A new strategy:Inhibitory effect and mechanism of Cymbopogon martinii essential oil on Aspergillus flavus

Cymbopogon martinii(C.martini)essential oil can inhibit the growth and toxin synthesis of Aspergillus flavus(A.flavus).In this study,C.martinii essential oil effectively inhibited radial growth,spore production,mycelium formation and aflatoxin B1(AFB1)synthesis of A.flavus.It also significantly changed the morphology and ultrastructure of mycelium.C.martini essential oil significantly changed the activity of antioxidant enzymes and lipid peroxidation level in mycelium,and ROS level increased significantly.According to proteomic analysis,1604 membrane proteins of A.flavus have been identified.C.martinii essential oil treatment seriously damaged the integrity of the A.flavus cell membrane,and C.martinii essential oil treatment has destroyed 58 cell membrane proteins and released 157 membrane proteins.This study provided a new explanation for the inhibition mechanism of C.martinii essential oil on A.flavus,and also provided technical support for the application of C.martinii essential oil in mildew prevention.

柠檬醛对黄曲霉质膜损伤机制的初步研究

与正常生长的黄曲霉对照 ,通过测定经柠檬醛毒化的菌丝体对还原糖和蛋白质利用率、[Na+ ,K+ ] ATPase分解ATP活性、细胞电解质渗出率、并结合扫描电镜和快速显微多道分光光度法观察菌丝体细胞及孢子形态变化 ,结果表明经该醛MIC毒化后 ,菌丝体细胞及孢子表面疏松而粗糙 ;隘痕缩小并关闭 ;电导率增加 5 2 8% ;对还原糖和蛋白质的利用速率分别下降 6 1 5 %和 44 3 % ;孢子萌发率下降至 6 1 4% ;该醛能明显改变细胞质膜的分子结构 ,使其失去选择通透性而抑制菌丝体生长和孢子萌发率。

肉桂醛、柠檬醛抑制黄曲霉生长机制研究

目的研究中药活性成分肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉细胞膜麦角固醇生物合成的影响,以探讨其抗菌的作用机制。方法将黄曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养3 d,刮取平皿上菌苔,称重、皂化,提取真菌中的难皂化脂,高效液相色谱(HPLC)法测定其中的麦角固醇含量。结果柠檬醛浓度为0.16μg/ml、肉桂醛浓度为0.09μg/ml作用黄曲霉后,麦角固醇含量较未用药组显著降低。结论肉桂醛、柠檬醛可能通过影响黄曲霉麦角固醇的生物合成抑制黄曲霉生长。

柠檬醛抑制黄曲霉生长相关机理的研究

对经柠檬醛损伤的黄曲霉 ,采用 Irwin等人方法测定质膜通透性 ,Miller方法测定试验菌对还原糖和蛋白质吸收利用率 ,Hodge等人方法纯化质膜 [Na+,K+]- ATPase,并用 L iberg方法测定其活性 ;以琥珀酸、丙酮酸和 α-酮戊二酸为底物测定 Mt呼吸速率 ,并结合扫描电镜观察和彗星图像分析 ,发现该醛能破坏细胞壁、质膜、Mt和膜选择通透性 ,并损伤核 DNA,而引起细胞的死亡 ,揭示这种单体芳香醛抗霉是多途径的复合作用 ,为其走向粮油、食品贮藏领域提供了理论依据 .

柠檬醛致黄曲霉孢子丧失萌发力的机制

通过由倒置显微镜、衍射光栅和线阵光电偶合器件CCD(chargecoupleddevice)等构成的显微多道分光光度系统及由计算机DEPHI编程工具编制的单细胞凝胶电泳SCGE(single cellgelelectro phoresis)图像分析系统 ,摄取荧光显微镜所呈图像 ,再由图像捕捉卡将CCD产生的图像信号送入计算机 ,将柠檬醛对黄曲霉质膜和核DNA损伤的图像进行显示存储和分析处理 ,测定彗星长度、荧光强度、矩类及头尾DNA含量比等彗星参数指标 .结果发现Olive尾矩、尾长、尾分布矩等彗星尾参数指标与柠檬醛致黄曲霉损伤浓度呈正相关性 ,当致损浓度达到 1 5mg L以上时 ,DNA损伤为致死性损伤 ,不能被细胞内修复系统所修复 .揭示柠檬醛通过损伤质膜而进入细胞 ,对DNA产生不可逆损伤 ,使孢子失去萌发力的机制 .实现将DNA损伤的生化定性检测推进到数值化研究范围 ,为柠檬醛的开发应用提供了重要理论依据 .与国内外同类技术相比 ,本检测观察系统还具有高灵敏度、快速、无扰、多光谱显微测定之特点 .

肉桂醛和柠檬醛对黄曲霉及烟曲霉细胞DNA与RNA的影响

目的研究肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉和烟曲霉细胞DNA、RNA水平的影响,以期探明其抗真菌的作用机制。方法黄曲霉、烟曲霉接种在含有不同浓度药物的蔡氏固体培养基中,同时设不加药物为空白对照,置26.5℃恒温培养3～6d,将对照组和用药组真菌细胞进行激光扫描共聚焦显微镜观察并作细胞扫描图像分析,以对DNA、RNA进行定量和定位观察。结果用药组DNA、RNA水平发生不同变化,出现多核分生孢子。结论肉桂醛、柠檬醛直接或间接影响了真菌细胞遗传物质的正常合成,以至不能完成正常细胞周期,影响分生孢子梗的正常分化,从而抑制真菌生长、繁殖。

肉桂醛、柠檬醛抗黄曲霉作用的研究

目的:研究肉桂醛、柠檬醛的抗黄曲霉作用。方法:在含不同浓度药物的蔡氏培养液中接种一定量的黄曲霉孢子,每隔 4h分别取定量培养液涂布于蔡氏培养皿上进行霉菌计数,直到48h。 26.5℃培养 72h后计数萌发的霉菌孢子;用扫描电镜观察药物作用后黄曲霉的形态、表面结构的变化。结果:与对照组比较,肉桂醛、柠檬醛的浓度分别在≥0.05μg/ml、0.28μg/ml作用4h后,萌发的黄曲霉孢子数明显减少;肉桂醛、柠檬醛作用后黄曲霉孢子菌丝的形态、表面结构明显改变。结论:肉桂醛、柠檬醛对黄曲霉孢子萌发有显著的抑制作用,柠檬醛抑制黄曲霉孢子的萌发更迅速,两者可能通过破坏真菌细胞结构起抗菌作用。

柠檬醛对黄曲霉质膜物理损伤机制的研究

通过反射干涉对比显微技术和快速图像分析技术,捕获细胞质膜外光晕变化和细胞周边边缘激发变化的信息,并采用闪烁本征模式分解测定柠檬醛作用于黄曲霉质膜前后各模式（m=0,1,2）所对应的平均平方振幅<δn2m>、剪切弹性μ和弹性弯曲模量Kc,与理论模式光谱相比,研究柠檬醛损伤质膜的物理机制.结果表明,m=1的平动模式主导了光晕波谱,其平均平方振幅呈双指数衰变,该模式几乎与剪切弹性无关,即μ=0;弹性弯曲模量Kc的最小和最大值分别为9.45×10-18J和5.43×10-17J,与柠檬醛的浓度成正相关性.揭示该醛对黄曲霉质膜的损伤,除改变膜的选择通透性和电导率外,同时使质膜平动模式的平均平方振幅呈双指数衰变,弹性弯曲模量Kc增加,从而降低膜伸缩的弹性.

柠檬醛损伤黄曲霉线粒体生化机理的研究

应用生物化学方法并结合扫描电镜 ,研究柠檬醛掺入黄曲霉细胞 ,并通过损伤线粒体(Mt) ,导致抑制其生长的机理。结果表明 ,在药物致敏浓度时 ,菌丝体经该醛作用后 ,胞内Mt呈不规则增多 ,氧化还原反应系统受到破坏 ,与对照组相比 ,柠檬醛组的琥珀酸脱氢酶 (Succi nateDehydrogenase ,SDH)、苹果酸脱氢酶 (MalateDehydrogenase ,MDH)活性分别呈不可逆下降2 7 1 %和 2 4 2 % ,随着药物浓度的升高 ,SDH、MDH的活性直至消失 ;以琥珀酸、α 酮戊二酸和丙酮酸为底物时 ,线粒体呼吸速率分别下降 2 4 1 %、1 4 3 %和 3 6 1 % ,提示柠檬醛能使菌丝体DNA、RNA、脂类和蛋白质等生物合成受到抑制 ,促进细胞死亡。

柠檬醛顺反异构体对黄曲霉超微结构及膜功能的影响

研究柠檬醛顺反异构体(香叶醛和橙花醛)抗菌性是阐明该醛抗菌机理核心所在.用酶转化法合成香叶醛和橙花醛后,用液态或气态的异构单体分别对黄曲霉孢子及菌丝体进行毒化.采用透射电镜、多维显微及激光拉曼散射技术对毒化的黄曲霉孢子及菌丝体进行显微结构观察和膜相关参数的测定.结果表明,无论是液体还是气体毒化方式,柠檬醛顺反异构体单独存在时均有抗黄曲霉作用;二者混合物的抗菌总活性与单体相比表现出一定程度协同性;二个异构单体的抗菌作用不仅表现为破坏黄曲霉超微结构,而且还反映在损伤其细胞膜体积调节功能及变形能力.

显微多道分光光度法研究受柠檬醛损伤后黄曲霉细胞形态变化

采用从山苍籽油分离出的柠檬醛作为抗菌药物 ,产毒和无毒的黄曲霉细胞 (Aspergillusflavuscell,AFC)作为药物作用的靶 ,以显微多道分光光度法和显微图像分析法对被该醛所损伤的AFC进行图像捕获 ,测定受损伤后细胞内吸收光谱、截面积、周长、长轴长及短轴长所发生的变化。发现在 41 0nm和 665nm处产毒AFC存在特征吸收峰 ,受该醛损伤后产毒和无毒AFC的吸收光谱波峰均发生迁移 ,且峰面积增大 ;截面积等 4类形态参数的数值随柠檬醛浓度升高而减少 ;为质膜物理化学及细胞内生理生化指标变化提供了理论依据。表明柠檬醛不仅破坏质膜的选择性通透性 ,而且使细胞质膜结构改变并进入细胞 ,与靶分子及靶细胞器作用而引发一系列新的生理生化现象的出现。实现对活态细胞受药物作用后形态及生物大分子动态变化的快速、实时、在位的测定 ,对抗菌药物作用于细胞并使其发生形态结构及靶分子的变化提供了必要的物理参数 ,在药物抗菌理论及方法研究上具有重要意义。

不同植物抑制剂对黄曲霉菌生长和产毒的影响

目的研究不同植物抑制剂对黄曲霉菌生长和产毒的影响。方法将产毒的黄曲霉菌接种在EMA培养基上,活化后分别培养在含不同浓度抑制剂的培养基中,在30℃的温度下恒温培养,通过观察抑菌圈直径的大小判断不同抑制剂对黄曲霉生长的影响,并将菌丝抽提使用酶标仪测定不同抑制条件下黄曲霉毒素含量。结果 0.2mg/mL的紫苏醛、烟草萜和香芹醇在第2d对黄曲霉菌生长抑制率分别为100%、67%和79%,第5d时分别降低到46%、63%和55%。柠檬醛、紫苏醛、香茅醇和芳樟醇处理组培养基中第5d时黄曲霉毒素含量很低,对照组中黄曲霉毒素含量是这4个处理组的2000倍以上,第6d时,6种植物抑制剂的抑制黄曲霉菌产毒能力都有所降低,但是0.2mg/mL的柠檬醛、紫苏醛、香茅醇、烟草萜和香芹醇仍具有较高的抑制黄曲霉菌产毒能力。结论柠檬醛、紫苏醛、烟草萜和香芹醇对黄曲霉菌的生长和产毒有着明显的抑制作用。

柠檬醛缓释制剂的稳定性及其对黄曲霉菌的抑制作用

本文旨在研究柠檬醛脂质体(Citral Liposome,CL)和柠檬醛-壳聚糖复合脂质体(Citral Liposome-Chitosan,CL-CS)这两种柠檬醛缓释制剂的稳定性及对黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的抑菌效果、抑菌机理,为后期开发绿色、高效、安全的柠檬醛缓释抑菌剂提供数据支撑。通过设定不同的温度及pH条件,以外观、粒径、Zeta电位和保留率为指标探究储藏稳定性;用孢子计数法测定柠檬醛缓释制剂的瞬时抑菌率,并分析抑菌长效性;根据细胞通透性变化揭示柠檬醛缓释制剂的抑菌机理。结果表明,两种柠檬醛缓释制剂均具有纳米级粒径且粒径均一,经壳聚糖修饰后,体系Zeta电位由-16.63±1.67变为35.72±3.29。4℃条件下储藏28 d后粒径和Zeta电位变化较小,保留率更高,且CL-CS比CL更稳定;pH为4~6时,两种柠檬醛缓释制剂更稳定,CL和CL-CS的粒径别在150和200 nm左右。CL、CL-CS在48 h内对黄曲霉菌的瞬时抑菌EC_(50)分别为77.88和68.20 mg·L^(-1),继续培养48 h后CL和CL-CS的抑制率分别为67.69%和82.89%,而柠檬醛只有30.26%,表明CL-CS具有良好的瞬时抑菌效果和长效抑菌效果。这两种柠檬醛缓释制剂处理后黄曲霉菌的胞外电导率和核酸含量均升高,说明细胞膜通透性增加,且所需要的作用时间比游离柠檬醛更短。综上,两种柠檬醛缓释制剂具有良好的稳定性,能通过改变细胞通透性、使内溶物渗出,从而抑制黄曲霉菌的生长,且具有长效抑菌能力,CLCS比CL性能更好,具有开发成植物源防霉剂的潜能。

柠檬醛和丁香酚对黄曲霉生长的协同抑菌作用研究

为了降低抑菌剂的用量及成本,同时达到更好的抑菌效果,分别检测麝香草酚、香芹酚、邻香兰素、柠檬醛和丁香酚的最小抑菌浓度(MIC),通过棋盘法筛选到具有协同抑菌作用的复配组合为柠檬醛和丁香酚,进一步研究其抑菌机制。测定柠檬醛和丁香酚协同处理下黄曲霉菌丝干重变化,通过碘化丙啶染色试验测定细胞内容物释放、相对电导率和pH值变化,检测其对细胞膜完整性的影响,通过荧光白染色试验研究其对隔膜的影响,最后评估其在花生中的抑菌效果。结果表明:麝香草酚、香芹酚、柠檬醛和丁香酚的MIC分别为135、47、71、43μg/mL,通过联合抑菌法得出当1/4 MIC柠檬醛+1/4 MIC丁香酚时,具有协同抑菌作用;柠檬醛和丁香酚协同处理能完全抑制菌丝生长、破坏黄曲霉细胞膜的完整性,细胞外pH值依次降低,相对电导率依次升高,黄曲霉菌丝内的隔膜被破坏;柠檬醛和丁香酚对黄曲霉的抗真菌活性与细胞膜通透性和细胞壁完整性受损有关;1/4 MIC柠檬醛+1/4 MIC丁香酚处理完全抑制了黄曲霉孢子在花生上的萌发。柠檬醛和丁香酚处理在防控黄曲霉污染中展示了良好的效果,同时协同处理方式降低了天然化合物的用量和成本。

柠檬醛对中药材黄曲霉菌的抑制研究

【目的】从霉变中药材(枳壳、泽泻)中分离鉴定黄曲霉菌(Aspergillus flavus),以中药材源黄曲霉菌为研究对象,分析柠檬醛对其抑制效果,为后期开发绿色、高效、安全的植物源防霉剂提供数据支撑。【方法】采用点样法从霉变中药材上分离黄曲霉菌,通过形态学和分子生物学手段鉴定,并测定了其产毒能力;利用孢子计数法定量研究柠檬醛对中药材源黄曲霉菌的体外抑制;通过人为接种的方式研究柠檬醛对实际中药材样本霉变的防治效果。【结果】从霉变中药材上分离了两株菌(ZK和ZX),形态学和分子学鉴定其为黄曲霉菌,该两株中药材源黄曲霉菌的产毒量分别为3.01μg/kg和345μg/kg,危害不容忽视。体外抑菌试验结果表明柠檬醛对ZK和ZX的半数有效抑制浓度分别为719.42 mg/L和689.19 mg/L,具有良好的体外抑制效果;柠檬醛对中药材实际样本具有良好的霉变防控作用,能有效防治泽泻和枳壳霉变的浓度分别是4μL/g和8μL/g。【结论】霉变中药材中分离得到的黄曲霉菌具有产生黄曲霉毒素的能力;柠檬醛对中药材黄曲霉菌有良好抑制作用,具有开发成植物源防霉剂的潜能。

植物乳杆菌产抑霉菌活性物质对黄曲霉抑菌机制的研究

以分离自青贮燕麦中的植物乳杆菌L-Z1为研究对象,以黄曲霉为指示菌,通过测定L-Z1对黄曲霉生物被膜、细胞膜通透性、磷代谢和呼吸系统酶活性的影响,从而初步阐明L-Z1对黄曲霉的抑菌作用和抑菌机制。结果表明:加入植物乳杆菌L-Z1后,黄曲霉抑菌圈直径为(17.15±0.23)mm(7.8 mm被含),生物被膜抑制率高达56.6%,黄曲霉的可溶性总糖和可溶性蛋白含量增加,磷代谢和呼吸系统酶的活性均降低,证明植物乳杆菌L-Z1对黄曲霉具有较强抑菌性,抑菌机制是减弱黄曲霉的细胞呼吸作用及破坏细胞膜。