CircRNA在乳腺癌中的研究进展

环状核糖核酸(CircRNA)在乳腺癌诊断和预后评估中具有重要意义。本文综述CircRNA在乳腺癌中的研究进展,包括其在乳腺癌组织中的表达,生物学功能及调控,临床诊疗中的应用。以期为未来的研究和临床治疗提供思路和方向。

circRNA CPT1A调控PTEN在糖尿病视网膜病变患者神经组织病变中的作用

目的 研究circRNA肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达情况,并探讨其对神经组织病变的作用。方法 选取我院2019年1月至2022年1月收治的2型糖尿病患者80例(102眼),其中无DR(NDR)患者22例(28眼)为NDR组,非增生型DR(NPDR)患者38例(48眼)为NPDR组,增生型DR(PDR)患者20例26眼为PDR组。采用OCTA检查患者视盘周围视网膜神经纤维层(pRNFL)厚度、黄斑神经节细胞复合体(GCC)厚度,采用Western blot检测患者外周血磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN),采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测患者外周血circRNA CPT1A。比较3组患者外周血circRNA CPT1A、PTEN以及pRNFL、GCC厚度,并采用Pearson相关分析患者circRNA CPT1A与PTEN、pRNFL厚度、GCC厚度的相关性。结果 PDR组患者外周血circRNA CPT1A均高于NDR组、NPDR组,而PDR组患者外周血PTEN均低于NDR组、NPDR组(均为P<0.05);NDR组与NPDR组患者外周血circ RNA CPT1A、PTEN差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A与PTEN呈负相关性(P<0.05)。随着疾病严重程度的增加,pRNFL以及GCC厚度均呈降低趋势,NDR组患者的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均高于NPDR组(均为P<0.05),NPDR组患者以上指标均高于PDR组(均为P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A分别与受检眼的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均呈负相关性(均为P<0.05)。结论 随着DR严重程度的增加,DR患者外周血circRNA CPT1A呈增加趋势,且与外周血PTEN、pRNFL厚度以及GCC厚度呈负相关性,其作用机制可能为circRNA CPT1A负性调控PTEN的表达,从而参与DR的发生、发展。

放疗抵抗宫颈鳞状细胞癌circRNAs表达谱的初步研究

目的:分析放疗敏感及放疗抵抗宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者肿瘤组织中差异表达环状RNA(circular RNAs,circRNAs)。方法:采用Illumina PE150高通量测序技术法检测3例放疗抵抗及3例放疗敏感CSCC患者肿瘤组织中差异表达circRNAs,对测序获得的序列进行信息挖掘及分析。利用逆转录定量聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法对测序获得的60个差异显著circRNAs进行验证。结果:放疗敏感与放疗抵抗CSCC组织间差异表达在2倍及以上共有1316个circRNAs。与放疗敏感CSCC相比,放疗抵抗CSCC组织中显著上调的circRNAs共594个,显著下调的circRNAs共722个。对差异circRNAs来源基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)分析发现:就细胞生物学过程而言,差异circRNAs主要富集于细胞代谢过程、细胞器组织、初级代谢过程、杂环代谢过程等;就分子功能而言,差异circRNAs主要富集于蛋白质结合、激酶结合、染色质结合、杂环化合物结合等。京都基因和基因组大百科全书数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析发现,差异circRNAs富集于甲状腺激素信号通路、Hippo信号通路、FoxO信号通路等通路。qRT-PCR分析证实,与放疗敏感CSCC相比,hsa_circ_0003373、hsa_circ_0004337、hsa_circ_0005114、hsa_circ_0031431、novel_circ_0006491、novel_circ_0070688、novel_circ_0070695在放疗抵抗CSCC组织中显著下调(均P<0.05)。结论:与放疗敏感CSCC相比,hsa_circ_0003373、hsa_circ_0004337、hsa_circ_0005114、hsa_circ_0031431、novel_circ_0006491、novel_circ_0070688、novel_circ_0070695在放疗抵抗CSCC组织中显著下调,为进一步研究circRNAs在CSCC放疗抵抗中的作用提供实验数据。

circRNA_0051079通过靶向miR⁃26a⁃5p/PTEN轴诱导视网膜神经变性的分子机制

目的探讨circ_0051079对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的视网膜神经变性的影响及机制。方法从C57BL/6J乳鼠眼球中分离视网膜神经节细胞(RGC),随机分为对照组、siRNA组(转染阴性siRNA)、si_circ_0051079组(转染si⁃circ⁃0051079干扰RNA)、模拟物对照组(转染Scr mimic)、miR⁃26a⁃5p组(转染miR⁃26a⁃5p mimic)、miR⁃26a⁃5p+vector组(转染pcDNA 3.1)、miR⁃26a⁃5p+PTEN组(转染pcDNA 3.1⁃PTEN),分别在正常、缺氧(体积分数1%O_(2)暴露)或氧化应激(50μmol·L^(-1) H_(2) O_(2)暴露)条件下培养24 h,进行RT⁃qPCR、CCK⁃8、TUNEL、RNA免疫沉淀(RIP)等检测。于15只C57BL/6小鼠左眼中建立I/R损伤模型,对侧眼保持正常眼压作为对照,I/R损伤后0 d、3 d和7 d各取5只小鼠收集视网膜检测circ_0051079表达。另取20只C57BL/6小鼠分为正常对照组(用针头插入左眼前房但不升高眼压)、I/R组(左眼I/R损伤处理)、I/R+对照shRNA组(左眼注射无序shRNA并建立I/R损伤模型)、I/R+circ_0051079 shRNA组(左眼注射circ_0051079 shR⁃NA并建立I/R损伤模型)。I/R损伤后7 d,取视网膜进行蛋白免疫荧光染色。收集2020年11月至2021年3月急性闭角型青光眼和白内障患者的房水样本各20例,进行RT⁃qPCR测定。结果缺氧或氧化应激条件下培养的RGC中circ_0051079表达量较正常条件下培养的RGC增加(均为P<0.05)。在缺氧或氧化应激条件下培养,si_circ_0051079组RGC细胞活力均较siRNA组增加,RGC凋亡细胞数均减少(均为P<0.05)。荧光素酶报告基因分析和RIP检测结果表明,circ_0051079可以通过调节miR⁃26a⁃3p/PTEN信号转导进而影响RGC功能。动物实验中,I/R损伤可致视网膜组织中circ_0051079表达量升高(P<0.05)。与正常对照组(1.00±0.07)相比,I/R+circ_0051079 shRNA组小鼠视网膜中circ_0051079表达水平(0.37±0.04)下降(P<0.05),同时I/R诱导的视网膜神经变性减轻。临床研究中,与白内障患者房水样本相比,青光眼患者房水样本中circ_0051079和PTEN mRNA表达增加,miR⁃26a⁃3p表达降低(均为P<0.001)。结论circ_0051079可能是缺血性视网膜病变诊断和治疗的潜在靶点。

非小细胞肺癌组织中circBIRC6、APPBP2表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中环状核糖核酸杆状病毒IAP重复序列6(circBIRC6)、β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2(APPBP2)表达及临床预后意义。方法 收集2018年6月~2020年1月90例在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测circBIRC6、APPBP2表达,并分析二者与NSCLC患者临床病理特征的关系。通过Pearson相关性分析NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达的相关性,Kaplan-Meier法绘制不同表皮生长因子受体(EGFR)基因突变、TNM分期和circBIRC6、APPBP2 mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果 与癌旁组织比较,NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达升高(P<0.05)。NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达呈正相关(r=0.817,P<0.001)。NSCLC患者不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达比较有差异(P<0.05)。随访3年,90例NSCLC患者总生存率为55.56%(50/90)。EGFR基因突变阳性/阴性NSCLC患者总生存率比较无差异(P>0.05);TNM分期Ⅰ~Ⅱ期NSCLC患者总生存率高于Ⅲ期NSCLC患者(P<0.05);circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达组生存率低于circBIRC6、APPBP2 mRNA低表达组(P<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和circBIRC6≥10.97、APPBP2 mRNA≥2.48为NSCLC患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=3.586(1.080~11.909)、3.632(1.193~11.057)、3.197(1.060~9.640)、3.223(1.086~9.570)、2.767(1.022~7.492)]。结论 NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义研究

目的探讨hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法选择2021年9月至2022年3月广州医科大学附属第五医院甲乳外科收治的乳腺癌患者43例(乳腺癌组),乳腺良性肿瘤患者54例(良性肿瘤组),健康体检者45名(健康对照组)。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测其血清hsa_circ_0001785的相对表达量,并进行三组间比较。分析hsa_circ_0001785表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的关联性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析hsa_circ_0001785诊断乳腺癌的效能。结果乳腺癌组血清hsa_circ_0001785表达水平显著高于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05),良性肿瘤组和健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清hsa_circ_0001785具有诊断乳腺癌的应用价值(AUC=0.780,P<0.05),且诊断效能优于癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)。乳腺癌患者血清hsa_circ_0001785的表达水平与其年龄、肿瘤类型、TNM分期、淋巴结受累、远处转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER2)均无显著关联(P>0.05)。结论hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中高表达,有作为乳腺癌诊断分子标志物的潜力。

CircSEPT9调节miR-650/HSPB1轴对胶质瘤细胞恶性生物学行为影响的探讨

目的探讨环状RNA(CircRNA)SEPT9调节miR-650/热休克蛋白B1(HSPB1)轴对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blot法检测胶质瘤组织、癌旁组织、人类正常神经胶质细胞HEB及胶质瘤细胞系LN18、SW1088、U251中CircSEPT9、miR-650、HSPB1蛋白表达水平。将U251细胞分为对照组(NC组)、si-NC组、si-CircSEPT9组、mimic NC组、miR-650 mimic组、si-CircSEPT9+inhibitor NC组、si-CircSEPT9+miR-650 inhibitor组、si-CircSEPT9+pcDNA组、si-CircSEPT9+pcDNA-HSPB1组。采用qRT-PCR法检测CircSEPT9、miR-650表达水平。采用Western blot法检测HSPB1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Caspase-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达水平。通过双荧光素酶基因实验验证CircSEPT9与miR-650、miR-650与HSPB1的关系。结果在胶质瘤组织和细胞中,CircSEPT9和HSPB1蛋白呈高表达,miR-650呈低表达,且在U251细胞中CircSEPT9以及HSPB1蛋白表达水平最高,miR-650表达水平最低,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默CircSEPT9或过表达miR-650均可抑制U251细胞增殖、侵袭、迁移及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,促进细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达。下调miR-650或过表达HSPB1均可减弱沉默CircSEPT9对U251细胞的作用影响。CircSEPT9与miR-650、miR-650与HSPB1存在靶向关系。结论沉默CircSEPT9可能通过海绵化上调miR-650来抑制HSPB1表达,进而抑制U251细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡。

环状RNA调控心肌纤维化的作用与机制

心肌纤维化是在各种心血管疾病作用下所致的心肌成纤维细胞过度增殖与分化及心肌胞外基质病理性重构,可诱发心律失常、心力衰竭,严重时甚至可发生心搏骤停和心源性猝死。目前心肌纤维化的发病机制尚不清楚,临床上缺乏特异的生物标志物及高效的治疗方法。越来越多的研究表明环状RNA可调节心肌细胞纤维化重塑,本文对环状RNA调控心肌纤维化的作用与机制进行综述,旨在为心肌纤维化的早期识别、预防和治疗提供新方向。

CircPRKCI通过miR-101-3p/TGFBR3轴调节食管鳞状细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探索环状RNA PRKCI(circular ribonucleic acid PRKCI,CircPRKCI)通过miR-101-3p/转化生长因子βⅢ型受体(transforming growth factor beta typeⅢreceptor,TGFBR3)轴对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞恶性行为学的影响。方法将si-NC、si-CircPRKCI、miRNC、miR-101-3p mimics、vector+miR-101-3p mimics、CircPRKCI+miR-101-3p mimics转染至KYSE150细胞中,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测细胞CircPRKCI、miR-101-3p、TGFBR3 mRNA表达。并采用RT-qPCR、细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法、Transwell法、流式细胞术、蛋白质印迹法检测各组细胞恶性行为情况。结果CircPRKCI和TGFBR3 mRNA在KYSE150细胞中上调,miR-101-3p表达下调(P<0.05);沉默CircPRKCI能够靶向上调miR-101-3p,抑制TGFBR3表达以及细胞活力、侵袭与迁移能力,增强细胞凋亡(P<0.05);上调miR-101-3p能够显著抑制KYSE150细胞恶性行为,而过表达CircPRKCI会减弱上调miR-101-3p对KYSE150细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论CircPRKCI可通过靶向负调节miR-101-3p/TGFBR3轴,影响ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭与凋亡等恶性生物学行为。

环状RNA与缺血性脑卒中关系的研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类不同于线性RNA的内源非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNA),具有性质稳定、进化保守和可重复性等特点。目前,缺乏快速诊断和预测预后的生物标志物以及有效的治疗方法是急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)面临的主要挑战。现回顾circRNA与AIS之间存在的关系及可能的调控方式及分子机制,旨为AIS早期诊断和判断预后提供新的生物标志物。

环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制研究

目的探讨环状RNA circ-FOXM1降低克唑替尼对肺癌细胞抑制效果的作用机制。方法构建克唑替尼耐药肺癌细胞株H2228/CR。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测circ-FOXM1在BEAS-2B、H2228、H2228/CR细胞中的表达。将H2228细胞分为circ-FOXM1过表达组和过表达对照组。将H2228/CR细胞分为circ-FOXM1沉默组和沉默对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的半抑制浓度(IC_(50))。经克唑替尼干预处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,采用Transwell实验检测各组细胞迁移数,采用Western blot实验检测各组细胞磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)的表达水平。结果H2228/CR细胞circ-FOXM1表达水平高于H2228细胞,H2228细胞circ-FOXM1表达水平高于BEAS-2B细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。克唑替尼对过表达组细胞的IC_(50)显著高于过表达对照组细胞(P<0.05)。克唑替尼对沉默组细胞的IC_(50)显著低于沉默对照组细胞(P<0.05)。经克唑替尼干预处理后,过表达组的细胞凋亡率低于过表达对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均高于过表达对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组的细胞凋亡率高于沉默对照组,细胞迁移数、p-PI3K/PI3K比值、p-AKT/AKT比值均低于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论circ-FOXM1可能通过激活PI3K/AKT信号通路降低克唑替尼对肺癌细胞的抑制效果。

镧离子对酵母tRNA圆二色谱的影响

采用圆二色谱（ＣＤ）方法对镧离子（Ｌａ３＋）与转移核糖核酸（ｔＲＮＡ）的相互作用进行了研究．结果显示Ｌａ３＋可使酵母ｔＲＮＡ的ＣＤ谱峰向短波方向偏移３ｎｍ，波峰位于２５４ｎｍ，峰值减少１０％，说明结合在ｔＲＮＡ分子上的Ｌａ３＋引起ｔＲＮＡ分子构象的变化．Ｌａ３＋对氨酰化ｔＲＮＡ合成酶（ａａＲＳ）或ｔＲＮＡ－ａａＲＳ复合物的ＣＤ光谱基本上无影响，说明Ｌａ３＋对氨酰化反应活性的影响。

钕和镧离子对tRNA圆二色谱的影响

采用圆二色谱方法对钕和镧离子与转移核糖核酸间的相互作用进行了研究，结果显示在１．５～６μｍｏｌ／ＬＮｄ３＋或Ｌａ３＋离子存在下，ｔＲＮＡ分子ＣＤ谱２６０ｎｍ（＋）峰蓝移２～３ｎｍ，２６０ｎｍ（＋）峰值分别增加６％和２０％左右；２１０ｎｍ（－）峰在不同摩尔比Ｎｄ３＋／ｔＲＮＡ作用下，谱峰蓝移或红移，峰值增加或降低５０％左右。结果说明结合在ｔＲＮＡ分子上的Ｎｄ３＋或Ｌａ３＋可能引起ｔＲＮＡ分子构象的变化。Ｅｕ３＋对大肠杆菌ＬｅｕＲＳ或ｔＲＮＡＬｅｕ－ＬｅｕＲＳ复合物的ＣＤ谱具有一定的影响。

胶质瘤中hsa_circ_0021350的表达情况及临床意义研究

目的探讨hsa_circ_0021350在胶质瘤中的表达及临床意义,初步评价其应用于胶质瘤诊断和治疗的潜力。方法选择2016年1月至2022年5月在广西医科大学第一附属医院神经外科经手术获取的胶质瘤组织标本40例(高级别胶质瘤22例,低级别胶质瘤18例),正常脑组织标本10例。通过RNase R消化联合逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证hsa_circ_0021350的环状特性。通过TA克隆测序法鉴定实时荧光定量PCR(qRT-PCR)扩增产物。比较高级别胶质瘤、低级别胶质瘤和正常脑组织hsa_circ_0021350的表达水平。分析hsa_circ_0021350表达与胶质瘤患者临床病理指标的关联性。结果该研究所设计的发散引物可有效特异扩增hsa_circ_0021350。经验证,hsa_circ_0021350呈环状,且能耐受RNase R消化。qRT-PCR实验结果显示,高级别胶质瘤和低级别胶质瘤hsa_circ_0021350的表达水平均高于正常脑组织,且高级别胶质瘤hsa_circ_0021350的表达水平较低级别胶质瘤更高,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_0021350的表达与胶质瘤分级和ki67阳性率具有显著关联性(P<0.05)。结论hsa_circ_0021350在胶质瘤,尤其是高级别胶质瘤中呈高表达,且与肿瘤增殖因子ki67相关,是胶质瘤诊断和治疗的潜在分子靶点。

糖尿病鼠骨骼肌萎缩相关环状RNA的研究

骨骼肌萎缩是糖尿病患者中、晚期严重并发症之一,为研究其分子发病机制,利用链脲佐菌素诱导构建小鼠1型糖尿病模型,通过高通量测序技术,调查与糖尿病肌萎缩病变相关的环状核糖核酸(circular ribonucleic acid,circRNA)表达谱,并利用生物信息分析软件探究circRNA在糖尿病骨骼肌萎缩病变中的可能作用.结果显示,与正常同基因背景小鼠的同类组织相比,糖尿病鼠的腓肠肌呈现:(1)肌纤维面积明显减小,运动功能下降;(2)含有1403个与1型糖尿病发生发展相关的差异表达circRNA,其中,690个上调和713个下调;(3)通过基因本体、京都基因和基因组百科全书的功能富集分析显示,差异表达的候选circRNA亲本基因主要富集于转录调节生物学过程、细胞质成分和蛋白质结合分子功能等方面,以及促分裂原活化蛋白激酶信号通路、泛素介导的蛋白降解、叉头盒蛋白O通路与糖尿病肌萎缩相关的信号通路等.通过数据库信息和生物信息分析技术,预测与肌萎缩基因MuRF1相结合的小RNA(mirco RNA,miRNA),并挖掘出可调控它们表达的功能circRNA,构建了circRNA-miRNA-mRNA的潜在分子调控反应轴和互作网络.研究结果表明,与肌萎缩相关的circRNA在糖尿病发病中具有调控关键分子的潜能.

环状RNA在肝癌进展中的作用及其潜在价值

环状核糖核酸(circular ribonucleic acid,circRNA)是肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)与RNA领域研究的新热点之一。与传统含5′和3′末端的线性RNA不同,circRNA分子呈封闭环状结构,为一类特殊的非编码RNA分子,富含microRNA(miRNA)结合位点,在肝细胞中起miRNA海绵(miRNA sponge)作用,以竞争性内源RNA机制调控miRNA抑制/促进靶基因表达,在HCC进展中起重要作用。本文述评了circRNA在HCC进展中表达、调控机制及其潜在价值。

非小细胞肺癌癌组织和癌旁组织的环状核糖核酸表达水平与诊断价值分析

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织和癌旁组织的环状核糖核酸(circRNA)表达水平与诊断价值。方法选取2020年6月至2021年5月江西省胸科医院收治的12例NSCLC患者的病理组织标本,筛选出癌组织和癌旁组织中表达差距明显的circRNA,制作火山图,同时予以聚类分析。收集同期47例NSCLC患者与47例健康体检者血清,均予以circRNA检测,制作受试者工作特征(ROC)曲线,探究NSCLC的circRNA诊断价值。标注曲线下面积(AUC),探究血清circRNA表达水平与临床指标相关性。结果筛选出癌组织和癌旁组织中表达差距明显的circRNA共194个,当中121个显示上调,73个显示下调,通过火山图及聚类分析结果显示,circRNA能够清晰分辨NSCLC癌组织和癌旁组织。不同性别、年龄、吸烟情况、肿瘤分化、病理类型、癌症分期NSCLC患者的circRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线研究结果显示,血清circRNA诊断NSCLC的灵敏度为82.98%,特异度为61.70%,AUC为0.795。结论circRNA在NSCLC癌组织和癌旁组织的表达具有明显不同,利用血清circRNA诊断NSCLC准确率较高,circRNA水平可能在一定程度上体现病情。

环状核糖核酸0136474调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的分子机制研究

目的:探讨环状RNA-0136474(circ_0136474)调控微小RNA-127-5p(miR-127-5p)/Zest同源物2(EZH2)轴对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:收集骨关节炎患者软骨组织并检测其中circ_0136474表达;IL-1β诱导人软骨细胞CHON-001,并分为对照组、IL-1β组、si-NC组、si-circ_0136474组、si-circ_0136474+anti-miR-NC组、si-circ_0136474+anti-miR-127-5p组、miR-NC组和miR-127-5p mimics组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,RT-qPCR检测circ_0136474、miR-127-5p及EZH2、增殖细胞核抗原(PCNA) mRNA表达,ELISA试剂盒检测IL-6、TNF-α、MMP-13含量,Western Blot检测增殖细胞核抗原、Bcl-2、Bax、EZH2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-127-5p与circ_0136474、EZH2的靶向关系。结果:circ_0136474在骨关节炎患者软骨组织中高表达。经IL-1β诱导后,细胞活力、S期、PCNA表达、Bcl-2表达和miR-127-5p显著降低,G0~G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax、IL-6、TNF-α、MMP-13、circ_0136474、EZH2蛋白和EZH2 mRNA显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,circ_0136474、EZH2与miR-127-5p存在靶向关系,沉默circ_0136474可促进细胞增殖、延长S期,缩短G0~G1期,并抑制细胞凋亡,减少IL-6、TNF-α、MMP-13含量(P<0.05);抑制miR-127-5p表达可逆转沉默circ_0136474对细胞凋亡、IL-6、TNF-α、MMP-13的抑制作用(P<0.05)。结论:circ_0136474在骨关节炎软骨组织中高表达,沉默circ_0136474可通过调节miR-127-5p/EZH2轴促进软骨细胞增殖而抑制细胞凋亡。

circRNA在炎症性肠病中的作用研究进展

炎症性肠病(IBD)是一种慢性、复发性胃肠道炎症性疾病,主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。IBD发病机制复杂,牵涉面甚广,目前仍未能完全阐述清楚,而近年来关于非编码核糖核酸(ncRNA)的研究更新了人们对IBD发生发展机制的理解。关于IBD与ncRNA关系的研究越来越多,主要集中于微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA),而有关环状RNA(circRNA)在IBD中的研究则相对较少。本文综述circRNA在IBD发病机制和治疗等方面的研究进展。