干旱荒漠区肉苁蓉人工接种技术研究

目前肉苁蓉正处于野生种向栽培种驯化的初级阶段,肉苁蓉接种同步性差和接种成活率低是生产中的突出问题。本试验在不同起源的梭梭林内,使用不同质量的肉苁蓉种子,采用不同药剂处理、不同接种深度、不同接种方法、不同接种量等接种措施进行人工接种成功率对比试验。结果表明:用一、二级肉苁蓉种子、500ppmABT(3)号生根粉浸泡30分钟、4月上旬至5月中旬用营养诱导法接种、接种垂直深度与水平距离40-60cm之间接种成功率最高。这项研究将为肉苁蓉人工高效接种提供理论依据与技术支持。

肉苁蓉化学成分的研究

从列当科植物肉苁蓉 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ中分得１０个化合物，通过理化常数、光谱数据及Ｘ－衍射分别鉴定为苁蓉素（Ⅰ）、梓醇（Ⅱ）、丁香苷（Ⅲ）、红景天苷（Ⅳ）、２，５－二氧－４－咪唑烷基－氨基甲酸（Ⅴ）、甘露醇（Ⅵ）、硬脂酸（Ⅶ）、β－谷甾醇（Ⅷ）、胡萝卜苷（Ⅸ）和甜菜碱（Ⅹ）。其中Ｖ为新的天然产物，Ⅱ为首次从本属植物中分得。Ｉ、Ⅲ、Ⅳ为首次从该种植物中分得。

肉苁蓉种子质量评价技术与分级标准研究

目的:建立肉苁蓉种子质量评价技术体系并制定肉苁蓉种子的质量标准。方法:应用体式镜、显微数码拍摄分析系统及四唑染色法,对肉苁蓉种子形态、千粒重、饱满度、胚率和生活力等进行测定;结合SPSS11.0统计分析软件对不同年份和来源的55份种子进行了分析。结果:肉苁蓉种子形态指标与千粒重显著相关,而与生活力的相关性不显著;但种子质量的好坏不取决于形态指标而主要由生活力和饱满度决定。结论:种子生活力、饱满度和千粒重是评价肉苁蓉种子质量的重要指标,并可作为主要指标应用于肉苁蓉种子质量分级标准。

不同等级整株肉苁蓉的药材品质和产地加工蒸制时间研究

目的:研究肉苁蓉等级与内在成分含量的相关性,明确不同等级整株肉苁蓉的加工蒸制时间。方法:测定肉苁蓉的鲜重和长度等外观指标,利用主成分分析和K聚类分析确定肉苁蓉分级标准,利用高效液相色谱和紫外分光光度计测定肉苁蓉的苯乙醇苷和多糖等含量,比较不同等级和蒸制时间内在成分含量差异。结果:肉苁蓉可分为3个等级,不同等级肉苁蓉的内在成分含量没有显著性差异。对肉苁蓉质量影响为蒸制时间大于等级。Ⅰ级肉苁蓉适宜蒸制30 min晒干,Ⅱ级和Ⅲ级适宜蒸制20 min晒干。结论:肉苁蓉整株产地加工采取分等级蒸制晒干的方式可有效保证肉苁蓉药材内在品质。

应用ICP-MS测定野生肉苁蓉中的稀土元素

中药材中的微量元素含量引起人们的普遍关注。应用ICP-MS分析了新疆产野生肉苁蓉中稀土元素的含量,La,Ce,Pr,Nd,Sm,Eu,Gd,Tb,Dy,Ho,Er,Yb,Lu,的浓度范围在1～260ng·g^-1之间,稀土元素之间含量差异比较大。在各种稀土元素中,新疆野生肉苁蓉含量超过100ng·g^-1的有三种,分别是La（144.89ng·g^-1,DW）,Ce（259.75ng·g^-1,DW）和Nd（133.25ng·g^-1,DW）;含量最少的三种是Eu（6.10ng·g^-1,DW）,Ho（3.42ng·g^-1,DW）和Lu（1.15ng·g^-1,DW）。稀土元素在野生肉苁蓉中的分配除了自身的吸收分配特性以外,还要受土壤等环境因素的影响,分配机理需要进一步研究。

肉苁蓉多糖的免疫活性作用及机制

目的 :研究肉苁蓉多糖 ( CDPS)的免疫活性作用及其体外免疫调节作用的机制。方法 :采用噻唑蓝比色法 ( MTT)观察 CDPS体外对 ISO、DEX、TNF- β抑制小鼠胸腺淋巴细胞增殖的调节作用 ;采用流式细胞仪进行了CDPS对细胞周期及其胞内 Ca2 +的测定。结果 :CDPS在较高浓度能对抗 ISO、DEX对淋巴细胞增殖的抑制作用 ,及对抗高浓度 TNF- β对淋巴细胞增殖的抑制作用 ,协同低浓度 TNF- β对淋巴细胞的增殖促进作用 ;10 0 μg/m l、2 0 0μg/m l CDPS均能使分裂期的细胞明显增加 ;较高浓度 ( 10 0μg/m l)的 CDPS对小鼠胸腺细胞内 Ca离子浓度有明显的促进升高作用。结论 :CDPS能促进细胞进入分裂期 ,并推断其对小鼠胸腺淋巴细胞增殖的促进作用与其促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放有关。

肉苁蓉种子后熟阶段内源激素含量变化

肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）为专性根寄生植物,种子休眠的主要原因在于种胚的后熟作用特性.试验表明,2～5℃低温层积处理,可在3个月的时间内将种子休眠打破,完成种子后熟.经过后熟作用,种子中的内源激素表现为吲哚-3-乙酸（IAA）、玉米素（ZR）、赤霉素（GA3）含量增高,脱落酸（ABA）的含量减少.

肉苁蓉对感染性休克大鼠肝线粒体能量代谢的影响

目的:研究肉苁蓉对感染性休克大鼠肝线粒体功能的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制感染性休克模型,采用多导生理仪监测平均动脉压(MAP)的变化,定磷法测定肝线粒体ATP酶活性,采用Clark氧电极法测定呼吸控制率(RCR)、Ⅲ态的变化。结果:大鼠在CLP术后,线粒体ATP酶活性、RCR和Ⅲ态显著降低。肉苁蓉给药组肝线粒体ATP酶活性、RCR和Ⅲ态较对照组明显改善,与大鼠死亡率的降低呈显著正相关。结论:肉苁蓉能增强实验性感染性休克大鼠线粒体能量代谢功能。

肉苁蓉对负荷运动小鼠肝脏保护作用的探讨

采用HE染色法、糖原染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究肉苁蓉对负荷运动小鼠肝组织、糖原及乳酸脱氢酶同工酶(LDH)活性的影响.结果显示负荷运动小鼠肝组织结构损伤严重,糖原减少、LDH5同工酶活性显著升高;服用肉苁蓉后负荷运动小鼠肝组织结构趋向正常,糖原丰富,LDH5同工酶活性明显下降.研究表明肉苁蓉可增加负荷运动小鼠肝糖原含量,降低LDH5同工酶活性,对肝脏具有保护作用.

肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷闪提工艺研究

采用闪式技术提取肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷。正交试验结果显示最佳提取工艺条件为:提取溶剂为60%乙醇,闪提转速5 500 r/min,提取时间90 s,料液比1∶30(g/m L),松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取率分别为8.87 mg/g和6.60 mg/g。与加热回流提取和超声提取法相比,闪式提取得率明显高于超声提取,与回流提取得率相似,但其提取时间短,是提取松果菊苷和毛蕊花糖苷的适宜方法。

HPLC测定肉苁蓉中8-表马钱子苷酸的含量

目的:建立 HPLC 法测定肉苁蓉不同品种中8-表马钱子苷酸的含量。方法:Hypersil ODS-2色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(9:91),流速1.0mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长235nm。结果:8-表马钱子苷酸在0.06～0.48μg范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率为98.0%,RSD=2.2%(n=5)。结论:本法操作简便快速,灵敏准确,可用于肉苁蓉药材的质量控制。

肉苁蓉细胞悬浮培养体系的建立

目的研究由肉苁蓉愈伤组织建立细胞悬浮培养体系的培养条件。方法在固体培养基上添加不同比例的生长激素,考察生长激素、细胞种龄和接种量对细胞生长和次生代谢产物苯乙醇糖苷(PeG)量的影响。结果在添加1mg/L2,4-D的B5固体培养基上形成的愈伤组织松散易碎,适于进行悬浮培养。细胞种龄为25d和接种量为3%～4%时细胞悬浮培养的结果最好,PeG产量达到最大,为0.82g/L。细胞在悬浮培养时聚集体由大变小,直径小于0.5mm的细胞聚集体由接种时的5%逐渐增加至第20天时的81%,其PeG量为10.1%。结论通过摇瓶培养建立了较好的细胞悬浮培养体系。

肉苁蓉雌雄配子体发育的研究

肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)是一种沙生根寄生濒危药用植物。采用石蜡切片法,利用光镜观察,对肉苁蓉雌雄配子体发育进行了系统研究。结果表明:花药壁由5层细胞组成,分别为表皮、药室内壁、中层(2层)和绒毡层,绒毡层细胞起源具异型性,发育类型为腺质型。小孢子母细胞胞质分裂为同时型,四分体为四面体型,成熟花粉粒为2-细胞型,部分败育。大孢子由单个孢原细胞直接发育为大孢子母细胞,大孢子母细胞减数分裂形成线状四分体,珠孔端3个大孢子最后退化,且退化顺序不一,大部分胚囊中的大孢子从合点端第2个开始退化,合点端大孢子为功能大孢子并发育为单核胚囊,胚囊发育属蓼型。研究结果为肉苁蓉资源的保护提供细胞学依据。

肉苁蓉多糖的分离、纯化和鉴定

目的 分离、纯化和鉴定壮阳中药肉苁蓉 Cistanche deserticola中的多糖成分。方法 经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到的粗多糖 ,再经 DEAE- Sephadex A- 5 0离子交换层析和 Sephacryl S- 2 0 0凝胶柱层析得到纯净的肉苁蓉多糖 (CDPS) ,用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖。结果 红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰 ,紫外光谱分析未见核酸和蛋白质的特征吸收峰。结论 本实验所提取的肉苁蓉多糖为单一、纯净的多糖。

肉苁蓉对败血症大鼠肝线粒体能量代谢功能的影响

目的研究肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)对败血症大鼠肝线粒体功能的影响,明确其具体作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制败血症模型,采用生理多导仪监测平均动脉压(MAP)的变化,定磷法测定肝线粒体ATP酶活性,采用Clark氧电极法测定呼吸控制率(RCR),Ⅲ态的变化。结果大鼠在CLP术后,线粒体ATP酶活性,RCR和Ⅲ态显著降低(P<0.01)。肉苁蓉给药组肝线粒体ATP酶活性,RCR和Ⅲ态较对照组明显改善(P<0.05),与大鼠死亡率的降低呈显著正相关。结论肉苁蓉能增强实验性败血症大鼠线粒体能量代谢功能。

肉苁蓉花序挥发物的GC-MS成分分析

目的:研究肉苁蓉花序挥发物的种类和相对含量,为其综合利用和种子繁育提供依据。方法:利用动态顶空套袋吸附法和气相色谱-质谱联用分析方法,研究近自然状态下肉苁蓉花期花序挥发物成分。结果:现蕾期到盛花期共从肉苁蓉花序中鉴定出40种挥发性化合物。现蕾期主要为烃类与绿叶挥发物,随着肉苁蓉花序上花朵开放,部分挥发物相对含量消失或减少,部分化合物相对含量增加,并出现一些新化合物。初花期和盛花期肉苁蓉花序主要挥发性成分为芳香性酯类与苯环类化合物,其相对含量较现蕾期显著增加。结论:肉苁蓉花序的挥发性成分种类多,且随开花进程出现种类和相对含量的变化,构成了肉苁蓉不同花期的香韵。

肉苁蓉种质资源多样性的AFLP分析

目的分析栽培与野生肉苁蓉Cistanche deserticola种质资源多样性。方法对58个种植基地和野生肉苁蓉单株进行AFLP分析,利用PopGene32软件分析群体的遗传多样性。结果栽培肉苁蓉多态位点百分率79.16%,野生居群总计多态位点百分率89.53%,4个居群平均Nei's基因多样性指数为0.1938,Shannon's多态性信息指数为0.3004,基因分化系数Gst为0.0979。结论栽培与野生肉苁蓉遗传多样性均较高,遗传分化很小。说明现阶段该物种的种内丰度较高,其濒危原因不在于此。因此,野生抚育和人工栽培是保护肉苁蓉资源并实现可持续利用的根本方向。

火焰原子吸收法测定肉苁蓉中的微量元素锰和铜

本文采用AAS300型火焰原子吸收分光光度计研究了测定新疆特色中草药肉苁蓉中微量元素锰及铜含量的方法,并通过实验对比了干法消化、湿法消化对测定结果的影响,测定结果的相对标准偏差<2.1%。

肉苁蓉种子的活力研究

目的为了改进TTC法测定肉苁蓉种子活力的方法和调查肉苁蓉种子于5℃贮藏时种子活力的变化。方法研究了TTC法中种皮、TTC溶液、次氯酸钠(NaClO)溶液和染色时间对肉苁蓉种子活力的影响,并用改进的方法测定了于5℃贮藏了不同年限种子活力。结果肉苁蓉种子于40℃下用0.5%TTC溶液染色48h后,再用0.2%NaClO溶液漂白2h后镜检;采收后贮藏于5℃保存1～2年的种子,其活力没有明显变化,但高活力种子的百分比随着贮藏年限的增加而增加。结论提供了一套方便快捷的测定肉苁蓉种子活力的方法;肉苁蓉种子于5℃贮藏有利于提高种子活力。

两种药用沙生寄生植物的比较研究

目的 有效地保护和利用天然药用植物。方法 采用形态学、解剖学、组织化学染色等方法 ,对生长在荒漠中的两种根寄生药用植物肉苁蓉 Cistanche deserticola和锁阳 Cynomorium songaricum进行了比较研究。结果 两种植物在寄主、外部形态、内部结构、组织化学等方面都有很大差别。结论 为这两种植物的鉴别、保护和利用提供理论依据。