ATF6调控生殖相关基因HSPA1L表达的分子机制

目的探究内质网应激活化转录因子6(ATF6)对生殖相关基因热休克蛋白A1样蛋白(HSPA1L)表达的影响并初步阐明其调控分子机制。方法在人胚肾细胞系HEK-293T中转染ATF6过表达质粒,RT-qPCR和Western blot验证过表达效率;利用雄性ATF6敲除小鼠睾丸组织转录物组测序信息,筛选ATF6下游5个生殖相关基因;双荧光素酶报告基因实验选择启动子活性较高的下游基因并检测过表达ATF6对其启动子活性的影响;通过gene-regulation预测ATF6和下游基因启动子可能的结合位点;RT-qPCR和Western blot检测在HEK-293T细胞中过表达ATF6对于下游基因表达的影响;利用凝胶迁移实验(EMSA)确定ATF6与下游基因启动子是否结合。结果转染后HEK-293T细胞中ATF6的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平明显升高。转录物组测序及双荧光素酶报告基因实验筛选出ATF6下游的生殖相关基因HSPA1L。ATF6能够促进HSPA1L的截短启动子活性(P<0.001)。过表达ATF6后,HSPA1L的表达量明显升高(P<0.001)。差异均有统计学意义。ATF6蛋白能与HSPA1L的启动子DNA序列aagtcgtcac相结合。结论内质网应激的关键分子ATF6通过结合生殖相关基因HSPA1L的启动子调控后者表达水平,这将为预防或治疗与内质网应激(ERS)有关的男性不育的深入研究奠定基础。

CYP2D6基因分型影响因素研究进展

细胞色素P450家族2亚科D成员6(CYP2D6)是细胞色素P450酶家族中的重要药物代谢酶,是抗抑郁药物、抗精神病药物和阿片类镇痛药物等主要的代谢酶。CYP2D6基因位点的复杂性和诸多等位基因突变体造成了CYP2D6表型的多态性,目前已报道170余种等位基因突变体。CYP2D6酶活性变化很大,从无活性到超快代谢均存在,根据酶活性可将不同表型携带者分为超快代谢者、正常代谢者、中间代谢者和弱代谢者。随着个体化医疗的发展,CYP2D6基因分型试验可以辅助药物遗传学和基因分型技术的研究和临床应用。然而,由于CYP2D6基因存在复杂的突变,包括单核苷酸突变、插入、缺失、基因拷贝数变异和基因重组。CYP2D6基因不仅存在个体化差异,且在不同种族之间等位基因的频率也明显不同。另外,人体内同时存在与CYP2D6同源性很高的非功能性基因CYP2D7,通过基因检测分析CYP2D6表型是一项非常具有挑战性的工作。文章总结了CYP2D6基因的多态性和基因分型的复杂性,并分析了部分不同的基因型突变对CYP2D6基因分型的影响,以帮助临床通过基因分型方法对CYP2D6酶活性进行预测。

miR-124靶向调控CMTM6增强CIK对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的研究细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸(miRNA,miR)-124在此过程中的调节作用及可能机制。方法收集2017年3月~2019年10月鄂州市中心医院神经外科收治的30例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6(chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontaining family member 6,CMTM6)mRNA表达量及相关性。诱导培养CIK细胞后,分别与胶质瘤细胞C6和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor及阴性对照序列,通过CCK-8实验检测CIK细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124与CMTM6基因的靶向关系,qRT-PCR和Western blot检测胶质瘤细胞中mi R-124,CMTM6 mRNA及蛋白表达。结果与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086)显著降低,CMTM6 mRNA表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089)显著升高,差异有统计学意义(t=39.051,26.337,均P<0.001),二者呈负相关(r^(2)=0.262)。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic转染及其与CIK细胞共培养对C6(72.84%±3.81%vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18%vs 74.59%±3.47%),U87细胞(71.93%±3.94%vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24%vs 76.28%±3.64%)增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义(q=16.340,15.486,14.087,13.886,均P<0.001)。双荧光素酶报告实验显示,miR-124和CMTM6具有明显的靶向关系。Western blot结果显示,与转染阴性对照+CIK组比较miR-124 mimic与CIK细胞共培养的C6,U87细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068)显著降低,转染miR-124 inhibitor与CIK细胞共培养的C6,U87细胞CMTM6蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068)显著增加,差异均有统计学意义(q=13.817,10.839,7.327,17.558,均P<0.001)。结论CIK细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124可通过靶向抑制CMTM6增强CIK细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。

秦川牛宰后成熟期间热休克蛋白A6对肉品质变化的影响机制

为探究秦川牛宰后热休克蛋白A6(heat shock protein A6,HSPA6)差异表达对肉品质的影响,以4℃条件下贮藏的秦川牛背最长肌为研究对象,测定贮藏0、2、4、6、8 d时肉品质变化情况;基于4D-非标记定量(4D-label free quantification,4D-LFQ)蛋白质组学分析宰后秦川牛背最长肌中HSP70家族成员HSPA6及相关差异蛋白表达情况。结果表明:随贮藏时间延长,HSPA6表达量呈下降趋势,三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide,NADH)含量均呈下降趋势,肌纤维小片化指数(myofibril fragmentation index,MFI)呈上升趋势,剪切力、离心损失率均呈先上升后下降趋势;由相关性分析结果可知,HSPA6表达量与ATP含量、NADH含量、剪切力呈显著正相关(P<0.05),与MFI、离心损失率呈极显著负相关(P<0.01),表明在贮藏过程中HSPA6降解与牛肉能量代谢及保水性有密切联系。蛋白质组学分析发现贮藏过程中表达量变化显著的差异蛋白中有24种与HSPA6表达相关,通过碳水化合物衍生物结合、嘌呤核苷三磷酸结合等途径引起蛋白酶体介导泛素依赖性蛋白质分解代谢、细胞蛋白分解等,造成代谢紊乱或者代谢失衡,同时还能够控制蛋白质降解、细胞凋亡等变化,进而影响肌肉结构变化,降低组织能量水平,并通过抗细胞结构蛋白降解最终影响秦川牛肉的嫩度、MFI及保水性。

CircSLC6A6调节miR-125a-5p/PUM2轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状溶质载体家族6成员6(CircSLC6A6)调节微小RNA分子miR-125a-5p/pumilio同源物2(PUM2)轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测体外培养的人子宫内膜上皮细胞与人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、KLE、Ishikawa中CircSLC6A6、miR-125a-5p与PUM2的表达。将体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-A随机分为5组:对照组、CircSLC6A6敲低组(转染CircSLC6A6 siRNA质粒)、miR-125a-5p抑制组(转染miR-125a-5p抑制剂)、阴性对照组(转染空载质粒和miR-125a-5p抑制阴性对照)、共转染(转染CircSLC6A6 siRNA质粒+miR-125a-5p抑制剂)组。以CCK-8法及细胞克隆实验、Hoechst 33258染色及流式细胞实验、以划痕实验及Transwell实验检测各组HEC-1-A细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;以qRT-PCR实验检测各组HEC-1-A细胞miRv125a-5p及PUM2 mRNA表达;以免疫印迹实验检测各组HEC-1-A细胞凋亡蛋白(caspase-9、Bax)、上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测HEC-1-A细胞中CircSLC6A6对miR-125a-5p和miR-125a-5p对PUM2的靶向调控作用。结果:(1)与人子宫内膜上皮细胞相比,人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、Ishikawa、KLE中CircSLC6A6 mRNA、PUM2 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-125a-5p mRNA表达显著降低(P<0.05)。(2)与对照组相比,CircSLC6A6敲低组细胞呈现典型凋亡形态改变,细胞活力、相对细胞集落数、细胞迁移距离、侵袭细胞数、细胞PUM2 mRNA及Vimentin蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、细胞miR-125a-5p及caspase-9、Bax、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);miR-125a-5p抑制组细胞各指标变化趋势与CircSLC6A6敲低组相反;阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与CircSLC6A6敲低组相比,共转染组细胞的细胞核凋亡形态改变得到改善,各指标变化趋势与其相反,且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)在HEC-1-A细胞中CircSLC6A6可靶向下调miR-125a-5p的表达,而miR-125a-5p可靶向下调PUM2的表达。结论:CircSLC6A6通过靶向下调miR-125a-5p而上调PUM2,可能促使子宫内膜癌进展,敲低CircSLC6A6通过促进miR-125a-5p分泌而降低PUM2表达,可能抑制子宫内膜癌细胞增殖、集落形成和上皮间质转化,并促进其凋亡。

趋化素样因子超家族6和程序性死亡受体-配体1在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的探讨趋化素样因子超家族6(CMTM6)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)与脑胶质瘤病人预后状况的关系。方法选择2016年1月至2017年1月解放军总医院三中心收治的脑胶质瘤病人95例(观察组)和颅脑外伤病人89例(对照组)。采用免疫组化法检测脑胶质瘤组织和正常脑组织的CMTM6、PD-L1蛋白表达。比较两组CMTM6、PD-L1蛋白表达的差异。采用电话、门诊结合微信随访获取术后5年生存相关数据。分析CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人预后状况的关系。结果观察组CMTM6、PD-L1阳性表达率为85.11%、54.74%,明显高于对照组的26.97%、13.48%(P<0.05)。高病理级别胶质瘤组织的阳性表达率为95.24%、73.81%,明显高于低病理级别的71.70%、39.62%(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,CMTM6阳性表达组的4、5年累积总生存率较CMTM6阴性表达组的降低(P<0.05)。PD-L1阳性表达组的2、3、4、5年累积总生存率及无病生存率较PD-L1阴性表达组明显降低(P<0.05)。结论CMTM6、PD-L1与脑胶质瘤病人病理学分级具有紧密的关系,且两者阳性表达往往提示预后状况不良。

驱动蛋白分子6基因rs20455位点基因多态性与江苏地区汉族人冠心病的相关性研究

目的观察江苏地区汉族人群驱动蛋白分子6（KIF6）rs20455位点基因多态性与冠心病（CHD）的关系。方法用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性技术（PER—RFLP）分别检测556例冠心痛患者和322例体检健康者K1F6rs20455基因型，计算等位基因分布频率；用全自动生化分析仪检测研究对象血脂、血糖水平。结果冠心病组和健康人对照组KIF6基因rs20455位点TF、TC、cc基因型频率分别为0．291、0．507、0．201和0．323、0．450、0．227（Х^2=2．647，P=0．266）；T、C等位基因频率分剐为0．545、0．455和0．548、0．452（Х^2=0．017，P=0．898）。Logistic回归分析显示，C等位基因不是发生CHD的危险因素（OR=0．862，P=0．326，95％CI为0．641～1．160），年龄、高血压、LDL．C和HbA1c是冠心病发生的主要危险因素（OR分别为1．079、6．239、4．734、11．128，P均〈0．05）。结论KIF6rs20455位点基因多态性与江苏地区汉族人群CHD的发生无关。

顺铂诱导的急性肾损伤中肾脏组织m^(6)A甲基化水平的变化

目的·探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在顺铂诱导的小鼠急性肾损伤进程中的作用。方法·选择4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射顺铂(20 mg/kg)诱导急性肾损伤(损伤组);另取4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射等量生理盐水(对照组)。检测2组小鼠血清肌酐及血尿素氮水平变化,观察小鼠肾脏组织切片中病理损伤情况,评估模型是否成功。进一步运用甲基化RNA免疫共沉淀技术(methylatedRNAimmunoprecipitation,MeRIP)与RNA测序技术分别检测2组小鼠肾脏组织中m^(6)A甲基化水平与RNA表达变化。运用基因本体论及京都基因和基因组数据库进行结果可视化和综合研究,并将RNA测序技术所得转录组数据与MeRIP技术检测所得表观遗传数据联合分析,寻找参与顺铂诱导急性肾损伤病理变化过程的候选基因。结果·顺铂可诱导小鼠血清肌酐与血尿素氮水平显著升高。光学显微镜观察肾组织发现广泛的肾小管空泡变性,上皮细胞剥脱,肾小管坏死,提示造模成功。MeRIP检测发现损伤组与对照组小鼠肾脏中共有2227个基因含有2981个差异化表达的m^(6)A甲基化位点(表达变化倍数≥2且P<0.05),这些基因主要富集于代谢及细胞死亡通路。表达差异化m6A甲基化位点的基因与RNA差异化表达基因的联合分析发现1002个表达趋势相同的基因,如纤维蛋白原α链、溶质载体12家族成员1和甲肝病毒细胞受体1等。结论·顺铂可诱导肾脏组织中基因mRNA上m^(6)A甲基化位点的甲基化水平变化,促进急性肾损伤进程。

溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P<0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P<0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P<0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78±0.09,t=12.257,P<0.01)。结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一。

卵巢浆液性腺癌组织中ELOVL6及KLF4的表达水平与预后的关系

目的探讨卵巢浆液性腺癌组织中超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)及锌指转录调节蛋白4(KLF4)的表达水平及其与预后的关系。方法选取2012年5月至2014年5月青海红十字医院诊治的105例卵巢浆液性腺癌患者作为研究对象。其中高级别患者设为高级别组(n=75),低级别患者设为低级别组(n=30)。另选择因其他疾病行手术切除的正常卵巢组织和输卵管组织的患者设为对照组(n=25)。采用免疫组化法检测患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白阳性表达,使用Spearman分析相关性,患者5年生存率采用Kaplan-Meier单因素分析,影响患者预后的独立危险因素采用Cox多因素分析。结果ELOVL6和KLF4蛋白在低级别组患者中的阳性表达率(53.33%、30.00%)显著低于对照组卵巢组织的阳性率(80.00%、64.00%),差异具有统计学意义(P<0.05),在高级别组患者中的阳性表达率(42.67%、16.00%)显著低于对照组输卵管组织的阳性率(88.00%、80.00%),差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者Ⅲ期+Ⅳ期中ELOVL6和KLF4蛋白阳性表达率显著低于Ⅰ期+Ⅱ期,术后有残留灶患者的KLF4蛋白阳性表达率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者ELOVL6和KLF4阳性表达率呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.041,P=0.035);高级别组患者的ELOVL6蛋白阳性者5年生存率为40.6%,显著高于阴性者的21.8%,KLF4蛋白阳性者5年生存率为39.2%,显著高于阴性者的18.9%;Cox多因素分析显示KLF4低表达、FIGO分期均是影响高级别组患者预后的独立危险因素。结论卵巢浆液性腺癌患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白低表达,FIGO分期和KLF4对患者预后有一定影响。

趋化素样因子超家族6在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:探讨趋化素样因子超家族6(chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domain-containing family member 6,CMTM6)在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法:选用购自芯超公司的136例乳腺癌组织芯片,其中包括42例配对的癌及癌旁组织,用免疫组织化学染色法检测乳腺癌及癌旁组织中CMTM6的表达水平。用配对χ~2检验比较CMTM6在乳腺癌及癌旁组织中的表达差异,用χ~2检验分析乳腺癌组织中CMTM6表达水平与患者临床病理特征的关系,用Kaplan-Meier及Log rank分析CMTM6表达水平与患者生存期的关系,拟合Cox模型评价不同指标对患者预后的影响程度。结果:CMTM6在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01)。CMTM6的表达与乳腺癌病理分型和HER2阳性相关(P<0.05)。CMTM6高表达组患者的生存期较CMTM6低表达组显著缩短(P<0.05)。乳腺癌病理分型(HR=10.374,95%CI:3.529~30.497,P<0.01)、TNM分期(HR=4.599,95%CI:1.784~11.856,P<0.01)、三阴性乳腺癌(HR=3.370,95%CI:1.055~10.761,P<0.05)和CMTM6高表达(HR=0.195,95%CI:0.073~0.518,P<0.01)均可作为评判乳腺癌患者预后的独立危险因素。结论:CMTM6在乳腺癌组织中高表达,其可作为乳腺癌患者预后评估的危险因素。

G蛋白耦联受体C家族6组A亚型在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的前列腺癌(PCa)在我国的发病率逐年上升。G蛋白耦联受体C家族6组A亚型(GPRC6A)是近年来发现的PCa易感基因。文章探讨GPRC6A及其介导的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在前列腺癌LncapC4?2细胞增殖与凋亡中的作用。方法实验分为LncapC4?2 PCDH组(仅转染空载体pCDH)、LncapC4?2 GPRC6A组(仅转染pCDH?GPRC6A)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(转染pCDH?GPRC6A并加入U0126处理),通过CCK8检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡改变以及Western blot方法检测细胞周期与凋亡相关蛋白的变化。结果 Western blot法结果表明,与LncapC4?2 PCDH组比较,LncapC4?2 GPRC6A组的GPRC6A和P?ERK表达增加(P<0.05);与LncapC4?2 GPRC6A组比较,LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的P?ERK的表达明显降低(P<0.05)。CCK8检测表明LncapC4?2 GPRC6A组相较LncapC4?2 PCDH组增殖加快(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相较LncapC4?2 GPRC6A组增殖明显减慢(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示LncapC4?2 GPRC6A组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 PCDH组明显降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 GPRC6A组明显升高(P<0.05)。Western blot结果中LncapC4?2 GPRC6A组的CyclinD1蛋白表达(0.88±0.04)较LncapC4?2 PCDH组(0.66±0.02)明显升高(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的CyclinD1蛋白表达(0.71±0.02)较LncapC4?2 GPRC6A组明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测凋亡结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的凋亡比例(3.64%)较LncapC4?2 PCDH组(9.00%)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(19.57%)明显降低(P<0.05)。同时Western blot检测结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的Bcl2的表达比LncapC4?2 PCDH组高,活化Caspase3的表达则降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相对于LncapC4?2 GPRC6A组Bcl2的表达降低,活化Caspase3的表达则增高(P<0.05)。结论 GPRC6A可能通过ERK信号通路促进PCa细胞增殖,抑制细胞凋亡,而参与PCa的发展过程。

山东省6~11岁儿童行为问题与家庭成员应对方式的相关性研究

目的研究山东省6~11岁儿童行为问题现状及其与家庭成员应对方式之间的关系。方法采用分层整群随机抽样方法,抽取山东省16地市2386名6~11岁儿童及其家庭成员,采用Achenbach儿童行为量表(CBCL)评估儿童行为问题;简易应对方式问卷(SCSQ)评估家庭成员应对方式。结果2386名儿童中有225例存在行为问题,检出率为9.4%,其中,1171名女童及1215名男童行为问题检出例数分别为103例(8.8%)和122例(10.0%)。各年龄段检出率比较差异有统计学意义(P<0.01)。6~11岁女童不同年龄CBCL抑郁因子、残忍因子、攻击性因子、性问题因子分比较差异有统计学意义(P<0.05),不同年龄男童多动因子、攻击性因子分比较差异有统计学意义(P<0.05)。儿童父亲、母亲、(外)祖父母、其他家庭成员的SCSQ积极应对、消极应对两个维度和积极问题关注、消极情绪关注、消极问题关注三个因子分比较差异均有统计学意义(P<0.05)。除CBCL残忍因子外,6~11岁男童及女童CBCL各个因子分与家庭成员应对方式均存在相关性(P<0.05);男童的CBCL交往不良因子与SCSQ母亲的积极情绪关注因子呈正相关(P<0.05),抑郁与母亲的消极情绪关注因子呈正相关(P<0.05),抑郁、强迫、社交退缩、多动、攻击性和违纪因子与母亲的消极问题关注因子均呈正相关(P<0.05);抑郁、交往不良、强迫因子与母亲的消极应对维度均呈正相关(P<0.05);分裂样、交往不良和攻击性因子与父亲的积极情绪关注因子均呈正相关(P<0.05),交往不良、攻击性因子与父亲的消极问题关注呈正相关(P<0.05)。女童CBCL躯体诉述、分裂强迫、攻击性因子与SCSQ母亲的积极应对维度和积极问题关注因子均呈正相关(P<0.05);躯体诉述、分裂强迫、攻击性、抑郁因子与母亲消极应对维度及消极情绪关注均呈正相关(P<0.05);多动因子与母亲消极应对维度呈正相关(P<0.05);违纪因子与母亲积极情绪关注呈正相关(P<0.05);多动、违纪、攻击性、抑郁因子与母亲消极问题关注因子均呈正相关(P<0.05);违纪因子与母亲心理疏导因子呈正相关(P<0.05)。躯体诉述、分裂强迫、违纪因子与父亲的消极应对维度均呈正相关(P<0.05);社交退缩、躯体诉述、分裂强迫,多动、违纪和攻击性因子与父亲消极问题关注因子均呈正相关(P<0.05);残忍因子与父亲积极情绪关注因子呈负相关(P<0.05)。结论儿童行为问题与父母应对方式存在相关性。过于积极和过于消极的应对方式对儿童成长均不利。

SLC6A4基因rs2020939多态性与卒中后抑郁相关性的研究

目的探讨SLC6A4基因的单核苷酸多态性位点rs2020939与卒中后抑郁（PSD）的相关性。方法本研究纳入246例首次发生脑梗死的患者，入院时登记患者基本资料、脑梗死病灶、美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分和脑血管病危险因素等，入院时和随访后3个月均采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）进行抑郁评分，根据3个月后HAMD评分将脑梗死患者分成卒中后抑郁组（n=86）和卒中后无抑郁组（n=160）。运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术对rs2020939进行基因分型。用单因素和多因素Logistic回归模型来分析卒中后抑郁的危险因素。结果年龄为卒中后抑郁的保护因素（P=0．0047，OR=0．977，95％可信区间0．955—1．000），NIHSS评分（P=0．00，OR=1．386，95％可信区间1．249～1．583）与PSD有关。rs2020939多态位点基因型和等位基因在卒中后抑郁组和卒中后无抑郁组中的分布均有显著性差异（基因型：Х^2=10．007，P=0．007；等位基因：Х^2=10．551，P=0．001）。结论除了患者年龄、脑梗死后病情严重程度与PSD有关外，还发现SLC6A4基因rs2020939位点多态性与淮海地区汉族人群卒中后抑郁的发病相关，该位点可能是PSD的易感基因。

BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸组织中的表达和定位

骨形态发生蛋白6(BMP6)能够促进睾丸支持细胞的DNA合成和细胞增殖,SMAD蛋白5(SMAD5)是其下游信号介质,抑制细胞凋亡,两者在雄性动物生殖过程中起着关键作用。以不同发育阶段(3月龄、1岁龄和3岁龄)藏绵羊(Ovis aries)为研究对象,运用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色法从转录和翻译水平检测了BMP6和SMAD5在藏绵羊睾丸不同发育阶段的表达和分布模式,研究BMP6/SMAD5在藏绵羊睾丸发育和精子发生过程中的作用。结果显示:1岁龄(性成熟期)和3岁龄(成年)藏绵羊睾丸中BMP6 mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著高于3月龄(性成熟前)(P<0.01),且两者在性成熟后趋于稳定;随年龄增长,藏绵羊睾丸中SMAD5 mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),但SMAD5蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。BMP6和SMAD5蛋白在藏绵羊睾丸不同发育阶段的支持细胞和间质细胞中均有表达,推测BMP6/SMAD5在精子发生过程中发挥作用。

MiR-663b/ALDH6A1轴通过ROS调节口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的 探讨microRNA-663b(miR-663b)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的调控作用及机制。方法 利用基因表达汇编(GEO)数据库的OSCC组织芯片数据进行差异表达基因分析;采用基因富集分析(GSEA)探寻OSCC与miR-663b相关的生物学功能。将miR-663b mimic以及醛脱氢酶6家族成员A1(ALDH6A1)过表达质粒转染至人OSCC细胞系HSC-3、CAL-27;采用CCK-8实验、克隆形成实验及裸鼠皮下移植瘤实验检测miR-663b对HSC-3、CAL-27细胞体内、外增殖的影响;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-663b与ALDH6A1的靶向关系。结果 GEO数据库组织芯片数据显示,miR-663b在OSCC细胞中表达上调;GSEA发现miR-663b生物学功能与调节细胞增殖、氧化还原反应及活性氧(ROS)相关。功能试验中,过表达miR-663b显著促进HSC-3、CAL-27细胞的体外增殖、克隆形成能力以及裸鼠皮下移植瘤的生长(P <0.05),下调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P <0.05),升高NADPH/NADP~+比值(P <0.05);而上调ALDH6A1表达则显著抑制HSC-3、CAL-27细胞体外增殖和和克隆形成能力,上调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P <0.05),降低NADPH/NADP~+比值(P <0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-663b能靶向结合ALDH6A1 mRNA的3’UTR区。结论 miR-663b在OSCC细胞中表达上调,并可通过靶向抑制ALDH6A1表达调节ROS水平,进而促进OSCC细胞增殖发挥致癌基因作用。

溶质载体家族6成员1通过调节PI3K/Akt信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨溶质载体家族6成员1(SLC6A1)对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。方法下载并综合分析数据集GSE125989和GSE100534,筛选差异基因;通过STRING数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建差异基因的蛋白相互作用网络,并筛选hub基因;通过Ualcan和GEPIA数据库检测hub基因SLC6A1在乳腺癌中的表达及其对预后的影响;转染SLC6A1-siRNA干扰乳腺癌细胞MDA-MB-231中SLC6A1的表达;细胞划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化;基因集富集分析和Western blotting检测SLC6A1在乳腺癌中发挥作用的机制;采用SC79激活Akt通路并检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果共筛选出92个乳腺癌原位癌与转移瘤的差异基因,并确定Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、SLC6A1等20个hub基因;SLC6A1在乳腺癌组织中高表达(P<0.001),且与患者预后相关(P=0.01);SLC6A1表达被干扰后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05);SLC6A1表达降低可抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化(P<0.05);激活PI3K/Akt通路后SLC6A1-siRNA对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用消失(P<0.05)。结论SLC6A1通过调节PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌的侵袭和转移。

神经酰胺合成酶3通过SMAD6基因影响肝细胞癌的侵袭和转移

目的:由于缺乏早期诊断和有效治疗,肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者预后较差。因此迫切需要更好地了解HCC相关的分子机制,并确定早期诊断和治疗的有效靶点。本研究旨在探讨神经酰胺合成酶3(ceramide synthase 3,CerS3)在HCC中的表达及其生物学作用。方法:收集深圳市人民医院159例HCC接受根治性切除术患者的临床标本,包括HCC组织和邻近非肿瘤组织。采用免疫组织化学染色、蛋白印迹法和real-time PCR检测CerS3在HCC组织和邻近非肿瘤组织中的表达。体外实验中,将Hep3B细胞分为载体对照组和CerS3载体组,并分别用含有cDNA对照或CerS3 cDNA的反转录病毒载体转染细胞;将HCC LM3细胞分为shRNA对照组或CerS3 shRNA组,并分别用含有shRNA对照或CerS3 shRNA慢病毒载体转染细胞。分别采用MTT、EdU、Transwell和划痕试验测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并进行RNA测序以确定CerS3的下游信号。结果:与相应的相邻非肿瘤组织相比,HCC组织中CerS3 mRNA和蛋白质水平均升高(均P<0.05)。Cox回归生存模型的单变量和多变量分析显示:静脉浸润(95%CI:1.8~9.2,P<0.01)、TNM分期(95%CI:2.3~5.2,P<0.05)、组织学分级差(95%CI:1.4~6.8,P<0.05)和CerS3(95%CI:1.5~3.9,P<0.05)与HCC患者总生存率显著相关。此外,与肿瘤组织中CerS3低表达患者相比,CerS3高表达患者的总生存率显著缩短(P<0.05)。与载体对照组相比,CerS3载体组Hep3B细胞活力、EdU阳性细胞数、迁移和侵袭细胞数均显著增加(均P<0.05)。与shRNA对照组相比,CerS3 shRNA组HCC LM3细胞活力、EdU阳性细胞数、迁移和侵袭细胞数均显著降低(均P<0.05)。RNA测序将母体抗生物皮肤生长因子同源物6(small mothers against decapentaplegic family member 6,SMAD6)基因鉴定为促进HCC转移的致癌基因。结论:CerS3的过度表达与不良临床特征和不良预后密切相关。CerS3在功能上可通过激活SMAD6基因参与肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。

下调SLC6A3对肾透明细胞癌细胞SNU-349增殖、迁移的影响

背景与目的:溶质载体家族6成员3(solute carrier family 6 member 3,SLC6A3)在肾透明细胞癌患者中呈高表达,但SLC6A3对肾透明细胞癌细胞转移的影响及分子机制尚不明确。探讨SLC6A3对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移的影响及潜在的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测2017年1月—2018年1月在陕西省肿瘤医院收集的56例肾透明细胞癌患者的癌组织及癌旁组织中SLC6A3的表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测SLC6A3在肾透明细胞癌细胞SNU-349中的表达。构建shNC和shSLC6A3质粒,转染至SNU-349细胞中,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法、流式细胞术、transwell实验检测SLC6A3下调后细胞增殖、凋亡、侵袭能力的变化。采用Western blot分析SLC6A3下调对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号转导通路的影响。结果:肾透明细胞癌组织及细胞中SLC6A3呈高表达(P<0.05)。下调SLC6A3后,细胞增殖、侵袭能力显著降低(P<0.001),凋亡率显著升高(P<0.05),细胞周期S期阻滞(P<0.05)。下调SLC6A3后细胞内PI3K及Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论:SLC6A3在肾透明细胞癌组织中呈高表达,下调SLC6A3抑制细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡。SLC6A3可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响SNU-349细胞的生长。

隔药饼灸调节大鼠免疫抑制机制的转录组测序分析

背景:免疫抑制会导致机体免疫功能受损,加重病情。隔药饼灸能有效调节机体免疫功能,提高机体免疫力,但其调节机制目前仍不清楚。目的:基于转录组学的生物信息学技术对隔药饼灸干预的免疫抑制模型大鼠进行测序,探究隔药饼灸调控免疫的机制。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和隔药饼灸组,每组8只,模型组与隔药饼灸组采用腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型,35 mg/kg,连续3 d,造模结束后空白组与模型组不做干预,隔药饼灸组在大鼠中脘、神阙、关元及足三里穴位进行艾炷与药饼结合的隔药饼灸干预,连续10 d,1次/d,干预结束后次日取材。取各组大鼠外周血进行白细胞数量检测;采用Illumina测序平台进行RNA-seq,筛选差异基因,结合GO与KEGG数据库,对差异基因进行生物信息学相关分析。结果与结论:①与空白组比较,模型组白细胞数量显著减少(P<0.001)。②RNA-seq共筛选出模型组与空白组间差异基因3026个,其中1565个上调、1461个下调,隔药饼灸组与模型组间差异基因535个,其中280个上调、255个下调。③韦恩图分析获得模型组与空白组159个下调基因经隔药饼灸干预后上调,蛋白互作网络分析获得Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2,Mx1,Syk,Hspa1a及Ret等10个核心靶点;④GO与KEGG分析隔药饼灸调节机体的机制有免疫应答途径、病毒相关、血管新生和自身免疫系统等通路。⑤上述结果证实,实验筛选出隔药饼灸干预免疫抑制与Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2及Mx1靶点有明显关联,并且在免疫应答、病毒相关及血管新生等通路中发挥调控作用。