子宫内膜癌病人血清circWHSC1和circPUM1的表达及诊断价值

目的检测子宫内膜癌病人血清circWHSC1和circPUM1表达水平,并探究其在子宫内膜癌中的诊断价值。方法收集2018年6月至2020年6月自贡市第一人民医院120例子宫内膜癌病人、123例子宫内膜增生病人及125例体检健康者分别作为子宫内膜癌组、子宫内膜增生组与对照组。qRT-PCR法测定研究对象血清circWHSC1和circPUM1表达水平,分析血清circWHSC1和circPUM1表达水平与子宫内膜癌病人临床分期、分化程度的相关性,logistic回归分析血清circWHSC1和cir⁃cPUM1表达水平与子宫内膜癌发病的相关性;ROC曲线分析血清circWHSC1和circPUM1表达水平对子宫内膜癌的诊断价值。结果与对照组、子宫内膜增生组相比,子宫内膜癌组病人血清circWHSC1(1.93±0.24比1.02±0.21、1.04±0.19)、circPUM1(1.76±0.25比1.01±0.18、1.02±0.17)表达水平均升高(P<0.05);高分化(G1)组、中分化(G2)组、低分化(G3)组子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均依次升高(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均依次升高(P<0.05);circWHSC1、circPUM1表达水平与子宫内膜癌的发病密切相关(OR=2.75、3.71,P<0.05);血清circWHSC1、circPUM1以及联合检测对子宫内膜癌诊断的曲线下面积为0.88(灵敏度为88.2%,特异度为81.5%)、0.82(灵敏度为79.8%,特异度为83.1%)、0.95(灵敏度为89.1%,特异度为93.5%)。结论子宫内膜癌病人血清circWHSC1、circPUM1表达水平均较高,且与病人临床分期和子宫内膜癌的分化程度有关,有望作为筛查子宫内膜癌病人的血清标志物,为子宫内膜癌的早期诊断做贡献。

CircWHSC1调节miR-212-3p/CD47轴对子宫内膜癌细胞免疫逃逸和紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响。方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47靶向关系。结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P<0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P<0.05);与sh-CircWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p表达显著下降(P<0.05)。miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47存在靶向关系。结论:干扰CircWHSC1表达可抑制Ishikawa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47轴实现的。

环状RNA circWHSC1在结肠癌的表达及相关分子机制研究

目的探讨环状RNAcircWHSC1在结肠癌发生发展过程中的作用及其相关分子机制。方法选取2017-01-01-2021-01-31郑州人民医院病理确诊为结肠癌的60例患者癌及癌旁组织(距癌旁≥5cm),按照circWHSC1表达水平将患者分为高表达组(≥3.44,33例)与低表达组(<3.44,27例)。Kaplan-Meier plotter法分析circWHSC1表达与患者预后生存的关联性。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测circWHSC1、miR-142-3p和RAC1的表达;采用蛋白质印迹法、CCK-8和Transwell检测其蛋白的表达、细胞的增殖和转移能力;双荧光素酶报告基因和RT-PCR验证circWHSC1、miR-142-3p和RAC1三者之间的作用关系。结果circWHSC1在结肠癌患者癌组织(3.74±1.60)中的表达高于癌旁组织(1.07±0.58),t=7.572,P<0.001;与circWHSC1低表达组相比,circWHSC1高表达组结肠癌患者的生存时间缩短,χ^(2)=12.321,P<0.001。结肠癌细胞系HCT116的circWHSC1表达量最高,F=29.380,P<0.001。敲低circWHSC1可抑制HCT116细胞的增殖(t=12.775,P<0.001)、迁移(t=46.973,P<0.001)和侵袭能力(t=40.935,P<0.001)。双荧光素酶报告基因显示,circWHSC1与miR-142-3p具有靶向关系,而敲低circWHSC1可增加HCT116细胞中miR-142-3p表达水平,t=17.705,P<0.001。在敲低circWHSC1基础上应用miR-142-3p抑制剂则可以增强HCT116细胞的增殖(t=7.304,P=0.002)、迁移(t=16.049,P<0.001)和侵袭能力(t=14.994,P<0.001)。miR-142-3p在结肠癌患者癌组织中的表达低于癌旁组织,t=12.599,P<0.001。双荧光素酶报告基因实验证实,RAC1为miR-142-3p的靶基因,过表达miR-142-3p可抑制HCT116细胞中RAC1蛋白表达水平(t=25.162,P<0.001),并且发现,在敲低circWHSC1基础上过表达RAC1同样可以增强HCT116细胞的增殖(t=7.658,P=0.002)、迁移(t=62.626,P<0.001)和侵袭能力(t=58.596,P<0.001)。RAC1在结肠癌患者癌组织中的表达同样高于癌旁组织(t=14.873,P<0.001),敲低circWHSC1可在抑制HCT116细胞中RAC1表达的同时,抑制其下游PAK1蛋白RAC1、PAK1及p-PAK1的表达和激活,t值分别为7.506、15.588和6.795,P值分别为0.001、<0.001和0.002。结论circWHSC1可能通过调控miR-142-3p/RAC1/PAK1轴参与结肠癌的发生过程,为未来临床结肠癌早期诊断和治疗提供新的靶点。

circWHSC1通过miR-136/Bax通路促进多囊卵巢综合征进展的机制研究

目的探讨circWHSC1在多囊卵巢综合征患者中的表达以及circWHSC1对人卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。方法收集45例多囊卵巢综合征患者和45例健康对照者的外周血标本,通过PCR检测circWHSC1的表达水平以及circWHSC1在经胰岛素处理的人卵巢颗粒细胞系(KGN)中的表达水平。应用生物信息学网站、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫沉淀RNA pull-down实验明确circWHSC1与miR-136的表达关系。Western blot实验检测经转染miR-136后KGN细胞中Bax及caspase-3的表达。结果PCOS患者外周血以及经胰岛素处理的KGN细胞中circWHSC1的表达水平显著升高。高表达的circWHSC1可以促进KGN细胞增殖以及抑制凋亡。circWHSC1能够海绵吸附miR-136。高表达的miR-136可以增加Bax和caspase-3的表达,进而促进KGN细胞凋亡。结论高表达的circWHSC1可以海绵吸附miR-136进而降低Bax以及caspase-3水平,抑制KGN细胞凋亡、促进KGN细胞增殖,进而促进PCOS进展。