柚(Citrus grandis Osbeck cv.)MADS box基因的表达分析

以De novo转录组学方法分析柚(Citrus grandis Osbeck cv.)MADS box基因家族的基因.以特早熟龙柚(变异型)和琯溪蜜柚(参照型)嫩果(不超过5天)和新叶为材料,经过RNA提取、反转录、测序、组装得到Unigene序列.Unigene序列在Nr、Swiss-Prot、KEGG和COG四大数据库中进行比对,获得MADS box转录因子家族基因注释结果.采用数字基因表达标签(digital gene expression tag,DGE)技术,对样本中基因转录丰度以RPKM值表示,比较处理组和对照组的RPKM值,以倍性变化≥2确定差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs).从特早熟龙柚和琯溪蜜柚嫩果和叶片中,总共注释到28个MADS box基因家族基因.在龙柚嫩果(FE)和蜜柚嫩果(FL)中表达的有25个,其中有6个属于差异表达基因.在龙柚叶片(LE)和蜜柚叶片(LL)中表达的有27个,其中有7个属于差异表达基因.注释到的28个MADS box基因家族基因在克莱门特柚(Citrus clementina)和中国甜橙(Citrus sinensis)报道过的分别有18个和20个,其中有5个基因既在中国甜橙和克莱门特柚都没有报道过,也没有发现在其它Citrus物种报道过.

沙田柚树体营养特性研究

研究梅州沙田柚（Citrus grandis Osbeck cv. Shatianyou）结果树叶片营养特点、树体中营养元素的季节性变化及叶片营养元素含量与果实品质的相关性。结果表明，营养叶中的各元素在不同的生育时期含量均有不同，树体内各营养元素间的关系存在着相互促进和相互抑制的复杂作用；叶片和果实中各元素含量的年周期变化规律不同，说明沙田柚在不同的生育时期对各元素的需求量及它们之间的需求比例有不同要求；结果还表明，沙田柚的树体养分含量在７－９月份对柚果品质影响最大，与果实全糖相关性最显著的是大量元素Ｃａ和Ｐ，其次是微量元素Ｂ、Ｃｕ、Ｍｏ、Ｚｎ等。

沙田柚多倍体的获得与基因组原位杂交(GISH)分析

【目的】沙田柚是中国特有的柚类名优品种,但种子多,一般100粒左右。为创新三倍体无核品种积累育种材料,本研究通过实生筛选获得不同倍性沙田柚新种质,同时运用基因组原位杂交(GISH)技术分析天然与人工四倍体新种质的染色体组组成。【方法】随机采集沙田柚自然授粉果实,萌发种子检测其染色体数目获得倍性变异植株;以2x母株gDNA为探针,同获得的4x植株中期染色体杂交进行GISH分析。【结果】从6000粒沙田柚种子中共获得三倍体5株,四倍体9株;对沙田柚天然与人工四倍体新种质的基因组原位杂交(GISH)分析表明,天然四倍体中有7株为异源四倍体,2株为同源四倍体,秋水仙碱诱导获得的人工四倍体4株均为同源四倍体;初步观察显示;与二倍体相比,四倍体植株生长缓慢,树冠较小,枝短而密生,叶片浓绿,宽度变宽,叶形指数减小,叶片厚度增加明显。【结论】多倍体单胚柚新种质的获得为进一步选育无核品种奠定了基础,同时GISH分析证实了沙田柚雌性未减数配子的存在。

梅州沙田柚结果树的叶片营养特点研究

研究了梅州沙田柚两个果园的土壤养分、结果树营养叶片不同生育时期的矿质元素含量及季节性动态变化情况和各元素的相互关系。结果表明，柚树根际土壤养分正常树和退化树相比没有明显差别，营养叶中的各元素在不同的生育时期含量均不同，且退化树各元素在各生育期的变化与正常树相近。各元素的年周期变化规律不同，说明沙田柚在不同的生育时期对各元素的需求量及它们之间的需求比例有不同要求。可见，树体内各营养元素间的关系存在着相互促进和相互抑制的复杂作用。

不同保鲜膜包装对蜜柚冷藏效果和货架品质的影响

为冷藏蜜柚选择较适宜的单果包装保鲜膜,提高保鲜效果,以微孔保鲜膜和不同厚度的聚乙烯(PE)保鲜膜对蜜柚(Citrus grandis (L.) Osbeck.cv.Miyou)进行单果包装,在5～6℃下冷藏4个月后在货架期条件下(约20℃)放置15d。在不同阶段分别测定各包装袋内氧气和二氧化碳体积分数,以及果实质量损失率、果肉硬度、果肉营养物质(可溶性固形物、可滴定酸和维生素C)含量、乙醇含量,并进行感官评价。微孔膜包装袋内具有较高的氧气体积分数(20%)和较低的二氧化碳体积分数(0.7%～1.4%)。在整个冷藏期和货架期内,微孔膜包装的蜜柚具有较高的质量损失率,但其营养物质含量较高、果肉硬度较低,而且乙醇含量最低,风味也最佳。15d货架期后,各处理的蜜柚的质量损失率和乙醇含量急剧升高,可溶性固形物、可滴定酸急剧下降。微孔膜包装对蜜柚的贮藏和保持货架期品质具有良好的效果。

提高沙田柚茎尖嫁接成活率的研究

研究了可以影响沙田柚茎尖嫁接成活率的部分因素。结果表明 :当沙田柚接穗选择带 4个叶原基的茎尖、枳壳砧木选择黑暗培养 1 4d的实生苗或培养基中蔗糖浓度选择 7.5 %时各自的嫁接成活率较高。若在茎尖嫁接切口外缠绕 parafilm胶可令成活率明显增加。若在培养基中加入 GA3、6-BA和 IBA则明显抑制嫁接成活率。GA3、6-BA和 IBA处理接穗和砧木均可提高嫁接成活率 ,其中以 1 0 mg/L GA3处理效果最好 ,嫁接成活率可达 45 % ;6-BA和 IBA处理虽然也可提高嫁接成活率 ,但是同时又增加了接穗的脱落死亡率。

琯溪蜜柚果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系

【目的】探讨琯溪蜜柚[Citrus grandis(L.)Osbeck cv.Guanximiyou]果实成熟过程中汁胞粒化与活性氧代谢的关系。【方法】以易发生汁胞粒化的老龄树和不易发生汁胞粒化的适龄树的琯溪蜜柚果实为材料,研究成熟过程中果实汁胞MDA、H2O2、木质素含量,活性氧清除酶(POD、SOD、CAT)活性和内源抗氧化物质(AsA、GSH)含量的变化。【结果】与不易发生粒化的适龄树果实相比,易发生汁胞粒化的老龄树果实汁胞成熟过程中,汁胞粒化指数、H2O2、MDA和木质素含量增加,AsA和GSH含量减少,SOD活性前期减少后期增加,CAT活性增加,POD活性显著增加。【结论】琯溪蜜柚果实成熟过程中,活性氧代谢失调导致活性氧(H2O2)积累和POD活性的增强而促进木质素的合成,从而导致汁胞粒化的发生。

盐胁迫下柚实生苗生长、矿质营养及离子吸收特性研究

以坪山柚为材料,对盐胁迫下实生苗生长、矿质营养及离子吸收特性进行了研究。结果表明,沙培30d,80～200mmol/L盐胁迫,随盐浓度提高,坪山柚实生苗株高、叶面积、地上部干重和根部干重明显降低。溶液培养8d,坪山柚实生苗地上部及根Na+、Cl-含量随盐浓度的增加而增加,根及地上部K+、Ca2+、Mg2+以及P和Mn含量下降,Fe、Zn、Cu含量的变化因器官而异。其中,地上部Fe含量对盐胁迫敏感,可作为柚耐盐性鉴定指标。40mmol/L盐胁迫,坪山柚地上部K+/Na+、Ca2+/Na+、Mg2+/Na+值均显著下降,且Mg2+/Na+值<1。在浓度≤120mmol/L盐胁迫下,坪山柚实生苗地上部K+/Na+值>1;浓度≥160mmol/L盐胁迫,K+/Na+值<1,这是坪山柚实生苗对盐胁迫的一种适应性反应。盐胁迫下,坪山柚实生苗根系对Na+吸收、运转效率比Cl-高。

沙田柚多倍体基因组AFLP分析

沙田柚性状优良却多核，通过多倍体选育获得无核或少核品种具有很高的价值。本研究运用AFLP技术分析沙田柚多倍体基因组的变化，以期为多倍化选育优良品种提供一定的理论依据。结果表明，多倍体沙田柚基因组存在大量片段的丢失，也有许多新的酶切位点出现，变异率在21％-29％之问。其中多个位点同时发生了相同变异，暗示着多倍体基因组的进化并不是一个随机事件，而这些变异与哪些表观遗传变异直接相关，还有待深入研究。

沙田柚遗传转化再生体系的建立

以沙田柚的实生苗不同外植体为对象,进行了沙田柚遗传转化再生体系建立研究。研究结果表明:以实生苗上胚轴作为外植体,以MS无机盐+100mg/L肌醇+0.2mg/L维生素B1+1mg/L维生素B6+1mg/L烟酸+3%蔗糖+0.8%琼脂(pH5.8)+5mg/L6-BA为不定芽诱导培养基,暗培养7天后,转移至光/暗周期16/8h的条件下培养,不定芽的分化率高达91.1%;不定芽在1/2MS基本培养基+3%蔗糖+0.7%琼脂+1.5mg/LIBA+0.2%活性炭的生根培养基,生根率高达80%;以卡那霉素作选择剂时,选择浓度为50mg/L。

蒸馏法与溶剂萃取法提取金柚果皮精油成分的比较分析

采用蒸馏法和溶剂萃取法,提取梅州金柚(Citrus grandis Osbeck cv.)果皮精油,利用GC-MS联用技术测定其化学成分和质量分数,并对两种提取方法进行比较分析。蒸馏法和溶剂萃取法提取的柚皮精油经GC-MS分析,分别鉴定出15个和17个成分,分别占峰面积的99.01%和97.55%,两者共有成分有6个,主要成分均为柠檬烯,梅州金柚果皮可作为柠檬烯的重要资源。此外,溶剂萃取法提取的精油中,质量分数相对较高的9,12-四环辛二烯酸(0.62%)、蛇床子素(0.5%)和谷甾醇(0.5%),在有关金柚精油成分的研究中尚未见报道。其中蛇床子素有抗骨质疏松、抗病毒等药理活性,谷甾醇有降低血清胆固醇的作用。

琯溪蜜柚果实汁胞粒化过程中同工酶变化的研究

研究琯溪蜜柚果实粒化过程中过氧化物酶(POD)、超氧物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)同工酶的变化;通过授粉处理,以未授粉的自交果和授粉的杂交果的琯溪蜜柚果实汁胞为材料,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行同工酶测定;琯溪蜜柚果实粒化过程中汁胞粒化指数随着果实成熟而上升,自交果汁胞粒化指数大于杂交果;自交果汁胞中出现的POD同工酶酶谱共分离出4条,SOD同工酶酶谱分离了6条,CAT同工酶酶谱有3条,相应的杂交果汁胞POD同工酶出现2条谱带、SOD同工酶显示4条谱带,过氧化氢酶同工酶没有观察到谱带;与琯溪蜜柚汁胞粒化关系密切的同工酶为POD、SOD同工酶。

盐胁迫下琯溪蜜柚苗木生理生化特性的变化研究

水培试验研究了不同浓度盐胁迫下琯溪蜜柚苗木生理生化特性的变化。结果表明,盐胁迫下溪蜜柚苗木根系活力、叶片相对含水量(RWC)、叶片细胞汁液pH、光合色素含量及氨基酸含量降低,大分子渗漏值及丙二醛(MDA)含量增加,且它们之间均呈显著和极显著相关性。琯溪蜜柚植株根系活力及叶片MDA含量对盐胁迫较敏感,根系活力下降可能是柚植株受盐胁迫后最早的伤害反应。

柚园间种作物及施用不同有机肥对土壤与柚果的影响

柚树间种短期经济作物在提高柚园经济效益的同时,还可提高土壤的有机质和N、P、K养分质量分数,改善柚园小区气候,增加有机肥来源。间种物残余体作为绿肥,可显著地提高柚果产量和质量。

盐胁迫对坪山柚、福橘幼苗叶片蛋白质合成的影响

以坪山柚和福橘幼苗为材料,研究不同浓度NaC l胁迫8 d后叶片中可溶性蛋白质的变化.结果表明,盐胁迫下,坪山柚和福橘幼苗叶片中可溶性蛋白质含量增加并随NaC l浓度的增高而增至较高水平.相同浓度NaC l胁迫下,坪山柚叶片可溶性蛋白质含量增加幅度比福橘大,因此,可能是蛋白质的增加幅度而不是其绝对含量对坪山柚的耐盐性起作用.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱分析显示,盐胁迫后,分子质量为80、67、54、32、28、18、17和16 ku蛋白质不受影响而稳定表达.福橘叶片中80、67、32、28、21、18、17、16和15 ku蛋白质为稳定表达的蛋白质.当NaC l浓度≥40 mmol.L-1时,诱导坪山柚叶片新产生35和24 ku 2种蛋白质;当NaC l浓度≥80 mmol.L-1时,诱导福橘叶片新产生72、43和24 ku 3种蛋白质,且它们的活性均随盐胁迫强度的增大而增强.

沙田柚施用活化处理磷肥的效果研究

研究了以沙田柚施用经多种活化剂活化处理磷矿粉的效果，结果表明，施用活化处理磷矿粉的柚树在各生育期的树叶片养分状况均比施用过磷酸钙和钙镁磷肥的好，所以在各时期的农艺性状表现良好，产最较高，在适当时期补充中微量元素不仅可使沙田柚高产而且优质。研究结果显示，果树可直接和一年一次施用价格低廉价的磷矿粉，采用活化技术可使磷矿粉的肥效超过过磷酸钙和钙镁磷肥，从而可大幅度地降低果园的肥料和施肥用工费而降低生产成本，同时又可减少因施肥过量和磷肥生产而造成的浪费和环境污染。

柑橘和拟南芥RIN4基因的过表达载体构建及其对沙田柚的DNA转化

用逆转承-cDNA聚合酶链式扩增(RT-PCR)方法 ,分别从克里曼丁橘和拟南芥中克隆出RIN4基因,连接到表达载体pFGC5941,构建了柑橘CcRIN4和拟南芥AtRIN4基因的过表达载体,并成功转入EHA105农杆菌.通过农杆菌介导法将过表达载体转入沙田柚,获得柑橘和拟南芥RIN4基因的转基因沙田柚植株各6株.

长寿沙田柚无菌苗培育研究

通过无菌苗的培育,研究了长寿沙田柚苗期的发育生物学特征及培育的关键技术。重点研究了见光时间对苗期生长的影响,即在播种的第5d、6d、7d、8d和9d见光,分别比较了地下部分和地上部分30d内的生长情况,综合分析表明:第6d见光的苗子生长最好;对上述5个处理,分别在播种的第12d、15d、18d、21d、24d和27d进行移栽,通过移栽后生长势的观察比较,播种第18d、21d和24d移栽效果最好,且无显著差异。

盐对柚幼苗的胁迫效应分析

以坪山柚为材料,研究了盐对坪山柚幼苗的胁迫效应.结果表明:40mmol/LNaCl胁迫30 d,坪山柚幼苗受害症状轻,幼苗生长受影响小;80～200mmol/L NaCl胁迫30 d,随NaCl浓度提高,坪山柚幼苗受害症状逐渐加重,幼苗株高、叶面积、地上部干重和根部干重明显降低.不同浓度NaCl胁迫20 d,坪山柚幼苗根及地上部Na+,Cl-,甜菜碱质量分数增加,K+质量分数及K+/Na+质量比下降.NaCl胁迫影响坪山柚幼苗生长与Na+和Cl-大量积累有关.NaCl胁迫下,维持相对稳定的根与冠干重比、保持根K+与Na+质量比＞l及根部具有较高的甜菜碱含量,是坪山柚幼苗耐盐胁迫的一种适应.