Box-Behnken设计-响应面法优化小槐花中柠檬酚的超声辅助乙醇-硫酸铵双水相提取工艺

目的:优化小槐花中柠檬酚的超声辅助乙醇-硫酸铵双水相提取工艺。方法:以柠檬酚含量为评价指标,乙醇体积分数、固液比、硫酸铵加入量、超声时间、超声温度为考察因素,在单因素试验的基础上,使用Box-Behnken设计-响应面法优化小槐花中柠檬酚的提取工艺并进行验证。结果:小槐花中柠檬酚的最优提取工艺为乙醇体积分数95.35%,固液比1∶50.35(g/mL),硫酸铵加入量4.49 g,超声时间48.7 min,超声温度57.6℃。3次验证试验中,柠檬酚的含量分别为0.6378、0.6384、0.6254 mg/g,与预测值(0.6305 mg/g)相近。结论:优化的超声辅助乙醇-硫酸铵双水相提取工艺稳定、可行,可用于小槐花中柠檬酚的提取。

柠檬酚对人肝癌HepG_2细胞增殖的影响

为了探讨柠檬酚对人肝癌HepG_2细胞增殖的影响,本文利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞生长曲线以及细胞克隆形成实验检测了柠檬酚对细胞生长和克隆形成的影响,并应用HE、吖啶橙染色、流式细胞术以及激光扫描共聚焦显微镜分别观察和检测了不同浓度柠檬酚作用后细胞形态、细胞周期和细胞骨架蛋白F-actin的变化。结果显示,柠檬酚能明显抑制人HepG_2细胞生长,且呈浓度依赖性,其IC50值为79.14μmol/L,柠檬酚给药组细胞克隆率明显明显低于空白对照组;不同浓度的柠檬酚在作用HepG_2细胞24h后,细胞均出现了明显的皱缩、胞浆空泡化和细胞核固缩的形态学改变;同时,70μmol/L和80μmol/L的柠檬酚处理组G2/M期细胞比例显著高于对照组(22.72±1.07,28.68±1.36 vs 16.34±0.66,P<0.01);而共聚焦显微镜观察发现,柠檬酚能引起HepG_2细胞骨架蛋白F-actin的解聚和断裂。综上,推测柠檬酚可能是通过破坏细胞的Actin骨架,阻止细胞有丝分裂,细胞周期阻滞在G2/M期,从而抑制人肝癌HepG_2细胞的增殖。

柠檬酚对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和骨架相关蛋白表达的影响及其与蛋白作用方式研究

目的:研究柠檬酚对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及骨架相关蛋白表达的影响,并探讨其与骨架相关蛋白的相互作用方式。方法:采用CCK-8法检测不同浓度柠檬酚(12.5、25、50、100、200μmol/L)作用24 h后对HepG2细胞增殖的影响。将HepG2细胞分为阴性对照组和柠檬酚低、高浓度组(50、100μmol/L柠檬酚),加入相应药物作用24 h后,采用划痕试验检测细胞的迁移能力并计算细胞迁移率,采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blotting法检测细胞中聚合纤维状肌动蛋白(F-actin)、β-微管蛋白(β-tubulin)及埃兹蛋白(Ezrin)的mRNA和蛋白表达水平。利用分子对接软件Schrodinger 2015分析柠檬酚与上述3种蛋白的分子作用方式。结果:柠檬酚对HepG2细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖趋势。与阴性对照组比较,柠檬酚低、高浓度组细胞迁移率和F-actin、β-tubulin、Ezrin的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果显示,柠檬酚可与上述3种细胞骨架蛋白形成氢键和疏水键。结论:柠檬酚可抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移;其作用机制可能与下调F-actin、β-tubulin、Ezrin的m RNA及蛋白表达有关;其与骨架相关蛋白的作用方式可能是形成氢键或疏水键。