circBPTF靶向miR-107对H_(2)O_(2)诱导SK-N-SH神经细胞氧化损伤的影响

目的探讨环状RNA染色质重塑因子(Circular RNA bromodomain PHD finger transcription factor,circBPTF)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经细胞氧化应激、凋亡的影响及其对微小RNA-107(microRNA-107,miR-107)的调控作用。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞(Human neuroblastoma cells,SK-NSH),采用H2O2诱导SK-N-SH细胞建立细胞氧化损伤模型;siRNA阴性对照(siRNA negative control,si-NC),circBPTF小分子干扰RNA(circBPTF small interfering RNA,si-circBPTF)、阴性对照mimic NC序列(Negative control mimic NC sequence,miR-NC),miR-107寡核苷酸模拟物(miR-107 oligonucleotide mimic,miR-107 mimics),si-circBPTF与miRNA阴性对照(miRNA negative control,anti-miR-NC),si-circBPTF与miR-107特异性寡核苷酸抑制剂(miR-107 specific oligonucleotide inhibitor,anti-miR-107)转染至H2O2诱导的SK-N-SH细胞;采用实时定量PCR(Quantitative real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)法检测细胞中circBPTF,miR-107的相对表达水平;试剂盒检测乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放量与丙二醛(Malondialedhyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circBPTF与miR-107的靶向关系;Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白相对表达水平。结果H2O2诱导的SK-N-SH细胞中circBPTF的相对表达水平升高(P<0.05),miR-107的相对表达水平降低(P<0.05),LDH释放量与MDA的水平升高(P<0.05),凋亡率及Bax蛋白相对表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达水平降低(P<0.05);转染si-circBPTF或转染miR-107 mimics可明显降低H2O2诱导的SK-N-SH细胞中LDH释放量与MDA的水平及凋亡率(P<0.05),SOD的水平及Bcl-2蛋白相对表达水平升高(P<0.05),还可降低Bax蛋白相对表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circBPTF可靶向结合miR-107;共转染si-circBPTF与anti-miR-107可明显逆转转染si-circBPTF对H2O2诱导的SK-NSH细胞凋亡及氧化应激的作用。结论抑制circBPTF的表达可上调miR-107表达来抑制H2O2诱导SKN-SH细胞氧化应激及其诱导的细胞凋亡,从而减轻神经细胞氧化损伤。

沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子通过靶向miR-15a-5p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤影响的研究

目的探讨沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子(circBPTF)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法取对数生长期hRMEC加入浓度为5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为正常对照(Con)组,加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为HG组。将si-NC、si-circBPTF、miR-NC、miR-15a-5p mimic、si-circBPTF和miR-15a-5p inhibitor(共转染)分别转染至hRMEC,转染成功后加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h,分别为HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-15a-5p mimic组、HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组。qRT-PCR法检测circBPTF、miR-15a-5p表达,试剂盒检测丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)活性,细胞计数试剂盒8法与流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率,双荧光素酶报告实验检测circBPTF与miR-15a-5p的靶向关系,Western blot法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达。结果与Con组比较,HG组MDA、凋亡率、circBPTF表达升高(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达降低(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-circBPTF组MDA、凋亡率、circBPTF表达降低(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-15a-5p mimic组MDA、凋亡率降低(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。与HG+si-circBPTF组比较,HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组MDA、凋亡率升高(P<0.05),SOD、细胞活力、miR-15a-5p表达降低(P<0.05)。Starbase预测显示,circBPTF与miR-15a-5p存在互补序列,上调miR-15a-5p表达可抑制转染野生型载体WT-circBPTF的细胞相对荧光素酶活性(P<0.05)。结论沉默circBPTF可通过靶向调控miR-15a-5p表达促进细胞增殖及抑制细胞氧化应激、凋亡,减轻高糖诱导的hRMEC损伤。