CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴对胶质母细胞瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)RTN4调节微小RNA(miR)-224-5p/髓磷脂转录因子1样(MYT1L)轴对胶质母细胞瘤(GM)细胞恶性生物学行为的影响。方法:以对数生长期的U251细胞进行设置分组:空白组、阴性对照(sh NC)组、沉默circRTN4 shRNA(sh circRTN4)组、sh circRTN4+抑制剂对照(inhibitor NC)组、sh circRTN4+miR-224-5p抑制剂(miR-224-5p inhibitor)组。Transwell实验、流式细胞术、CCK-8、qRT-PCR、Western blot以及双荧光素酶分别检测细胞迁移与侵袭、凋亡、增殖、CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达、增殖蛋白(ki-67)、凋亡蛋白(cleaved Caspase-3)、MYT1L蛋白表达以及miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L靶向关系验证;qRT-PCR检测GM细胞系U118、U87、U251和LN229细胞及正常人星形胶质细胞系NHA细胞中CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达水平。结果:U118、U87、U251和LN229细胞中CircRTN4、MYT1L mRNA表达较NHA细胞显著增加,miR-224-5p表达显著下降(P<0.05);miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L的有靶向关系。与空白组、sh NC组相比,sh circRTN4组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、CircRTN4、MYT1L mRNA及蛋白表达显著降低,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著增加(P<0.05);与sh circRTN4+inhibitor NC组相比,sh circRTN4+miR-224-5p inhibitor组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、MYT1L mRNA及蛋白表达显著增加,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著下降(P<0.05),CircRTN4表达无统计学差异(P>0.05),体内实验证明干扰CircRTN4可显著抑制移植瘤裸鼠肿瘤质量(P<0.05)。结论:沉默CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴抑制GM细胞恶性生物学行为。

环状RNA circRtn4对小鼠成肌细胞增殖和分化功能的影响

目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circRtn4相对表达量,采用核质分离实验确定细胞内定位。对数生长期C2C12细胞分为沉默组和对照组,分别转染特异性靶向circRtn4的siRNA和阴性对照siRNA,采用实时荧光定量PCR检测2组细胞circRtn4沉默效率和脱靶情况,采用CCK-8法检测培养前及培养第1、2、3、4天2组细胞增殖率,采用免疫荧光法和Western blot法检测2组分化第2天MYOG蛋白和分化第4天MHC蛋白表达情况。结果 C2C12细胞分化第3天circRtn4相对表达量(3.72±0.32)高于分化前(1.00±0.01)及分化第1天(0.76±0.03)、第2天(1.21±0.12)和第4天(2.51±0.33)(P<0.05),分化第4天高于分化前及分化第1、2天(P<0.05),分化第1天低于分化前(P<0.05);circRtn4在C2C12细胞质中占67.93%,细胞核中占32.07%;沉默组circRtn4相对表达量(0.03±0.02)低于对照组(0.97±0.03)(P<0.05),Rtn4 mRNA相对表达量(1.11±0.11)与对照组(0.99±0.03)比较差异无统计学意义(P>0.05);培养前及培养第1、2、3、4天,2组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05);沉默组分化第2天表达MYOG蛋白的细胞数减少,分化第4天表达MHC蛋白的细胞肌纤维化不明显,细胞极化和融合不明显;沉默组分化第2天MYOG蛋白(0.68±0.05)和分化第4天MHC蛋白(0.75±0.06)相对表达量明显低于对照组(1.00±0.09、1.00±0.13)(P<0.05)。结论 circRtn4在成肌细胞C2C12细胞中表达,在成肌细胞分化中后期表达量明显增加;circRtn4表达被沉默后,C2C12细胞增殖无明显变化,但其分化受到抑制。