LncRNA HAGLR激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体对胫骨骨折愈合的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)HAGLR对胫骨骨折(TF)小鼠的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达和骨折愈合的影响并探讨机制。方法体外对成骨细胞MC3T3-E1沉默HAGLR,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,qPCR法检测骨碱性磷酸酶(BALP)和骨钙素的表达。Western blot法检测RUNX2、磷酸化RUNX2(p-RUNX2)以及NLRP3、半胱天冬酶1(Caspase1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。通过小鼠TF手术建立TF小鼠模型,在模型小鼠体内过表达HAGLR,并在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2或加入炎症小体抑制剂MCC950。qPCR法检测HAGLR和RUNX2的表达,Western blot法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达。microCT测量小鼠骨痂体积(MBV),称量小鼠的全长胫骨湿重。结果沉默HAGLR导致MC3T3-E1细胞活力降低且凋亡率增加(P<0.05),且RUNX2、p-RUNX2、BALP和骨钙素表达量均降低(P<0.05),NLRP3、Caspase1、ASC、IL-1β的表达量都增加(P<0.05)。与健康组织比较,TF小鼠体内HAGLR和RUNX2表达量降低(P<0.05)。过表达HAGLR促进TF小鼠体内的HAGLR和RUNX2表达,并增加MBV和全长胫骨湿重以及IGF-1的表达量(P<0.05)。在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2导致TF小鼠的MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达量都降低(P<0.05)。而在过表达HAGLR的基础上加入NLRP3炎症小体抑制剂MCC950导致MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达又增加(P<0.05)。结论LncRNA HAGLR通过激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体促进TF的愈合。

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10^(7) TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌情况;通过CCK-8技术检测A549细胞增殖情况;通过流式细胞术检测A549细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织和A549细胞中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平显著升高,miR-22-3p水平显著降低(P<0.05)。此外,与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织的组织病理损伤水平、炎症反应和细胞凋亡率升高(P<0.05)。与ALI组、sh-NC组相比,抑制MALAT1表达可改善LPS诱导的ALI大鼠肺组织和细胞中的炎症反应和细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p存在相互调控关系。与ALI组、sh-NC组相比,sh-MALAT1组肺组织中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05),miR-22-3p水平升高(P<0.05)。同时,BALF上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05)。此外,下调MALAT1的同时抑制miR-22-3p表达后,细胞中miR-22-3p和Bcl-2表达水平显著降低,细胞增殖水平亦显著降低(P<0.05)。结论降低MALAT1的表达可通过促进miR-22-3p的表达,从而抑制NLRP3的蛋白水平,并最终抑制LPS诱导的ALI模型中的炎症反应和细胞凋亡。

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

环状核糖核酸转化/转录域关联蛋白和微小核糖核酸-761在冠心病中的表达及临床意义

目的:探究环状核糖核酸转化/转录域关联蛋白(circular RNA transformation/transcription domain associated protein,circTRRAP)和微小RNA-761(microRNA-761,miR-761)在冠心病患者血清中的表达及与心肌损伤的相关性。方法:从2019年12月到2022年12月,在湖南中医药大学第一附属医院接受治疗的80例冠状动脉疾病患者被纳入研究组,同时,80名健康人为对照组。实时荧光定量PCR法用来检测血清中circTRRAP、miR-761表达水平;检测两组心肌损伤相关指标cTnI、cTnT、CK-MB和BNP的水平;采用Person相关性系数分析circTRRAP、miR-761表达与心肌损伤指标的相关性;以ROC曲线探究血清circTRRAP和miR-761水平对冠心病的诊断价值。结果:观察组的circTRRAP水平显著高于对照组,而miR-761水平则远低于对照组(P<0.05)。在心肌损伤指标cTnI、cTnT、CK-MB以及BNP方面,观察组的表达较对照组明显升高(P<0.05)。Pearson法结果显示,冠心病患者血清circTRRAP水平与miR-761呈负相关(r=-0.422,P<0.05)。此外,冠心病患者血清circTRRAP表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的正相关(P<0.05);miR-761表达水平与cTnI、cTnT、CK-MB和BNP呈显著性的负相关(P<0.05)。circTRRAP水平诊断冠心病的曲线下面积(AUC)为0.917,敏感度为78.3%,特异性为95.0%;miR-761水平诊断冠心病的AUC为0.907,敏感度为97.8%,特异性为72.5%;circTRRAP和miR-761联合诊断的AUC为0.991,敏感度为93.5%,特异性为97.5%。结论:冠心病患者血清中circTRRAP的表达水平较高,miR-761的表达水平较低,且血清circTRRAP和miR-761表达水平对冠心病患者早期诊断均有重要作用。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

非肌层浸润膀胱癌患者癌组织BLACAT2、WDR5表达观察及预后影响因素分析

目的观察非肌层浸润膀胱癌(NMIBC)患者癌组织长链非编码RNA膀胱癌相关转录本2(BLACAT2)、WD重复域蛋白5(WDR5)的表达变化,并分析患者预后的影响因素。方法选取NMIBC组织及正常膀胱黏膜组织各94例份,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测上述组织BLACAT2、WDR5 mRNA,免疫组化法检测上述组织WDR5蛋白,分析BLACAT2 mRNA、WDR5 mRNA之间及其与NMIBC临床病理特征的关系,比较不同BLACAT2、WDR5 mRNA表达的NMIBC患者总体无进展生存率,分析NMIBC患者的预后影响因素。结果NMIBC组织BLACAT2、WDR5 mRNA相对表达量分别为2.19±0.38、1.62±0.41,正常膀胱黏膜组织分别为0.47±0.09、0.61±0.12,两者比较,P均<0.05。NMIBC、正常膀胱黏膜组织WDR5蛋白阳性率分别为71.28%、10.64%,P<0.05。NMIBC组织BLACAT2 mRNA与WDR5 mRNA表达呈显著正相关(r=0.756,P=0.000)。BLACAT2、WDR5 mRNA表达与NMIBC肿瘤分期、病理分级有关(P均<0.05)。BLACAT2高表达者、低表达者3年总体无进展生存率分别为44.00%(22/50)、77.27%(34/44),WDR5 mRNA高表达者、低表达者3年总体无进展生存率分别为41.67%(20/48)、78.26%(36/46),两者比较,P均<0.05。肿瘤分期T1期、肿瘤分级高级别、BLACAT2高表达、WDR5 mRNA高表达是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立危险因素。结论NMIBC组织BLACAT2、WDR5表达升高,与肿瘤分期、病理分级及无进展生存预后有关,肿瘤分期T1期、肿瘤分级高级别、BLACAT2高表达、WDR5 mRNA高表达是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立危险因素。

CRISPR/Cas9技术在感染性疾病中的应用

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9〔clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9),CRISPR/Cas9〕是一种新兴的基因编辑技术,与以前的三大基因编辑技术——归巢核酸内切酶、锌指核酸酶和转录激活因子样效应物核酸酶技术相比,其在靶向特异性、操作简便性、治疗彻底性、应用广泛性等方面具有更大的优势和发展潜力。艾滋病、乙型肝炎、疟疾等感染性疾病的治疗一直是医学上的重大难题,科学家正努力尝试利用CRISPR/Cas9技术解决这些医学难题。本文主要综述了CRISPR/Cas9技术在这些感染性疾病中应用的研究进展。