circPTPRA靶向miR-140-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的机制研究

目的:探讨circPTPRA对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移的影响及其对miR-140-5p的调控作用。方法:原代分离培养人正常滑膜成纤维细胞与类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分为NC组(不转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-circPTPRA组(转染si-circPTPRA)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-140-5p组(转染miR-140-5p mimics)、anti-miR-NC+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-NC和si-circPTPRA)、anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组(共转染anti-miR-140-5p和si-circPTPRA)。qRT-PCR检测circPTPRA与miR-140-5p的表达量;MTT实验检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circPTPRA与miR-140-5p的靶向关系。结果:与正常滑膜成纤维细胞比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中circPTPRA的表达量升高,miR-140-5p的表达量降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-circPTPRA组细胞活力降低,迁移细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-140-5p组细胞活力降低,迁移细胞数减少(P<0.01);circPTPRA可靶向调控miR-140-5p;与anti-miR-NC+si-circPTPRA组比较,anti-miR-140-5p+si-circPTPRA组细胞活力升高,迁移细胞数增多(P<0.01)。结论:干扰circPTPRA表达可通过靶向调控miR-140-5p的表达而抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移。

circPTPRA靶向miR-556-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨circPTPRA对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法收集41例乳腺癌患者的癌组织和对应的癌旁组织,RT-qPCR检测组织中circPTPRA和miR-556-3p表达水平。体外培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别转染pcDNA-circPTPRA或anti-miR-556-3p或共转染pcDNA-circPTPRA与miR-556-3p后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证circPTPRA和miR-556-3p靶向关系。结果乳腺癌组织中circPTPRA表达低于癌旁组织(P<0.05),而miR-556-3p表达高于癌旁组织(P<0.05)。过表达circPTPRA或敲减miR-556-3p后,MDA-MB-231细胞OD值、迁移数和侵袭数降低(P<0.05)。circPTPRA靶向负调控调控miR-556-3p表达。过表达miR-556-3p逆转过表达circPTPRA对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论过表达circPTPRA可能靶向下调miR-556-3p阻碍乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭。

circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的探讨circPTPRA与miR-1252在胃癌中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法取术中切除的胃癌组织与癌旁组织(距癌组织>5 cm处的组织)进行实验,随后采用qRT-PCR检测胃癌组织、癌旁组织中circPTPRA与miR-1252的表达情况。体外培养人胃癌细胞HGC-27,分别转染pcDNA、pcDNA-circPTPRA、si-NC、si-circPTPRA、anti-miR-NC、anti-miR-1252、共转染pcDNA-circPTPRA和miR-NC、共转染pcDNA-circPTPRA和miR-1252 mimics。CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室实验检测细胞迁移,Transwell Matrigel体外侵袭实验检测细胞侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测circPTPRA与miR-1252的靶向关系;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,胃癌组织中circPTPRA的表达量显著降低(P<0.05),miR-1252的表达量显著升高(P<0.05)。与转染pcDNA组比较,转染pcDNA-circPTPRA组细胞活力显著降低,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低,细胞迁移数及侵袭数显著减少,MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。circPTPRA能够靶向结合miR-1252;转染pcDNA-circPTPRA组miR-1252的相对表达量显著降低(P<0.05);转染si-circPTPRA组miR-1252的相对表达量显著升高(P<0.05)。与转染anti-miR-NC组比较,转染anti-miR-1252组细胞活力显著降低,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低,细胞迁移及侵袭数显著减少,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与共转染pcDNA-circPTPRA和miR-NC组比较,共转染pcDNA-circPTPRA和miR-1252 mimics组细胞活力显著升高,G0/G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,迁移及侵袭细胞数显著增多,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论circPTPRA过表达可通过负向调控miR-1252而抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及诱导细胞周期阻滞。

CircPTPRA通过miR-145-5p/KLF5轴调节ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡的机制研究

该文旨在探讨CircPTPRA通过mi R-145-5p/KLF5轴调节氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的机制。将血管内皮细胞(EVC-304)分为control组、ox-LDL组、oxLDL+si-NC组、ox-LDL+si-CircPTPRA组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-145-5pmimic组、ox-LDL+si-CircPTPRA+inhibitor NC组、ox-LDL+si-CircPTPRA+miR-145-5p inhibitor组。qRT-PCR检测各组细胞中CircPTPRA、miR-145-5p和KLF5 mRNA的表达情况;MTT法、EdU染色检测细胞增殖情况;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、SOD、GSH-Px水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印记法检测Ki-67、cleaved caspase-3、KLF5蛋白表达量;荧光素酶实验验证miR-145-5p与CircPTPRA、KLF5的关系。与control组相比,ox-LDL组EVC-304细胞CircPTPRA和KLF5mRNA表达量,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平,细胞凋亡率,cleaved caspase-3和KLF5蛋白水平显著升高,miR-145-5p表达量,细胞D490值(24、48 h)、增殖率,GSH-Px、SOD水平,Ki-67蛋白表达量显著降低。敲除CircPTPRA或过表达miR-145-5p都可降低细胞炎症反应程度、氧化应激水平和细胞凋亡水平。与ox-LDL+si-CircPTPRA+inhibitor NC组相比,敲低miR-145-5p可促进细胞炎症反应、氧化应激和细胞凋亡。干扰CircPTPRA可调控miR-145-5p/KLF5轴,进而减少ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡。