CircRHOT1调节miR-187-3p/SOX4轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染CircRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2)。各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率。采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控。结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05)。与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8^(+)T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸。

人肌层浸润性膀胱癌组织及血清中circRHOT1表达及临床意义

目的 探讨肌层浸润性膀胱癌(MIBC)患者组织和血清中circRHOT1表达及临床意义。方法 选取2011年3月至2017年4月在我院泌尿外科接受根治性膀胱切除术的91例MIBC患者作为研究对象,另选取同期在本院体检健康且无膀胱癌病史的志愿者80例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和血清circRHOT1表达的关系。采用受试者特征工作曲线(ROC)评价血清circRHOT1表达诊断MIBC的效能。Spearman相关性分析分析组织和血清circRHOT1表达。Kaplan-meier法绘制总生存期(OS)、疾病特异性生存期(DSS)、无复发生存期(RFS)曲线。Cox风险比例回归模型分析影响MIBC预后的因素。结果 MIBC患者血清circRHOT1表达水平显著高于健康对照组[1.49(1.07,2.10) vs.1.00(0.82,1.26),P<0.001]。血清circRHOT1水平诊断MIBC的ROC曲线下面积为0.774(95%CI:0.705~0.843)。MIBC组织circRHOT1表达水平显著高于癌旁组织[1.83(1.45,2.62) vs.1.09(0.85,1.33),P<0.001]。Spearman相关性分析结果显示,血清circRHOT1水平与组织circRHOT1表达呈正相关(r=0.388,P<0.001)。MIBC患者血清和组织circRHOT1表达仅与Ki-67有关(P<0.05)。组织circRHOT1低表达和高表达组患者中位OS分别为2.52年、1.90年(P=0.001),中位DSS为2.52年、1.90年(P=0.004),中位RFS为1.79年、1.16年(P=0.001)。血清circRHOT1低水平和高水平组患者中位OS分别为2.09年、1.98年(P=0.006),中位DSS为2.09年、1.98年(P=0.019),中位RFS为1.61年、1.16年(P=0.003)。经单因素和多因素Cox风险比例回归分析,血清circRHOT1表达影响MIBC患者术后OS、DSS和RFS的独立预后因素(P<0.05)。结论circRHOT1在MIBC组织和血清中高表达,且其高表达与复发及死亡高风险相关。血清circRHOT1水平可作为MIBC诊断生物标志物。

地锦草乙醇提取物通过circRHOT1/miR-29a-3p轴抑制结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

目的:探讨地锦草乙醇提取物(EEEH)对人结直肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法:体外培养SW480细胞,实验分为Con组、EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组、si-NC组、si-circRHOT1组、EEEH-H+pcDNA组、EEEH-H+pcDNA-circRHOT1组,分别以si-NC、si-circRHOT1、pcDNA、pcDNA-circRHOT1转染SW480细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验分别检测转染后各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力,qPCR法检测转染后各组SW480细胞circRHOT1和miR-29a-3p的表达,WB法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测circRHOT1与miR-29a-3p之间的靶向关系。结果:与Con组比较,EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组SW480细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达均明显降低(均P<0.05),circRHOT1的表达均降低(均P<0.05)而miR-29a-3p的表达均升高(均P<0.05)且呈剂量依赖性;细胞的存活率、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均减少(均P<0.05)。circRHOT1可靶向负调控miR-29a-3p的表达。敲减circRHOT1可抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而过表达circRHOT1则可减弱EEEH对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:EEEH可通过调控circRHOT1/miR-29a-3p轴而抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

circRHOT1靶向miR-144-3p调控喉癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 :分析circRHOT1、miR-144-3p在喉癌组织中的表达水平,探讨circRHOT1靶向miR-144-3p对喉癌细胞生物学行为的影响。方法 :RT-qPCR检测circRHOT1、miR-144-3p在32例喉癌组织标本和15例声带息肉组织标本中表达情况。Pearson相关分析确定喉癌组织中circRHOT1、miR-144-3p表达关系。将si-NC、sicircRHOT1、miR-NC、miR-144-3p mimics、si-circRHOT1+anti-miR-NC、si-circRHOT1+anti-miR-144-3p分别转染TU686细胞,采用CCK-8法、划痕愈合实验、流式细胞术分析TU686细胞的体外增殖、迁移能力和凋亡情况。双荧光素酶报告实验用于分析circRHOT1、miR-144-3p的靶向关系。结果 :喉癌组织中circRHOT1表达水平较声带息肉组织显著升高,miR-144-3p表达水平较声带息肉组织显著降低。喉癌组织中circRHOT1、miR-144-3p表达呈负相关关系。下调circRHOT1表达后TU686细胞抑制率、凋亡率、miR-144-3p表达水平显著升高,划痕愈合率显著降低。过表达miR-144-3p后TU686细胞抑制率、凋亡率显著升高,划痕愈合率显著降低。miR-144-3p是circRHOT1的直接靶点。抑制miR-144-3p表达可减弱下调circRHOT1对TU686细胞增殖、凋亡和迁移的影响。结论 :下调circRHOT1通过靶向上调miR-144-3p表达可诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。