CircTMOD3调节miR-126-5p/HIF-1α轴对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA TMOD3(CircTMOD3)对脂多糖(LPS)诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响及潜在机制。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CircTMOD3、miR-126-5p、低氧诱导因子(HIF)-1αmRNA表达;CCK-8和流式细胞术分析细胞活力和细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)用于测定炎症细胞因子的水平以评估炎症反应;生物信息学网站预测miR-126-5p与CircTMOD3或HIF-1α的结合位点,然后进行双荧光素酶报告基因测定确认三者间的靶向关系。体内小鼠实验检测CircTMOD3对LPS诱导的肺损伤的影响。结果CircTMOD3在LPS刺激的A549细胞中的积累显著减弱细胞活力、显著增加了细胞凋亡和炎症反应(均P<0.05)。CircTMOD3可以直接与A549细胞中的miR-126-5p结合,而HIF-1α是A549细胞中miR-126-5p的靶标。miR-126-5p的抑制或HIF-1α的过表达逆转了CircTMOD3沉默对体外LPS刺激的A549细胞损伤的影响(均P<0.05)。体内实验证实,CircTMOD3沉默可减弱LPS诱导的肺组织水肿和炎症反应(均P<0.05)。结论CircTMOD3沉默通过调节miR-126-5p/HIF-1α轴减轻了LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤。

CircTMOD3调节miR-139-5p/ROCK2轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

该文旨在探讨CircTMOD3调节miR-139-5p/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK2)轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。该研究采用体外培养人肺泡上皮细胞A549,将A549细胞分为control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-CircTMOD3组、LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组、LPS+si-CircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组;用qRT-PCR检测各组细胞CircTMOD3、miR-139-5p和ROCK2表达水平;CCK-8和EdU法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6和IL-1β水平;相关试剂盒检测MDA、SOD、CAT水平;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、ROCK2蛋白表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2的关系。结果显示,与control组相比,LPS组A549细胞中CircTMOD3水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、凋亡率、Bax表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与LPS组和LPS+si-NC组比较,LPS+si-CircTMOD3组A549细胞中CircTMOD3表达水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平、ROCK2蛋白水平显著降低,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组相比,LPS+siCircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组A549细胞中ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2存在靶向调控关系。该研究得出,干扰CircTMOD3表达可以上调miR-139-5p表达抑制ROCK2表达,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。