Fingerprint analysis of Cirsium japonicum DC.using high performance liquid chromatography

In many areas of China Cirsium setosum is used as Cirsiumjaponicum DC. Although the two herbs have similar appearance and many similar compounds, they are totally different medicinal material, and have different pharmacodynamic actions. The fingerprint spectrum can be a good tool to distinguish the two herbs and control the quality of Cirsium japonicum DC. In this paper, the chemical fingerprint of Cirsiumjaponicum DC was established using raw materials from 15 origins in China. The chromatographic separations were obtained by a SHIM-PACK VP-ODS column （150 mm ~ 4.6 mm i.d., 5 ~tm） using gradient elution, and run time of 80 min. The peak of linarin was considered as the control peak. The experimental data were analyzed with the software of Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of Traditional Chinese Medicine （Version 2004A） and the quality control system of both the overall qualitative similari- ties and the overall quantitative similarities of traditional Chinese medicine chromatographic fingerprints.

Polysaccharide extracts of Cirsium japonicum protect rat H9c2 myocardial cells from oxidative stress induced by hydrogen peroxide

Daji （Cirsium japonicum） has been applied against gastric disorders, lung diseases, and cardiovascular problems in thetraditional Chinese medicinal system. The present study was to investigate the protective effects of Daji （Cirsiumjaponicum） polysaccharide extracts （CJP） against hydrogen peroxide （H2O2） shock in rat H9c2 myocardial cells. First,CJP was isolated by hot water extraction and ethanol precipitation; it was then characterized by high performance liquidchromatography and infrared spectrum analysis. Rat H9c2 cells were subjected to H2O2 treatment to establish a cellinjury model. The 3- （4,5- dimethylthiazol- 2-yl）-2,5- diphenyltetrazolium bromide assay showed that CJP pretreatmentsignificantly ameliorated the H2O2 injury in a dose-dependent manner. Furthermore, the cell apoptosis induced by H2O2was markedly inhibited by CJP pretreatment, whereas the cleavage level of caspase-3, -8, and -9 was reduced. Inaddition, the p38 mitogen-activated protein kinase pathway might be involved in the protective effect of CJP onmyocardial cells. Therefore, we conclude that polysaccharide extracts of Daji （Cirsium japonicum） protect rat H9c2myocardial cells from oxidative stress induced by H2O2.

基于高效液相色谱指纹图谱和多成分定量的大蓟配方颗粒质量评价

目的评价不同生产企业不同批次大蓟配方颗粒的质量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定大蓟配方颗粒中5种有效成分的含量,色谱柱为Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-甲醇(4∶1,V/V)-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为330 nm,柱温为30℃,进样量为10µL;建立指纹图谱,通过比对鉴定共有峰,并进行相似度评价,采用聚类分析法(CA)、主成分分析(PCA)法和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法对5个生产企业的17批样品进行分析。结果大蓟配方颗粒的指纹图谱有14个共有峰,指认出了8个峰;CA和PCA将17批大蓟配方颗粒分为4类;OPLS-DA确定了6种差异标志物成分,对其影响显著性排序分别为芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷>峰7>绿原酸>峰9>隐绿原酸>柳穿鱼叶苷。5种成分在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9991,n=5);平均加样回收率为95.88%~99.12%,RSD为1.40%~2.00%(n=9)。结论该方法操作简单,方法学考察结果良好,能用于大蓟配方颗粒的质量评价。

大孔树脂纯化大蓟总黄酮工艺优化及其纯化前后抗氧化活性比较

目的 研究大孔树脂纯化大蓟总黄酮的最佳工艺条件并比较提取物与纯化物的体外抗氧化活性。方法 通过静态吸附-解吸实验选择适宜型号的大孔树脂后,采取动态吸附-解吸实验探讨大蓟黄酮提取物的最佳纯化条件,同时测定不同产物对羟自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)自由基的清除率。结果 AB-8大孔树脂动态吸附-解吸大蓟黄酮提取物的工艺条件为:上样液浓度为2mg·mL^(-1)、上样流速为1mL·min^(-1)、上样液体积为60mL、乙醇体积分数为75%、洗脱流速为1mL·min^(-1)和洗脱液体积为80mL。纯化后大蓟黄酮的含量由17.6%提高至61.2%。体外实验结果表明,当大蓟黄酮纯化物浓度为1.0mg·mL^(-1)时,对DPPH·和·OH的清除率分别为88.9%、95.1%,较提取物均有提高。结论 采用最佳工艺条件纯化大蓟黄酮粗提物简便可行,且能进一步增强大蓟总黄酮的抗氧化活性。

大蓟提取物改善高胆固醇血症模型小鼠的代谢组学研究

目的基于代谢组学技术探究大蓟提取物改善高胆固醇血症的作用机制。方法以大孔树脂吸附法制备大蓟提取物,并利用液相色谱-质谱联用仪鉴定其主要成分。实验小鼠先随机分为对照组(n=6)和造模组(n=16),造模组小鼠采用饮食诱导建立高胆固醇血症模型,造模成功后,再将造模组小鼠分为模型组(n=8)及大蓟提取物组(n=8)。大蓟提取物组小鼠灌胃大蓟提取物400 mg/(kg·d)(以提取物计),其余2组小鼠灌胃等体积0.3%羧甲基纤维素钠溶液,持续6周。给药结束后,以血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平和肝脏组织病理变化评价大蓟提取物的干预效果,并通过代谢组学方法探讨大蓟提取物改善高胆固醇血症模型小鼠的相关机制。结果从大蓟提取物中共鉴定出绿原酸、蒙花苷、柳穿鱼叶苷等12种成分。给药6周后,与对照组比较,模型组小鼠血清中TC水平显著升高、TG水平显著降低(P<0.05),肝脏组织出现大量脂滴,肝细胞排列紊乱,肝索结构被破坏。与模型组比较,大蓟提取物组小鼠血清中TC水平显著下降(P<0.05);肝脏组织中的脂滴明显减少,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状紧密排列,肝索排列整齐。代谢组学研究显示,大蓟提取物干预后,乙醇胺、富马酸、胆固醇等代谢产物水平发生显著回调;最终得到丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、精氨酸生物合成、柠檬酸循环3条代谢通路。结论大蓟提取物的成分主要是酚酸类和黄酮类,如绿原酸、蒙花苷、柳穿鱼叶苷等;大蓟提取物可能通过调节差异代谢物的含量及分布,以及调节丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、精氨酸生物合成、柠檬酸循环3条主要的差异代谢通路,参与氧化还原反应、改善肝脏脂质蓄积、发挥抗炎作用,从而改善高胆固醇血症。

基于ITS序列PCR-RFLP鉴别大蓟药材及饮片中掺伪飞廉、魁蓟的方法研究

[目的]利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),建立快速鉴别大蓟混伪品飞廉和魁蓟的方法。[方法]通过比对ITS基因序列,分别筛选飞廉、魁蓟的限制性内切酶位点并设计鉴别引物。考察PCR反应的退火温度、循环数及不同酶的适用性,对酶切反应时间和酶切底物量进行优化。同时对该方法适应性及掺伪比例的专属性、稳定性进行考察。[结果]当退火温度为58~60℃、循环数为30个时,样品均能扩增出一条379 bp的DNA条带。底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应120 min时,ZraI酶将飞廉切割成120 bp和259 bp两条DNA条带;DNA底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应60 min时,ApaLI酶将魁蓟切割成126 bp和253 bp两条DNA条带。[结论]试验建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别大蓟混伪品飞廉、魁蓟,避免此类药材的混用,以保证临床用药安全。

基于中红外技术的大蓟及小蓟鉴别研究

目的基于中红外光谱和化学计量学方法实现大蓟与小蓟的分类鉴别。方法采集不同地区的大蓟和小蓟样品,采用压片方法采集中红外光谱数据,建立大蓟和小蓟中红外指纹图谱,利用TQ分析软件进行色谱峰分析;用SIMCA软件进行主成分分析和偏最小二乘判别分析。结果大蓟和小蓟指纹图谱的走势和主要吸收峰位置基本相同,所建立的PCA-MD判别模型和OPLS模型可以将大蓟与小蓟进行区分。结论基于中红外光谱和化学计量方法可以对大蓟和小蓟进行区分鉴别。

中药大蓟的化学及药理研究进展

对中药大蓟的复杂化学成分进行了整理 ,发现主要是三萜和甾体类、挥发油类、长链炔醇类、黄酮和黄酮苷类化合物等。并综述了其抗菌、抑制心脏、降压、升压、降低脂质过氧化物形成、止血、抗肿瘤、杀线虫等药理作用。

大蓟化学成分的研究

目的 研究中药大蓟CirsiumjaponicumDC .的化学成分。方法 应用多种色谱技术进行分离纯化 ,根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果 共分得 1 2个化合物 ,分别鉴定为cis 8,9 epoxy heptadeca 1 ene 1 1 ,1 3 diyne 1 0 ol(1 ) ,ciryneolA (2 ) ,8,9,1 0 triacetoxy heptadeca 1 ene 1 1 ,1 3 diyne (3) ,ciryneoneF (4) ,cireneolG (5) ,ciryneolH (6) ,ciryneolC (7) ,对 香豆酸 (8) ,丁香苷 (9) ,蒙花苷 (1 0 ) ,β 谷甾醇 (1 1 )和胡萝卜苷 (1 2 )。 结论 4 ,5 ,6为新化合物 ,3为新天然产物 。

大蓟提取物对植物病原真菌的抑制活性

为了鉴定大蓟中所含成分对植物病原真菌的抑制活性;本研究通过溶剂提取法进行提取,并用生长速率法测定提取物的抑菌活性。结果表明,大蓟提取物对供试的植物病原菌具有一定的抑菌活性,其中50 mg/mL浓度石油醚提取物对石榴枯萎病菌的抑菌活性最高,抑制率达100%,毒力测定EC50为5.1017 mg/mL。

中药大蓟化学成分的研究

从大蓟的50%乙醇提取物中分离得到2个木脂素:(-)2-(3′-甲氧基-4′-羟基-苯基)-3,4-二羟基-4-(3″-甲氧基-4″-羟基-苄基)-3-四氢呋喃甲醇(1)和络石苷(2),以及另外6个化合物:蒙花苷(3)、柳穿鱼叶苷(4)、粗毛豚草素(5)、芹菜素(6)、咖啡酸(7)和对-香豆酸(8)。本文首次在蓟属植物中发现木脂素类成分,化合物7也为首次从本植物中分离得到,通过体外玻片法对化合物1～8进行凝血活性测定,发现化合物3、4具有一定的促凝血作用。

大蓟对5种癌细胞抑制作用的研究

目的:研究大蓟对癌细胞生长的抑制作用。方法:细胞形态观察、活细胞计数法和克隆形成率法研究大蓟对人白血病细胞K562、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela、胃癌细胞BGC823、结肠癌细胞HT-29生长的抑制作用。结果:大蓟可使五种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化,生长受到明显抑制,抑制率最高可达81.73%。结论:大蓟有确切的抑癌作用。

大蓟炭炮制工艺及质量标准研究

采用正交试验法,对大蓟炭的炮制工艺进行优选。结果表明,大蓟炭的最佳炮制工艺为220℃炒10min,该炮制品的多种宏量及微量元素含量明显升高。

ITS2序列鉴定大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品

目的:应用ITS2序列鉴别大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品,以保障临床用药准确。方法:收集大蓟、小蓟药材的基原物种蓟和刺儿菜及其近缘混伪品,经DNA提取、PCR扩增、测序和序列拼接等步骤,获得ITS2序列,结合Gen Bank载序列共14个物种54条序列,用MEGA6.0对序列进行比对分析,计算种内种间K2P(Kimura 2-Parameter)遗传距离,构建系统邻接(NJ)树。结果:ITS2序列分析表明,蓟和刺儿菜种内变异位点数均远小于其与混伪品种间变异位点,以上2个物种种内最大(平均)K2P距离均小于其与混伪品种间最小(平均)K2P距离;基于ITS2序列的系统NJ树可以将蓟和刺儿菜及其近缘混伪品很好地区分开,且各物种均单独成支。结论:ITS2序列可以很好地鉴定大蓟、小蓟药材及其近缘混伪品。

大蓟化学成分的研究

从菊科植物大蓟地上部分中分离鉴定了6个成分,即β-乙酰香树脂醇,三十二烷醇,β-谷甾醇,豆甾醇,5,7-二羟基-6,4′-二甲氧基黄酮,ψ-乙酰蒲公英甾醇。

新疆大蓟总黄酮的超声提取及抗氧化性研究

为研究新疆大蓟总黄酮的超声提取方法及其抗氧化活性,采用乙醇超声提取新疆大蓟中的总黄酮,分光光度法测定新疆大蓟中的总黄酮含量,研究新疆大蓟中黄酮类化合物对超氧阴离子自由基、羟自由基的清除作用。结果表明,新疆大蓟黄酮超声提取的最佳条件为乙醇体积分数75%、料液比1:30(g/mL)、超声时间45min,该条件下总黄酮提取率为0.289%,新疆大蓟中黄酮类化合物对清除自由基有明显的作用,且黄酮类化合物的添加量在实验范围内与其抗氧化性呈正相关。

大蓟的止血活性药效初步研究

目的:确定中药大蓟止血有效部位。方法:采用毛细玻管法测定大蓟提取物的止血时间。结果:大蓟药材醇提浸膏的水悬浮正丁醇萃取物可以明显缩短小鼠的止血时间,与蒸馏水组比较有显著性差异。结论:大蓟药材醇提浸膏的正丁醇部位萃取物具有止血功效。

大蓟提取液对4种癌细胞生长抑制作用的研究

目的研究大蓟提取液对癌细胞生长的抑制作用。方法细胞形态观察和活细胞计数法研究大蓟提取液对人白血病细胞K562,肝癌细胞HepG2,宫颈癌细胞Hela,胃癌细胞BGC823生长的抑制作用。结果大蓟提取液可使4种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、碎裂等变化,生长受到明显抑制,抑制率最高可达92.34%。结论大蓟有确切的抑癌作用,并与中医的气血理论、药物归经理论和肝肾同源理论相一致,在体外细胞水平上也有良好体现,对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。

不同地区大蓟炭止血药效与成分差异的初步研究

目的:研究不同地区大蓟炒炭后止血药效和成分的差异。方法:昆明小鼠随机分成阳性对照组、空白组、樟树大蓟炭组、安徽大蓟炭组、湖南大蓟炭组、河北大蓟炭组。连续给药3天后,采用小鼠断尾法和玻片法分别测量各组小鼠尾部出血时间及凝血时间,并用HPLC法初步比较不同地区大蓟炭的成分差异。结果:樟树、湖南地区大蓟止血效果要优于河北地区产大蓟,安徽地区大蓟没有止血效果,且呈现一定的促进出血效果。HPLC图谱显示不同地区产大蓟虽经鉴定均为正品大蓟,但成分差异较大。结论:不同产地大蓟止血效果、成分均存在显著差异,为进一步揭示大蓟炒炭止血增效提供了科学依据。

超声提取-反相高效液相色谱法测定新疆大蓟中绿原酸和芦丁的含量

以黄酮提取量为指标,选用正交实验对新疆大蓟总黄酮的超声提取工艺进行优化,结果表明最佳提取条件为:超声电流250mA,料液比1∶30(g/mL),时间40min,总黄酮提取量为2.89mg/g。同时建立了高效液相色谱法测定新疆大蓟中绿原酸及芦丁含量的方法。采用SinoChrom ODS-BP色谱柱,甲醇-1%冰乙酸为流动相,检测波长为340nm,流速为0.9mL.min-1。方法测定绿原酸的线性范围为1.675～16.75μg/mL,相关系数R=0.99995;测定芦丁的线性范围为2～20μg/mL,相关系数R=0.9999,回收率分别为99.45%、99.65%。该法简单准确,适用于新疆大蓟中绿原酸及芦丁的定量分析。