(gene ontology, GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)信号通路富集分析。利用AutoDock_Vina软件对关键活性成分和核心靶点进行分子对接。结果:基于TCMSP得到146种活性成分及240个相关靶点,“桂枝汤-活性成分-作用靶点”网络拓扑分析筛选得到槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、β-胡萝卜素等为桂枝汤治疗AS的关键活性成分。通过GeneCards、DisGeNET、DrugBank数据库筛选得到AS相关靶点333个。通过Venny 2.1.0获得62个桂枝汤治疗AS的潜在靶点。PPI网络拓扑分析得到基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)等9个核心靶点。GO富集分析共获得1 595个条目,其中分子功能91个条目,细胞组分31个条目,生物学过程1 473个条目;KEGG富集分析共得到119条通路。分子对接结果显示,槲皮素与MMP-9结合活性最高。结论:桂枝汤治疗AS的作用机制复杂,主要通过槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚等活性成分作用于MMP-9、PTGS2等靶点调控脂质和动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样硬化等多条通路发挥作用。展开更多
文摘目的:基于网络药理学与细胞实验探讨加味黄芪桂枝五物汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform, TCMSP)、BATMAN-TCM数据库检索并筛选加味黄芪桂枝五物汤的活性成分和作用靶点。在GeneCards数据库、OMIM数据库检索RA的作用靶点,将加味黄芪桂枝五物汤与RA的靶点取交集。通过Bioconductor平台和R软件对交集基因进行基因本体(Gene Ontology, GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)分析。将20只SD大鼠随机分为加味黄芪桂枝五物汤组(1.8 g·kg^(-1))和正常组,每组各10只。灌胃7 d后,制备体积分数为5%、10%、20%的含药血清。利用CCK-8法检测MH7A细胞的增殖情况;Annexin V-PI双染色法检测MH7A细胞凋亡情况;Western Blot检测MH7A细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase, PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平;ELISA检测MH7A细胞白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果:共检索加味黄芪桂枝五物汤的活性成分141个,作用靶点303个。RA的作用靶点4 937个,加味黄芪桂枝五物汤与RA的交集靶点127个。GO分析主要涉及对脂多糖的反应、对细胞增殖的负反馈调节、对细胞因子的反应、细胞活化调节、细胞凋亡过程的正调节等。KEGG通路主要包括PI3K/AKT信号通路、TNF信号通路、钙信号通路等。细胞培养12 h、24 h、48 h时,与对照组比较,加味黄芪桂枝五物汤高剂量组、中剂量组与低剂量组细胞的增殖抑制率升高(P<0.05)。细胞培养24 h时,与对照组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞PI3K、p-AKT表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞PI3K、p-AKT表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞IL-17、TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);与模型组比较,加味黄芪桂枝五物汤低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞IL-17、TNF-α、IL-6含量下降(P<0.05)。结论:加味黄芪桂枝五物汤可能通过调节PI3K/AKT信号通路等相关途径、抑制MH7A细胞增殖、促进细胞凋亡、降低炎症因子水平,从而发挥抗RA的作用。
