circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

沉默circ-NDRG1对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的作用机制研究

目的:探究circ-NDRG1在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其通过靶向miR-1271对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞恶性生物学行为的影响。方法:利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1的表达水平,分析circ-NDRG1表达与患者预后生存期的相关性。实时荧光定量PCR(qPCR)检测circ-NDRG1在永生化口腔角质细胞(HOK)和口腔鳞状细胞癌HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000将NC inhibitor、circ-NDRG1 inhibitor分别转染HSC-3细胞,分别为Anti-NC组和Anti-circ-NDRG1组。MTT法和Transwell小室实验分别检测各组HSC-3细胞增殖和侵袭能力。Western blot检测各组HSC-3细胞增殖蛋白(CDK3、Cyclin C)和上皮间质转化(EMT)蛋白(ZLF8、Notch、SIX1)表达。利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1与miR-1271表达的关系。双荧光素酶报告实验验证circ-NDRG1和miR-1271的靶向关系。qPCR检测各组HSC-3细胞中miR-1271的表达。结果:TCGA数据库显示口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1的表达高于癌旁组织(P<0.01)。口腔鳞状细胞癌患者预后生存期与circ-NDRG1表达水平呈负相关(P<0.01)。与HOK细胞相比,HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113细胞中circ-NDRG1呈高表达(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够抑制HSC-3细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够下调HSC-3细胞中CDK3、Cyclin C、ZLF8、Notch、SIX1蛋白的表达(P<0.01)。口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1表达水平与miR-1271表达水平呈负相关(P<0.01)。circ-NDRG1能够靶向结合miR-1271(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够上调HSC-3细胞中miR-1271的表达(P<0.01)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1呈高表达,沉默circ-NDRG1通过靶向调控miR-1271表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和EMT进程。

急性脑梗死外周血中Circ-BBS9的表达水平及临床意义

目的:检测急性脑梗死(ACI)中环状RNA-BBS9的表达水平,探讨其作为ACI早期诊断潜在生物标志物的可能性。方法:随机选取2021年1月至12月收治的34例ACI患者作为病例组,41例非ACI患者作为对照组,收集一般资料并采血行生信分析,筛选出差异性最大的Circ RNA作为目的基因,分析两组一般资料和目的基因表达水平与ACI发生的相关性;运用ROC曲线分析目的基因诊断ACI的价值。结果:病例组的男性占比、年龄、高血压病史率、冠心病病史率、吸烟史占比、饮酒史占比、血压水平均高于对照组(P<0.05)。差异性最大的Circ RNA为Circ-BBS9。病例组的Circ-BBS9表达水平低于对照组(P<0.05)。性别、年龄、高血压患病史、冠心病患病史、吸烟史、饮酒史、血压水平以及Circ-BBS9表达均是ACI发生的相关影响因素(P<0.05),其中Circ-BBS9表达水平与ACI发生呈负相关(P<0.05),其他因素与ACI发生呈正相关(P<0.05)。Circ-BBS9具有诊断ACI的价值。结论:Circ-BBS9是急性脑梗死发病的保护因素,Circ-BBS9的表达水平是影响ACI发生的独立因素,外周血检测Circ-BBS9具有预测ACI发病的潜在价值。

circ_0013958/miR-545轴对子宫内膜癌细胞RL-95-2增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨circ_0013958对子宫内膜癌细胞RL-95-2增殖、凋亡和迁移影响及可能机制。方法收集51例子宫内膜癌组织和癌旁组织,即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)法检测组织中circ_0013958和miR-545表达。体外培养RL-95-2细胞,分别转染sh-circ_0013958、miR-545模拟物、si-circ_0013958与miR-545抑制剂后,CCK-8、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡和迁移。凋亡蛋白水平使用Western blot。Circ_0013958和miR-545的靶向关系使用双荧光素酶报告实验验证。结果子宫内膜癌组织中相较于癌旁组织高表达circ_0013958(P<0.05),而低表达miR-545(P<0.05);敲减circ_0013958或上调miR-545后,RL-95-2细胞增殖及迁移能力抑制而细胞凋亡升高(P<0.05);circ_0013958靶向负调控miR-545,下调miR-545逆转了敲减circ_0013958介导的抗增殖,抗迁移以及促凋亡的作用。结论circ_0013958通过靶向下调miR-545促进子宫内膜癌RL-95-2细胞增殖和迁移,并阻碍细胞凋亡。

hsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞表型的影响研究

目的研究环状RNAhsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞表型的影响及其对舌鳞癌发生发展的作用机制。方法构建hsa-circ-0001862质粒,采用双荧光素酶报告基因及qRT-PCR的方法来验证hsa-circ-0001862与miR-23a-3p的相互作用关系。靶向抑制hsa-circ-0001862后,利用CCK8实验以及集落形成实验分别检测舌鳞癌细胞的细胞活性及集落形成能力;通过划痕实验以及Transwell实验检测舌鳞癌细胞的迁移及侵袭能力;通过蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白,反映hsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞凋亡能力的影响。结果hsa-circ-0001862与miR-23a-3p能够相互作用,在舌鳞癌细胞中两者的表达呈负相关;在Tca-8113细胞中,hsa-circ-0001862能够抑制细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.01),并促进细胞的凋亡(P<0.01)。结论hsa-circ-0001862与miR-23a-3p相互作用,并且hsa-circ-0001862在舌鳞癌的发生发展中发挥着抑制的作用,hsa-circ-0001862或可成为治疗舌鳞癌的一个新的生物标记物和靶点。

环状RNA circ-TAGLN在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA(circRNA)circ-TAGLN在卵巢癌细胞中的表达情况和过表达circ-TAGLN对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分析circ-TAGLN在卵巢癌细胞系SK-OV-3、OC3、Caov-3、A2780、HO-8910和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达差异。分别转染pcDNA3.1对照质粒(NC组)和pcDNA3.1-circ-TAGLN质粒(circ-TAGLN组)至SK-OV-3细胞。利用平板克隆实验和Transwell实验检测卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证circ-TAGLN与miR-425-5p的靶向关系。利用RT-qPCR技术分析过表达circ-TAGLN对SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达的影响。Western blot检测过表达circ-TAGLN对SK-OV-3细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、VEGF、eNOS表达的影响。结果:与IOSE80细胞相比,circ-TAGLN在卵巢癌细胞系SK-OV-3、OC3、Caov-3、A2780、HO-8910中低表达(均P<0.05)。NC组与circ-TAGLN组中circ-TAGLN相对表达分别为(1.01±0.34)和(7.56±1.07),circ-TAGLN组SK-OV-3细胞中circ-TAGLN表达高于NC组(P<0.01)。在SK-OV-3细胞中,过表达circ-TAGLN后细胞增殖能力和侵袭能力均下降(均P<0.01)。circ-TAGLN靶向结合miR-425-5p(P<0.01)。NC组与circ-TAGLN组SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达分别为(5.57±0.91)和(1.01±0.17),与NC组相比,过表达circ-TAGLN后SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达被抑制(P<0.01)。在SK-OV-3细胞中,过表达circ-TAGLN后细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、VEGF、eNOS表达下降(均P<0.01)。结论:circ-TAGLN在卵巢癌细胞中低表达,并能通过靶向降低miR-425-5p表达抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭,circ-TAGLN可作为卵巢癌潜在的分子治疗靶点。

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,但机制尚不清楚。目的:探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.01);②与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P<0.01);③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P<0.01);④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比,干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比,过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);⑥以上结果表明,hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。

hsa_circ_0010697在胃癌发生、发展和转移中的作用及机制

目的 探讨hsa_circ_0010697在胃癌中的表达水平及发生、发展过程中可能的分子机制。方法 从美国生物技术信息中心数据库中查询hsa_circ_0010697基因序列,合成慢病毒载体;制备胃癌细胞SGC-7901。设置3组。对照组:胃癌细胞SGC-7901,未转染慢病毒载体。shRNA-NC组:空载体(慢病毒载体)转染胃癌细胞SGC-7901。hsa_circ_0010697-shRNA组:hsa_circ_0010697慢病毒载体转染胃癌细胞SGC-7901。采用qRT-PCR检测3组hsa_circ_0010697基因在胃癌细胞SGC-7901中的表达,采用CCK-8法检测3组细胞增殖活性[以波长为450 nm处的吸光度(A_(450))值表示],Tranwell实验检测3组细胞迁移和侵袭能力(穿透基质膜到达下室的细胞数量),Western blot检测3组细胞RAS-ERK信号通路上的RAS、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、E2F转录因子1(E2F1)的蛋白质相对表达量。取6周龄雄性SPF级裸鼠6只,随机分入shRNA-NC组、hsa_circ_0010697-shRNA组,每组3只,检测两组裸鼠的体重和种瘤体积。结果 qRT-PCR结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组hsa_circ_0010697基因相对表达量为1.423±0.109,显著高于对照组的0.994±0.172和shRNA-NC组的1.006±0.137(P值均<0.05)。CCK-8法检测细胞增殖结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组细胞A_(450)值为0.757±0.051,显著低于对照组的1.000±0.044和shRNA-NC组的0.981±0.054(P值均<0.05)。Transwell实验结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组穿透基质膜到达下室的细胞数量为(93±11)个,显著少于对照组的(165±16)个和shRNA-NC组的(152±15)个(P值均<0.05)。Western blot结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组RAS-ERK信号通路上的RAS、ERK1/2、CDK4、Cyclin D1、E2F1蛋白质相对表达量显著高于对照组和shRNA-NC组(P值均<0.05)。裸鼠移植瘤模型实验结果显示,饲养12、18、22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠的体重均显著大于shRNA-NC组同时间(P值均<0.05);饲养22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠种瘤体积均显著小于shRNA-NC同时间(P值均<0.05)。结论 hsa_circ_0010697可以在胃癌诊治中作为一种潜在生物标志物和治疗靶点,为胃癌的药物靶向治策略提供了新思路。

环状RNA circ-TNRC6A靶向miR-494-3p抑制膀胱癌细胞增殖和迁移

目的探讨环状RNA circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其调控膀胱癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法采用癌症基因组图谱数据库分析circ-TNRC6A在膀胱癌组织中的表达水平及其与膀胱癌患者临床分期的关系。实时荧光定量PCR(qPCR)分析circ-TNRC6A在人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞系(MGH-U3、5637、RT-4、T24、J82)中的表达水平。在膀胱癌5637细胞中分别转染circ-TNRC6A质粒(circ-TNRC6A组)和对照质粒(NC组),细胞克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测circ-TNRC6A对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。生物信息学技术预测并采用荧光素酶报告基因实验证实circ-TNRC6A和微小RNA(miR)-494-3p的靶向关系。qPCR检测circ-TNRC6A对miR-494-3p表达的影响。蛋白质印迹法检测circ-TNRC6A对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白表达的影响。结果与癌旁组织比较,circ-TNRC6A在膀胱癌组织中低表达(P<0.01)。circ-TNRC6A表达水平与膀胱癌患者临床分期有关(P<0.05)。与SV-HUC-1细胞比较,circ-TNRC6A在膀胱癌细胞系中低表达(均P<0.05),5637细胞中circ-TNRC6A表达水平最低(P<0.01)。与NC组比较,过表达circ-TNRC6A可抑制5637细胞的增殖(P<0.01),并降低细胞的迁移能力(P<0.01)。circ-TNRC6A能够靶向结合miR-494-3p(P<0.01)。与NC组比较,过表达circ-TNRC6A组降低miR-494-3p表达水平(P<0.01),并抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活(P<0.01)。结论circ-TNRC6A靶向下调miR-494-3p抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移,circ-TNRC6A可能成为膀胱癌新的治疗靶点。

circ-104640在Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌组织及血清中的异常高表达及其意义

目的探究circ-104640在Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌患者的肿瘤组织、癌旁组织、血清和肺腺癌细胞系中的表达情况,评估其作为Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌潜在的新的生物标志物和治疗靶点的可能性。方法从GEO数据库中下载微阵列数据集GSE101684并获得Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌差异化表达circRNA的表达谱,挑选特异性高表达的circ-104640作为候选标志物。使用实时荧光定量PCR法检测circ-104640在Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌患者的组织、血清和肺腺癌细胞系中的相对表达量,分析其与临床病理特征的关系。采用ROC曲线评估circ-104640对Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌的诊断价值。结果基于GEO数据库的分析结果和Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌患者的组织样本及血液样本,发现与癌旁组织、健康人血清和肺上皮细胞系相比,circ-104640在Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌组织、血清和肺腺癌细胞系中表达增加。此外,circ-104640的结构具有稳定性且对RNase-R的消化具有一定程度的抗性。ROC结果显示,在肺腺癌组织和血清中circ-104640诊断肺腺癌的AUC分别为0.829(95%CI:0.758~0.901,P<0.001)和0.874(95%CI:0.809~0.939,P<0.0001)。结论circ-104640在肺腺癌组织、血清和细胞系中呈高表达,并且与肺腺癌的发生发展有着密切的联系。circ-104640的环状结构使其能够稳定存在并对RNase-R的消化具有抗性。circ-104640可能是Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌潜在的新的生物标志物和治疗靶点,且对临床Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌有一定的早期诊断价值。

circ-0030042通过miR-145/PTEN轴调控对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨circ-0030042与人第10号染色体缺失的磷酸酶(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的相互作用关系,并分析其在增生性瘢痕(Hypertrophic scar,HS)患者中对成纤维细胞增殖与迁移的影响及作用机制。方法:通过circRNA序列和定量聚合酶链反应(PCR技术)检测正常皮肤成纤维细胞(NSFBs)和增生性瘢痕患者成纤维细胞(HSFBs)中circ-0030042的表达。用CCK8检测法检测转染48 h后的HSFBs细胞增殖情况。利用stubRFP-sensGFP-LC3基因转染、流式细胞仪及电子显微镜观察circ-0030042对miR-145/PTEN轴调控VEGF水平的表达。利用生物信息学分析、RNA免疫沉淀、免疫荧光检测等方法,揭示circ-0030042介导HS患者成纤维细胞增殖与迁移的作用机制。结果:circ-0030042在增生性瘢痕中显著上调,过表达时作为VEGF海绵抑制miR-145诱导的成纤维细胞,维持体内稳定性。此外,circ-0030042通过海绵化VEGF水平并阻断其miR-145捕获转录因子(FOXO1)mRNA来影响自噬,而circ-0030042诱导FOXO1的抑制被VEGF水平过表达或circ-0030042结合减少所抵消。过表达circ-0030042对成纤维细胞的增殖抑制与VEGF表达的抑制作用被过表达miR-145部分抵消。结论:干扰circ-0030042通过靶向下调miR-145/PTEN轴进而抑制HSFBs细胞的增殖与迁移,进一步诱导恶性细胞凋亡。

Upregulation of circ0000381 atienuates microglial/macrophage pyroptosis after spinal cord injury

Neuroinflammation exacerbates secondary damage after spinal cord injury,while microglia/macrophage pyroptosis is important to neuroinflammation.Circular RNAs(circRNAs)play a role in the central nervous system.However,the functional role and mechanism of circRNAs in regulating microglia/macrophage pyroptosis after spinal cord injury are still poorly studied.In the present study,we detected microglia/macrophage pyroptosis in a female rat model of spinal cord injury,along with upregulated levels of circ0000381 in the spinal cord.Our further experimental results suggest that circ0000381 may function as a sponge to sequester endogenous microRNA423-3p(miR-423-3p),which can increase the expression of NOD-like receptor 3(NLRP3),a pyroptosis marker.Therefore,upregulation of circ0000381 may be a compensatory change after spinal cord injury to attenuate microglia/macrophage pyroptosis.Indeed,knockdown of circ0000381 expression exacerbated microglia/macrophage pyroptosis.Collectively,our findings provide novel evidence for the upregulation of circ0000381,which may serve as a neuroprotective mechanism to attenuate microglia/macrophage pyroptosis after spinal cord injury.Accordingly,circ0000381 may be a novel therapeutic target for the treatment of spinal cord injury.

环状RNA circ_104939在肺腺癌组织中的作用研究

目的:探讨环状RNA circ_104939在肺腺癌组织中的临床意义。方法:采集10例肺腺癌病人的肿瘤组织和癌旁组织进行环状RNA测序分析,以肿瘤组织表达明显增高的环状RNA circ_104939作为研究对象。利用qRT-PCR检测30对肺腺癌组织与癌旁组织中circ_104939的表达量,验证测序结果。用qRT-PCR检测和分析circ_104939在肺腺癌细胞系(HCC-78、A549、KTA-7以及PC-9)和正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达差异。siRNA敲减circ_104939后,用MTT、平板划痕实验、Transwell实验、流式细胞术检测细胞周期实验分别检测肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)增殖、迁移、侵袭以及细胞周期的变化。利用RNA pulldown和荧光素酶报告实验验证circ_104939的可能靶标miR-191-5p。siRNA敲减circ_104939后,将肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)分别皮下注射到裸鼠体内构建荷瘤小鼠模型,检测移植瘤体积以及质量。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中的circ_104939表达显著增高(P<0.01);circ_104939在肺腺癌细胞中的表达水平明显高于正常人支气管上皮细胞(P<0.05或P<0.01)。circ_104939敲减后,KTA-7和PC-9细胞增殖、侵袭能力、细胞周期进展、PC-9细胞迁移能力下降(P<0.05或P<0.01)。circ_104939能够海绵样吸附miR-104939。circ_104939敲减后,荷瘤小鼠肿瘤体积减小(P<0.05或P<0.01),肿瘤质量显著降低(P<0.01或P<0.001)。结论:circ_104939在肺腺癌组织中呈高表达,有望作为肺腺癌诊断和治疗的靶点。

环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨环状RNA circ-DHRS3在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:应用GEO数据库分析膀胱癌组织中circ-DHRS3的表达水平及其与患者临床分期、生存期的关系。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ-DHRS3在膀胱癌细胞系UMUC3、BIU87、T24、J82中的相对表达量。构建circ-DHRS3过表达的稳转株。克隆形成实验和Transwell实验检测circ-DHRS3对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circ-DHRS3和miR-1275之间的靶向关系。qRT-PCR法检测circ-DHRS3对T24细胞中miR-1275表达的影响。克隆形成实验和Transwell实验检测miR-1275对circ-DHRS3功能的反转作用。Western blot法检测circ-DHRS3对T24细胞中Wnt/β-Catenin分子通路蛋白表达的影响。结果:膀胱癌组织中circ-DHRS3表达降低(P<0.01),并且其表达水平与患者临床分期负相关(P<0.01),circ-DHRS3高表达患者的生存期长于circ-DHRS3低表达患者(P<0.01)。circ-DHRS3在膀胱癌细胞系UMUC3、BIU87、T24、J82中低表达(均P<0.05),circ-DHRS3表达最低的膀胱癌细胞是T24细胞(P<0.01)。与NC组相比,过表达circ-DHRS3后的T24细胞增殖和侵袭能力均降低(均P<0.01)。circ-DHRS3能够靶向结合并抑制miR-1275的表达(P<0.01)。过表达miR-1275可以逆转circ-DHRS3对T24细胞增殖和侵袭的抑制(P<0.01)。与NC组相比,过表达circ-DHRS3后的T24细胞中Wnt/β-Catenin分子通路蛋白Wnt3a、β-catenin、GSK3β、c-myc均表达降低(均P<0.01)。结论:circ-DHRS3通过靶向负调控miR-1275表达,改变Wnt/β-Catenin分子通路活性,抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力。

circ-RBM33靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移

目的:探究circ-RBM33能否靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭。方法:qRT-PCR检测CNE1和HNEpC细胞中circ-RBM33、miR-383-3p表达。将CNE1细胞随机分为si-NC组、si-RBM33组、miR-NC组、miR-383-3p组和si-RBM33+anti-miR-383-3p组。分别检测细胞增殖(CCK-8法)、侵袭(Transwell法)和迁移(划痕实验)及细胞中CKS1B蛋白表达(蛋白质印迹法);荧光素酶活性实验检测circ-RBM33和miR-383-3p/CKS1B的靶向关系。结果:人鼻咽癌细胞CNE1中circ-RBM33相对表达量高于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,miR-383-3p相对表达量低于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(P<0.05)。si-RBM33组CNE1细胞中circ-RBM3相对表达量、细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于si-NC组(P<0.05);si-RBM33+anti-miR-383-3p组CNE1细胞存活率、细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均高于si-RBM33组(P<0.05)。miR-383-3p组CNE1细胞中miR-383-3p相对表达量明显增加,细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于miR-NC组(P<0.05)。转染WT-circ-RBM33/CKS1B时miR-383-3p组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.0001)。结论:敲减circ-RBM33可能通过上调miR-383-3p表达,进而抑制CKS1B表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

Circ-SMG6调节miR-132-3p/BTG2轴对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨Circ-SMG6对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及对miR-132-3p/BTG2轴的调节作用。方法心肌H9c2细胞分为:NC组(不做任何处理)、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组、缺氧/复氧+si-CircSMG6组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-NC组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-miR-132-3p组。RT-qPCR检测miR-132-3p、Circ-SMG6表达;Western blot检测BTG2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平;ELISA法检测SOD、MDA以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平CCK8法测定心肌细胞增殖;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;双荧光素酶验证Circ-SMG6与miR-132-3p,miR-132-3p与BTG2靶向关系。结果与NC组相比,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组BTG2 mRNA及蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleavedCaspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组BTG2蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.01)。与缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+antimiR-132-3p组BTG2蛋白、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论敲低CircSMG6可能通过调节miR-132-3p/BTG2轴减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

circ-HIPK3对急性心肌梗死的影响及作用机制研究

目的探讨circ-HIPK3对急性心肌梗死(AMI)的影响及作用机制研究。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组和AMI组,每组10只;通过左冠状动脉前降支结扎法构建AMI模型。另分离乳鼠原代心肌细胞并构建体外缺氧模型。采用原位末端转移酶标记染色法检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-HIPK3、miR-215表达水平,蛋白质印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-215与FOXO1的相互作用。结果与假手术组比较,AMI组小鼠心脏组织病理学改变明显,细胞凋亡数量增多,circ-HIPK3和FOXO1表达水平均升高,miR-215水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);在体外缺氧培养的心肌细胞中亦有相同变化(均P<0.01)。circ-HIPK3敲低后心肌细胞活力增加,细胞凋亡数量减少,Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。miR-215与FOXO1存在结合位点;双荧光素酶报告基因检测证实FOXO1是miR-215的下游靶基因,其表达受miR-215调控。与缺氧组比较,缺氧+si-FOXO1(敲低FOXO1)组细胞活力增加,细胞凋亡数量减少,Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);转染circ-HIPK3过表达质粒后,si-FOXO1对缺氧心肌细胞的作用被逆转(均P<0.01)。结论circ-HIPK3通过调控mi R-215促进FOXO1表达,进而增强心肌细胞凋亡作用,促进AMI的发生、发展。