急性脑梗死外周血中Circ-BBS9的表达水平及临床意义

目的:检测急性脑梗死(ACI)中环状RNA-BBS9的表达水平,探讨其作为ACI早期诊断潜在生物标志物的可能性。方法:随机选取2021年1月至12月收治的34例ACI患者作为病例组,41例非ACI患者作为对照组,收集一般资料并采血行生信分析,筛选出差异性最大的Circ RNA作为目的基因,分析两组一般资料和目的基因表达水平与ACI发生的相关性;运用ROC曲线分析目的基因诊断ACI的价值。结果:病例组的男性占比、年龄、高血压病史率、冠心病病史率、吸烟史占比、饮酒史占比、血压水平均高于对照组(P<0.05)。差异性最大的Circ RNA为Circ-BBS9。病例组的Circ-BBS9表达水平低于对照组(P<0.05)。性别、年龄、高血压患病史、冠心病患病史、吸烟史、饮酒史、血压水平以及Circ-BBS9表达均是ACI发生的相关影响因素(P<0.05),其中Circ-BBS9表达水平与ACI发生呈负相关(P<0.05),其他因素与ACI发生呈正相关(P<0.05)。Circ-BBS9具有诊断ACI的价值。结论:Circ-BBS9是急性脑梗死发病的保护因素,Circ-BBS9的表达水平是影响ACI发生的独立因素,外周血检测Circ-BBS9具有预测ACI发病的潜在价值。

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,但机制尚不清楚。目的:探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.01);②与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P<0.01);③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P<0.01);④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比,干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比,过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);⑥以上结果表明,hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

环状RNA circ_104939在肺腺癌组织中的作用研究

目的:探讨环状RNA circ_104939在肺腺癌组织中的临床意义。方法:采集10例肺腺癌病人的肿瘤组织和癌旁组织进行环状RNA测序分析,以肿瘤组织表达明显增高的环状RNA circ_104939作为研究对象。利用qRT-PCR检测30对肺腺癌组织与癌旁组织中circ_104939的表达量,验证测序结果。用qRT-PCR检测和分析circ_104939在肺腺癌细胞系(HCC-78、A549、KTA-7以及PC-9)和正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达差异。siRNA敲减circ_104939后,用MTT、平板划痕实验、Transwell实验、流式细胞术检测细胞周期实验分别检测肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)增殖、迁移、侵袭以及细胞周期的变化。利用RNA pulldown和荧光素酶报告实验验证circ_104939的可能靶标miR-191-5p。siRNA敲减circ_104939后,将肺腺癌细胞(KTA-7和PC-9)分别皮下注射到裸鼠体内构建荷瘤小鼠模型,检测移植瘤体积以及质量。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中的circ_104939表达显著增高(P<0.01);circ_104939在肺腺癌细胞中的表达水平明显高于正常人支气管上皮细胞(P<0.05或P<0.01)。circ_104939敲减后,KTA-7和PC-9细胞增殖、侵袭能力、细胞周期进展、PC-9细胞迁移能力下降(P<0.05或P<0.01)。circ_104939能够海绵样吸附miR-104939。circ_104939敲减后,荷瘤小鼠肿瘤体积减小(P<0.05或P<0.01),肿瘤质量显著降低(P<0.01或P<0.001)。结论:circ_104939在肺腺癌组织中呈高表达,有望作为肺腺癌诊断和治疗的靶点。

冠心病患者环形反义非编码基因表达与冠状动脉血管病变程度的相关性研究

目的观察冠心病患者与对照组体内环形反义非编码基因(circANRIL)表达量差异,并进一步分析circANRIL表达量与冠状动脉血管狭窄程度的相关性,探究circANRIL表达在冠心病发生发展中的临床意义。方法选取2021年2月至2021年11月因胸痛或胸闷入住山西医科大学第二医院心内科的患者共100例。根据冠脉造影结果将患者分为对照组(n=29)及冠心病组(n=71),冠心病组患者根据Gensini评分三分位数等分为轻度狭窄组(≤13分,n=23)、中度狭窄组(14~60分,n=24)、重度狭窄组(≥61,n=24)。应用RT-qPCR法检测入组患者全血circANRIL表达量。结果与对照组相比,冠心病组患者circANRIL表达量明显增加(t=-8.229,P<0.05),circANRIL表达与冠状动脉血管狭窄程度呈显著正相关(r=0.722,P<0.001)。多因素logistic回归示,circANRIL是冠状动脉血管狭窄程度的独立危险因素(P<0.001,β=0.970)。结论冠心病患者circANRIL表达显著高于对照组,在冠心病组中,circANRIL表达量重度狭窄组>中度狭窄组>轻度狭窄组,且circANRIL与冠状动脉血管狭窄程度呈显著正相关。CircANRIL是冠状动脉血管狭窄程度的独立影响因素,与冠状动脉血管狭窄程度有一定相关性。

circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的分析circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达与临床意义,探究circ-RACGAP1对膀胱癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法通过TCGA数据库探究circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达,分析circ-RACGAP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法分析细胞系5637、T24、J82、RT-4、UM-UC-3中circ-RACGAP1表达。通过脂质体转染技术将circ-RACGAP1敲降质粒转染T24细胞。克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别分析敲降circ-RACGAP1对T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用deepBase、Circbank、CircInteractome、circRNABase数据库和荧光报告系统验证circ-RACGAP1和miR-4324之间的靶向结合。qPCR检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中miR-4324表达的影响。采用Western blot法检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)蛋白和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白表达的影响。结果膀胱癌组织中circ-RACGAP1呈高表达(P<0.01),其表达随着患者临床分期恶性程度增高而升高(P<0.01)。膀胱癌细胞系中circ-RACGAP1表达明显高于人正常膀胱上皮细胞(均P<0.01)。与对照组比较,sh-sh-circ-RACGAP1组T24细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.01)。circ-RACGAP1可靶向抑制miR-4324的表达(P<0.01)。与对照组比较,sh-circ-RACGAP1组T24细胞中RACGAP1蛋白表达水平降低(P<0.01),PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子κB(NF-κB)表达水平均降低(均P<0.01)。结论膀胱癌组织和细胞系中circ-RACGAP1呈高表达,敲降circ-RACGAP1能够抑制T24细胞的恶性生物学行为,circ-RACGAP1是通过抑制miR-4324表达激活PI3K/AKT信号通路来发挥作用。

一种潜在结核病特异性诊断分子标志物Circ-IRAKM的筛选鉴定

目的分析Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中的表达及其与结核病患者临床特征的相关性,评价其作为活动型结核病分子诊断标志物的预测价值。方法通过公共数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)筛选在结核病患者外周血差异表达的Circ-RNA,qRT-PCR技术验证Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血的相对表达,采用SPSS 23.0及ROC曲线等分析Circ-IRAKM作为诊断活动型结核病的价值,GO/KEGG数据库预测候选靶点生物学功能。结果Circ-IRAKM在活动型结核病患者外周血中升高有统计学意义(t=9.096,P<0.001);Circ-IRAKM在结核病患者外周血的AUC为0.966,特异性为0.995,灵敏度为0.937;且其表达与外周血巨噬细胞相对值/绝对值呈正相关;数据库预测其可能通过NF-κB信号通路参与病原-宿主博弈过程。结论Circ-IRAKM可作为结核病患者诊断及预后的候选特异性生物分子标志物。

神经胶质瘤患者circ-VCAN表达水平及其对预后的影响

目的探讨神经胶质瘤患者circ-VCAN的表达水平及其对预后的影响。方法选取2011年1月至2015年12月空军军医大学第二附属医院接受根治性手术的胶质瘤患者57例。根据生存情况,将患者分为死亡组(22例)和生存组(35例)。采用实时荧光定量PCR检测患者胶质瘤样本组织中circ-VCAN的表达水平,采用Kaplan-Meier法评估总生存率,采用多因素Cox回归方程分析神经胶质瘤患者预后的影响因素。结果57例患者中男28例,女29例,年龄23~78岁,平均(50.0±7.8)岁;高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)28例(49.12%),低级别胶质瘤(low-grade glioma,LGG)29例(50.88%),死亡22例(38.60%)。死亡组术后复发率、卡氏功能状态评分(Karnofsky performance score,KPS)<80分比例、HGG比例及circ-VCAN高表达比例高于生存组(72.73%比25.71%,81.82%比37.14%,77.27%比31.43%,72.73%比31.43%)。Kaplan-Meier分析结果显示,circ-VCAN高表达组患者的生存率低于circ-VCAN低表达组(31.43%比68.57%),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,术后复发(HR=3.111,95%CI:1.059~9.139,P=0.039)、KPS<80分(HR=3.768,95%CI:1.072~13.246,P=0.039)、HGG分级(HR=5.487,95%CI:1.688~17.835,P=0.005)、circ-VCAN表达越高(HR=4.548,95%CI:1.614~12.811,P=0.004)的胶质瘤患者,其预后越差。结论胶质瘤患者中circ-VCAN呈显著高表达,高表达患者的生存期缩短,circ-VCAN是胶质瘤患者的危险因素。

环状RNA的表达在非小细胞肺癌细胞中的作用及机制研究

目的 探讨环状RNA Circ NFIX对非小细胞癌细胞A549增殖作用及其调控分子机制。方法 体外培养A549细胞,以正常培养的细胞为对照组,将构建的CircRNA NFIX过表达载体、CircRNA NFIX沉默表达载体、CircRNA NFIX、miR-132-3p均过表达载体及对应的对照载体分别转染至A549细胞中,分别命名为pLCDHCircRNA NFIX组、pLCDH组,si-CircRNA NFIX组、si-control组、pLCDH-CircRNA NFIX+miR-132-3p mimics组、pLCDH-CircRNA NFIX+miR-control组,每组设置9个复孔,48 h后RT-PCR验证CircRNA NFIX和miR-132-3p表达量,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3及IGF1R蛋白表达。结果 CircRNA NFIX过表达,细胞存活率、Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低,CircRNA NFIX沉默表达和CircRNA NFIX、miR-132-3p均过表达,细胞存活率、Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CircRNA NFIX过表达IGF1R表达量为(2.88±1.41),miR-132-3p过表达IGF1R表达量(0.48±0.06),差异有统计学意义(t=5.102,P<0.05)。结论 环状RNA CircNFIX在A549细胞中可通过miR-132-3p调控IGF1R表达促进细胞增殖,RNA CircNFIX有望成为非小细胞肺癌靶向治疗的新靶点。

沉默环状RNA hsa_circ_0001785表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:探究环状RNA(circR NA) hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和细胞中的表达变化及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞(MDA-MB-231和SK-BP-3)中的相对表达水平; CCK-8和克隆形成实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞活性和克隆形成能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默或上调表达hsa_circ_0001785对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织,hsa_circ_0001785在MDA-MB-231和SK-BP-3细胞中的相对表达水平明显高于人乳腺上皮细胞MCF10A。在MDA-MB-231细胞沉默hsa_circ_0001785,MDAMB-231细胞的活性和克隆形成能力明显降低,迁移距离显著减少,侵袭能力也明显下降。而在MDA-MB-231细胞中上调表达hsa_circ_0001785,MDA-MB-231细胞的活性和克隆形成能力显著升高,迁移距离明显升高,侵袭能力也明显升高。结论:hsa_circ_0001785在乳腺癌组织和乳腺癌细胞(MDA-MB-231和SK-BP-3)中的表达水平明显升高;沉默hsa_circ_0001785显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而上调表达hsa_circ_0001785明显促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

环状RNA及其在肝病中的作用

环状RNA(circRNA)是一种不具有5’末端帽子结构和3’末端的poly(A)尾巴的新型非编码RNA,是由非共价键形成的反向连接的闭合环状结构。circRNA由于其具有作为miRNA分子海绵及生物标志物的作用,可用于肝脏疾病的治疗和诊断,因此,circ RNA已逐渐成为当今的研究热点。我们针对circRNA以及circRNA在肝病中的研究进行了综述,以期对未来的肝脏疾病的研究和治疗提供理论基础和新思路。

环状RNA circ-0014359在胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨环状RNA circ-0014359(简称circ-0014359)在胶质瘤组织中的表达及意义。方法实时定量PCR法检测118例胶质瘤组织和60例正常脑组织circ-0014359的表达水平。以circ-0014359表达量中位数为截断值,分为高表达和低表达。随访结束时间为2019年6月,总生存期(OS)为术后第1天至死亡或最后一次随访,无进展生存期(PFS)为术后至第一次发生疾病进展或任何原因死亡的时间。结果胶质瘤组织circ-0014359表达水平明显高于正常脑组织(P<0.05)。随胶质瘤病理级别增高,circ-0014359表达水平明显增高(P<0.05)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示,circ-0014359高表达是胶质瘤病人OS和PFS较短的独立影响因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,高表达组OS和PFS[分别为(25.31±8.03)个月和(15.22±3.13)个月]明显低于低表达组[分别为(35.19±7.03)个月和(19.32±2.84)个月;P<0.05]。结论胶质瘤组织circ-0014359呈高表达,并且与不良预后有关。

靶向Wnt1的miRNA与circRNA及其靶基因间相互作用的生物信息学分析

为对靶向Wnt1的7种mi RNAs进行circ RNAs及其靶基因的预测,同时分析其与circ RNAs及靶基因间的相互作用,分别采用Starbase及mi RWALK软件,对文献报道的靶向Wnt1基因的let-7e、mi R-21、mi R-34a、mi R-122、mi R-148a、mi R-148b与mi R-152等7种mi RNAs的circ RNAs和对应的靶基因进行生物信息学预测.利用Cytoscape 3.2.1对这7种mi RNAs和预测所得到的circ RNAs及对应的靶基因进行网络分析.并进一步对预测到的靶基因通过DAVID软件进行通路分析.Starbase软件对这7种不同mi RNAs所预测的靶circ RNAs的数量分别为58、15、41、20、28、28、28个.分别比较mi RWALK中7～9个以上软件共有的mi RNAs及其与靶基因的关系,发现CHD7基因是唯一一个在三种不同预测范围内与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b和mi R-152等4种mi RNAs相对应的靶基因.CNOT6、NBEA、ZFYVE26与ZDHHC17是在两种不同预测范围内与至少4个mi RNAs相对应的靶基因.在7种mi RNAs所预测靶基因相关的KEGG信号通路中,7～9个软件以上共有的信号通路为Focal adhesion信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路与TGF-beta信号通路.在MAPK信号通路中DUSP1与MRPS35_hsa_circ_001042均分别是与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b及mi R-152等4种mi RNAs相互作用的靶基因与circ RNA.本研究对靶向Wnt1的mi RNAs及其相互作用的circ RNAs、靶基因与信号通路等进行了网络分析与预测,为进一步分析它们之间的相互作用奠定了基础.

外周血单个核细胞has circ RNA 103017表达在肺结核诊疗中的临床意义

目的探究has circ RNA 103017在肺结核患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达及其在肺结核诊疗中的临床意义。方法选取我院收治的80例未经治疗的活动性肺结核患者、50例肺炎患者、50例肺癌患者以及60例健康体检者,分别为肺结核组、肺炎组、肺癌组和健康组。另外,依据肺部有无空洞和肺部病灶范围是否大于2个将肺结核患者分为两个亚组。运用实时荧光定量PCR法检测这些受试者PBMCs中hsa circ RNA 103017的表达。运用ROC曲线验证hsa circ RNA 103017作为肺结核诊断指标的特异性和敏感度。结果肺结核患者PBMCs中hsa circ RNA 103017的表达水平显著高于其他组(H=72.34,P<0.01)。肺结核患者中,有空洞组hsa circ RNA 103017水平显著高于无空洞组(U=352.81,P<0.01);病灶范围>2个肺野组显著高于≤2个肺野组(U=512.26,P<0.01)。接受6个月治疗后的肺结核患者PBMCs中hsa circ RNA 103017的表达水平较治疗前显著降低(Z=-2.73,P<0.01)。ROC曲线结果显示,hsa circ RNA 103017在鉴别肺结核组与肺炎组、肺癌组和健康组的曲线下面积(AUC)分别是0.820、0.865、0.846。结论检测肺结核患者PBMCs中hsa circ RNA 103017的表达对于肺结核诊断和疗效监测具有重要的临床意义。

骨肉瘤组织中环状RNA circ-0002052表达水平及与临床病理特征和预后的相关性分析

目的分析骨肉瘤组织中环状RNA circ-0002052表达水平及与临床病理特征和预后的相关性。方法采用回顾性研究,收集新疆医科大学第一附属医院收治的60例骨肉瘤患者的临床资料,经手术切除肿瘤组织和癌旁正常组织,根据实时荧光定量聚合酶链式反应法对组织标本中环状RNA circ-0002052的表达情况进行检测,分析circ-0002052表达与患者临床病理特征的相关性。随访3年,比较circ-0002052不同表达情况的患者生存时间的差异;采用多因素Cox回归分析影响患者预后情况的危险因素。结果相比癌旁正常组织(1.06±0.09),环状RNA circ-0002052在骨肉瘤组织中的表达量(0.45±0.05)显著下调(P<0.01)。根据骨肉瘤组织环状RNA circ-0002052表达量的均值(0.48),分为高表达组(33例)与低表达组(27例);结果显示,低表达组TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和远处转移发生率均明显高于高表达组(P<0.01),两组性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径和分化程度的比较,均无显著差异(P>0.05)。低表达组3年总生存率为37.05%(10/27),明显低于高表达组72.73%(24/33)(P<0.05);低表达组3年总生存期为(16.06±1.15)个月,明显短于高表达组(28.07±2.25)个月(P<0.01)。环状RNA circ-0002052低表达是骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论环状RNA circ-0002052在骨肉瘤组织中具有表达降低的特点,并且其低表达与患者预后不良密切相关。

环状RNA的生物学功能及其对动物肠道屏障功能作用的研究进展

环状RNA(circ RNA)是一类广泛存在于生物体细胞中的非编码RNA分子(ncRNA),circ RNA的环状结构造就了其独特的生物学功能,成为近年来的研究热点。circ RNA通过微小RNA(miRNA)海绵、与蛋白质互作、参与蛋白质合成以及调控基因转录等机制,在疾病、生理过程等方面发挥重要的调控作用。肠道是机体消化吸收营养物质的主要器官,也是防止肠道微生物侵袭的先天屏障,肠屏障功能的完整性对机体的正常生长发育至关重要。在无抗养殖大背景下,动物的肠屏障损伤问题愈受关注,circ RNA是一种内源性调节物质,可作为解决肠屏障损伤问题的切入点。本文主要对circ RNA的分类、合成方式、生物学功能、circ RNA成环的影响因素及circ RNA对动物肠道屏障功能作用的研究进展等方面进行综述,为后续相关研究提供参考。

环状RNAcirc-ccnb1通过抑制细胞周期蛋白核转位对食管鳞癌增殖和迁移的影响

目的探讨环状RNA circ-ccnb1对细胞周期蛋白(cyclinb1、ccnb1)的作用,以及对食管鳞癌增殖和迁移的影响。方法①收集60例食管鳞癌组织及癌旁正常组织标本,按癌组织及正常组织分为两组,通过免疫组化检测两组组织中ccnb1的表达,并分析食管鳞癌中ccnb1表达与临床病理因素(淋巴结转移、病理分期)之间的相关性。②培养食管鳞癌细胞,并分为两组:正常食管上皮细胞(Het1-A)和食管鳞癌细胞109(EC109)。采用蛋白免疫印迹法(WB)检测两组中ccnb1蛋白的表达。③用携带circ-ccnb1的质粒转染EC109,检测其中ccnb1的核转位情况,将细胞分为3组:未转染组(Blank组)、转染空载体组(Vector组)及转染circ-ccnb1组(cir-ccnb1组)。转染成功后进行核桨分离,采用WB检测转移至胞核内的ccnb1蛋白量的变化,细胞增殖实验(CCK-8法)及划痕实验检测细胞增殖率、迁移率。结果食管鳞癌组织中ccnb1蛋白的表达高于正常组织,EC109细胞中ccnb1蛋白的表达高于Het1-A细胞(均P<0.05)。与Blank组相比,cir-ccnb1组细胞中ccnb1蛋白的核转位水平明显降低,细胞增值率、迁移率降低(均P<0.05)。结论cir-ccnb1可以通过抑制ccnb1在食管鳞癌细胞中的核转位进而影响食管鳞癌的发展,即抑制癌细胞增殖和迁移。

Circ-0080229结合蛋白的筛选及其在胶质瘤调控中的意义

目的鉴定EGFR基因来源的环状RNA circ-0080229在胶质瘤中所结合的蛋白,并分析其在胶质瘤调控中所发挥的作用。方法通过PCR技术验证circ-0080229在胶质瘤中高表达,再应用RNA结合蛋白纯化实验及蛋白质谱技术,分析circ-0080229所结合的蛋白质。利用TCGA数据库进行circ-0080229结合蛋白的差异表达分析及生存分析,筛选出最有价值的circ-0080229结合蛋白ANXA2,并进行细胞功能实验的验证。结果共有33个蛋白可与circ-0080229结合,其中以ANXA2和SIL1为代表的蛋白与胶质瘤病理分级和预后相关。在胶质瘤U251细胞系中,下调ANXA2的表达可显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论环状RNA circ-0080229可特异性结合ANXA2等RNA结合蛋白,同时circ-0080229结合蛋白ANXA2可促进胶质瘤的增殖能力、迁移能力与侵袭能力。

稳定过表达环状RNA circ-Fam114a2膀胱癌T24细胞株的建立

目的利用慢病毒载体建立稳定过表达环状RNAcirc-Fam114a2的膀胱癌T24细胞株。方法利用pLVX-CMV-minicrRNA-EF1-GFP-Puro质粒,制备慢转录病毒pLVX-CMV-minicrRNA-EF1-GFP-Puro-circ-Fam114a2(circ-Fam114a2)和pLVX-CMV-minicrRNA-EF1-GFP-Puro-Vector(Vector),并转染膀胱癌T24细胞系。用嘌呤霉素筛选阳性表达细胞,并用荧光显微镜,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Northern印记等实验验证circ-Fam114a2基因成环及过表达情况。最后,通过CCK-8实验和克隆形成实验初步探究circ-Fam114a2对T24细胞增殖的影响。结果转染并用嘌呤霉素药筛后的T24细胞在荧光显微镜下呈现出绿色荧光。qRT-PCR显示过表达组细胞circ-Fam114a2水平是对照组的28倍,而Fam114a2mRNA没有明显变化。Northern印迹显示circ-Fam114a2在T24细胞中成功成环并过表达。CCK-8实验和克隆形成实验表明过表达circ-Fam114a2显著抑制T24细胞增殖。结论该实验成功建立了稳定高表达circ-Fam114a2的膀胱癌T24细胞模型,并初步探究circ-Fam114a2对膀胱癌细胞的增殖抑制作用。为进一步研究circ-Fam114a2在膀胱癌中的作用和机制奠定了基础。

急性髓系白血病(AML)中hsa_circ_0000254的实验研究

目的:通过克隆环状RNA hsa_circ_0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础。方法:人工合成hsa_circ_0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到慢病毒过表达载体pLCDH-ciR中,测序验证。筛选阳性克隆,分别以pLCDH-circ254(C254)、NC(pLCDH-ciR)转染293T细胞,培养40 h后收集细胞进行PCR检测及产物测序验证。结果:pLCDH-circ254表达载体经测序验证,测序峰图正常,且无杂峰或叠带,序列对比吻合,表明hsa_circ_0000254成功插入环状RNA表达载体pLCDHciR,过表达载体构建成功,表达效率高达1万倍。结论:成功构建hsa_circ_0000254表达载体,可高效表达hsa_circ_0000254。

糖尿病鼠骨骼肌萎缩相关环状RNA的研究

骨骼肌萎缩是糖尿病患者中、晚期严重并发症之一,为研究其分子发病机制,利用链脲佐菌素诱导构建小鼠1型糖尿病模型,通过高通量测序技术,调查与糖尿病肌萎缩病变相关的环状核糖核酸(circular ribonucleic acid,circRNA)表达谱,并利用生物信息分析软件探究circRNA在糖尿病骨骼肌萎缩病变中的可能作用.结果显示,与正常同基因背景小鼠的同类组织相比,糖尿病鼠的腓肠肌呈现:(1)肌纤维面积明显减小,运动功能下降;(2)含有1403个与1型糖尿病发生发展相关的差异表达circRNA,其中,690个上调和713个下调;(3)通过基因本体、京都基因和基因组百科全书的功能富集分析显示,差异表达的候选circRNA亲本基因主要富集于转录调节生物学过程、细胞质成分和蛋白质结合分子功能等方面,以及促分裂原活化蛋白激酶信号通路、泛素介导的蛋白降解、叉头盒蛋白O通路与糖尿病肌萎缩相关的信号通路等.通过数据库信息和生物信息分析技术,预测与肌萎缩基因MuRF1相结合的小RNA(mirco RNA,miRNA),并挖掘出可调控它们表达的功能circRNA,构建了circRNA-miRNA-mRNA的潜在分子调控反应轴和互作网络.研究结果表明,与肌萎缩相关的circRNA在糖尿病发病中具有调控关键分子的潜能.