环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。