miR-183-5p通过靶向调控FAT1抑制胃癌进展

目的探讨microRNA-183-5p(miR-183-5p)在胃癌进展中的作用及其机制。方法收集2018年5月至2020年5月河北大学附属医院66例胃癌(GC)患者临床标本资料,采用生物信息学工具TargetScan和miRanda预测miR-183-5p可能的靶标,采用Western blot法和定量聚合酶链反应检测GC肿瘤组织和细胞系中miR-183-5p、非典型钙粘蛋白1(FAT1)水平。采用荧光素酶法验证miR-183-5p和FAT1之间的相互作用。结果GC患者肿瘤组织和GC细胞株中miR-183-5p水平显著降低。GC肿瘤组织miR-183-5p与肿瘤大小、肿瘤分型、TNM分期及患者预后(生存时间)呈负相关。体外实验发现,GC细胞株BGC-823过表达miR-183-5p后降低了其FAT1的表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。荧光素酶报告基因实验确认FAT1是miR-183-5p靶向基因。GC肿瘤组织miR-183-5p和FAT1水平呈现出明显负相关。将miR-183-5p转染入GC细胞BGC-823内能够抑制其在移植瘤模型中的生长。结论miR-183-5p潜在靶标是FAT1,miR-183-5p通过抑制FAT1负性调控GC的发展,miR-183-5p有望成为GC潜在的诊断和治疗靶点。

CircFAT1调节miR-296-3p/MAPRE1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响

目的研究环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1(CircFAT1)调节miR-296-3p/微管关联蛋白RP/EB家族成员1(MAPRE1)轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和放疗敏感性的影响。方法以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测鼻咽上皮细胞NP69、人鼻咽癌细胞株CNE2及其放射线抵抗细胞CNE2-RR中CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达。将体外培养的CNE2细胞随机分为对照组、CircFAT1敲低组、阴性对照组、CircFAT1敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达;以CCK-8法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)染色与流式细胞实验检测各组CNE2细胞增殖、凋亡。将体外培养的CNE2-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircFAT1敲低组、放射+CircFAT1敲低+miR-296-3p inhibitor组,分组转染后以实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组CNE2-RR细胞CircFAT1、miR-296-3p、MAPRE1表达;以CCK-8法、Edu染色与流式细胞实验检测各组CNE2-RR细胞增殖、凋亡。以双荧光素酶报告基因实验检测CNE2-RR中CircFAT1对miR-296-3p的靶向调节与miR-296-3p对MAPRE1的靶向调节。结果与NP69细胞相比,CNE2、CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05);与CNE2细胞相比,CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-296-3p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircFAT1敲低组CNE2细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);阴性对照组CNE2细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1对CNE2细胞各指标的影响。与对照组、放射组分别相比,放射+CircFAT1敲低组CNE2-RR细胞CircFAT1表达、MAPRE1 mRNA与蛋白表达、存活率、增殖率降低(P<0.05),miR-296-3p表达、凋亡率升高(P<0.05);放射组、放射+阴性对照组CNE2-RR细胞各指标无明显变化(P>0.05),miR-296-3p inhibitor可逆转敲低CircFAT1对放射处理下CNE2-RR细胞各指标的影响。CircFAT1可靶向下调CNE2-RR细胞miR-296-3p表达,而miR-296-3p可靶向下调CNE2-RR细胞MAPRE1表达。结论敲低CircFAT1可通过上调miR-296-3p而降低MAPRE1表达,从而抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡并增强其放射敏感性。

环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1在肿瘤中的表达及调控机制研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类呈封闭环状结构的非编码RNA。circRNA不仅调控人体的生长发育,而且在肿瘤的发生发展中也发挥重要作用。环状RNA脂肪非典型钙黏蛋白1(circular RNA fat atypical cadherin 1,circ-FAT1)作为一种circRNA,能够通过多种机制和信号通路调控肿瘤细胞的恶性生物学行为,有望成为一种新的肿瘤标志物。全文对circFAT1在肿瘤中的生物学作用、调控机制及其与患者临床病理特征间的关系等研究进行总结,挖掘其未来在肿瘤疾病防治中的潜在应用价值。

非典型钙黏素1与食管鳞癌临床病理特征及预后的关系

目的探讨非典型钙黏素1(FAT1)与食管鳞癌临床病理特征及预后的关系。方法采用回顾性队列研究方法。收集2011年1月至2015年12月山西省肿瘤医院收治的124例食管鳞癌病人的临床病理资料;男85例,女39例;中位年龄为60岁,年龄范围为40~72岁。收集手术切除食管鳞癌组织及癌旁组织标本,制备组织芯片,行免疫组织化学染色检测。收集5对新鲜食管鳞癌组织及其相应癌旁组织进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)。观察指标:(1)食管鳞癌组织和癌旁组织中FAT1蛋白表达情况。(2)食管鳞癌组织和癌旁组织中FAT1 RNA表达情况。(3)食管鳞癌组织中FAT1蛋白表达及与病人临床病理因素的关系。(4)随访和生存情况。采用门诊和电话方式进行随访,了解病人生存情况。随访时间截至2019年2月13日。生存时间定义为手术日至病人肿瘤相关死亡或随访截止时间。正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用t检验。偏态分布的计量资料以M(范围)表示。计数资料以绝对数或百分比表示,组间比较采用χ^(2)检验。等级资料比较采用非参数秩和检验。采用Kaplan-Meier法计算生存时间,采用Log-rank检验进行生存分析。结果(1)食管鳞癌组织和癌旁组织中FAT1蛋白表达情况:124例标本中,因组织脱落,最终获得食管鳞癌组织107例、癌旁组织93例;其中76例标本成功完成食管鳞癌及其癌旁组织配对。免疫组织化学染色检测结果显示:FAT1蛋白在食管鳞癌组织和癌旁组织中均有表达,阳性表达为棕黄色,FAT1定位在细胞膜,以FAT1的表达≥75为高表达,<75为低表达。76例食管鳞癌组织和癌旁组织中FAT1蛋白的相对表达量分别为68±42和77±37,两者比较,差异有统计学意义(t=2.380,P<0.05)。(2)食管鳞癌组织和癌旁组织中FAT1 RNA表达情况。qRT-PCR检测结果显示:5例食管鳞癌组织和癌旁组织标本中FAT1 RNA的相对表达量分别为1.6±0.4和2.5±0.3,两者比较,差异有统计学意义(t=3.560,P<0.05)。(3)食管鳞癌组织中FAT1蛋白表达及与病人临床病理因素的关系。107例食管鳞癌病人中,58例FAT1蛋白高表达。107例食管鳞癌病人中,65例不饮酒,42例饮酒,其FAT1蛋白高表达分别为42例和16例,两者比较,差异有统计学意义(χ^(2)=7.229,P<0.05)。(4)随访和生存情况:107例食管鳞癌病人中,96例获得随访,随访时间为38.0~94.9个月,中位随访时间为45.9个月。生存分析结果显示:FAT1高表达和低表达病人中位生存时间分别为24个月和22个月,两者生存情况比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.773,P>0.05)。亚组分析结果显示:女性、无吸烟史、无饮酒史FAT1高表达和低表达病人中位生存时间分别为24个月和21个月、23个月和22个月、23个月和21个月,生存情况比较,差异均有统计学意义(χ^(2)=8.769,12.827,10.724,P<0.05)。结论FAT1在食管鳞癌中低表达。女性、不吸烟、不饮酒高表达FAT1的食管鳞癌病人预后较好。