Functional remodeling of Ca^(2+)-activated Cl^-channel in pacing induced canine failing heart

To determine whether Ca2+ activated Cl-current (ICl（Ca）) contributes to the functional remodeling of the failing heart. Methods Whole cell patch-clamp recording technique was employed to record the ICl（Ca） in cardiac myocytes enzymatically isolated from rapidly pacing induced canine failing hearts at room temperature and compared that of the normal hearts （Nor）.Results The current density of DIDS （200M） sensitive ICl（Ca） induced by intracellular Ca2+ release trigged by L-type Ca2+ current (ICa,L) was significantly decreased in heart failare （HF） cells compared to Nor cells.At membrane voltage of 20mV,the ICl（Ca） density was 3.02±0. 54 pA/pF in Nor （n=6） vs.1.31±0.25 pA/pF in HF （n=8） cells,（P【0.01）,while the averaged ICa,L density did not show difference between two groups.The time constant of current decay of ICl（Ca） was similar in both types of cells.On the other hand,in intra cellular Ca2+ clamped mode,where the [Ca2+]i was maintained at 100nmol/L,ICl（Ca） density be increased significantly in HF cells when the membrane voltage at +30mV or higher.Conclusions Our results suggest that ICl（Ca） density was decreased in pacing induced failing heart but the channel function be enhanced.Impaired Ca2+ handing in HF cells rather than reduced ICl（Ca） channel function itself may have caused this abnormality.The ICl（Ca） density reduction might contribute to the prolongation of action potential in failing heart.The ICl（Ca） channel function up-regulation is likely to cause cardiac arrhythmia by inducing a delayed after depolarization,when Ca2+ overload occurred in diastolic failing heart cells.

植物中的氯、氯通道和耐氯性

本文介绍了氯(Cl)在自然界的存在形式,Cl与植物生长发育的关系及植物对Cl-的吸收和运输机制。概述了Cl-通道和Cl-通道蛋白(CLCs)的种类与特点。探讨了不同植物对Cl-亏缺、过量的不同响应及植物耐Cl-的可能生理和分子生物学机制。

血管平滑肌和内皮细胞Ca^(2+)内流机制及其与Cl^-通道的关系

血管平滑肌和内皮细胞的Ｃａ２＋内流机制不同，前者是兴奋性细胞，Ｃａ２＋内流通过电压依赖性（ＶＤＣ）和非电压依赖性Ｃａ２＋通道；后者是非兴奋性细胞，Ｃａ２＋内流主要通过非ＶＤＣ途径。Ｃｌ－通道参与了这两种细胞的Ｃａ２＋调控，平滑肌细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜去极化，促进ＶＤＣ开放，Ｃａ２＋内流增加；而内皮细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜超极化，使Ｃａ２＋进入细胞内的电化学趋势增加，胞外Ｃａ２＋经非ＶＤＣ途径内流增加。目前对血管平滑肌和内皮细胞Ｃｌ－通道的分型、特性和功能还不清楚。

氯通道阻断剂对α_1-肾上腺素受体亚型引起的Ca^(2+)内流的影响

目的探讨氯通道阻断剂在α１Ａ、α１Ｂ、α１Ｄ肾上腺素受体（ＡＲ）亚型触发的Ｃａ２＋内流中的作用。方法采用Ｆｕｒａ－２荧光探针双波长测定胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）。结果在３种亚型的细胞上，肾上腺素（Ａｄｒ）触发的Ｃａ２＋内流均不受ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ影响； ＳＫ＆Ｆ９６３６５可部分抑制α１Ａ、α１Ｂ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流，而对ａ１Ｄ－ＣＨＯ细胞无影响。在ＢＢ－ＣＨＯ细胞上，ｎｉｆｌｕｍｉｃ ａｃｉｄ（ＮＦＡ）和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ呈浓度依赖性抑制Ｃａ２＋内流；当Ｃａ２＋内流被ＳＫ＆Ｆ９６３６５最大限度抑制后，ＮＦＡ和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ可进一步抑制Ｃｄ２＋内流。α１Ａ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流可被ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ抑制，抑制率达 １４％ １５％。 ＮＦＡ可抑制ａ１Ｄ－ＡＲ引起的Ｃａ２＋内流，抑制率为３９％±９％。结论氯通道参与α１Ａ、α１Ｂ及α１Ｄ－ＡＲ引起的经非电压依赖性Ｃａ２＋通道介导的Ｃａ２＋内流，其间存有异同。ＮＦＡ敏感Ｃａ２＋内流及ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ敏感的Ｃａ２＋内流与ＳＫ＆Ｆ９６３６５敏感的Ｃａ２＋内流存在非同一性。

ATP触发牛主动脉内皮细胞Ca^(2+)内流与Cl^-通道和PKC的关系

目的 研究ATP触发牛主动脉内皮细胞Ca2 + 内流特性 ,Cl-通道阻断剂furosemide和PKC抑制剂staurosporine对其影响 ,阐明Cl-通道和PKC与ATP触发Ca2 + 内流的内在联系。方法 采用Fura 2荧光测定胞浆Ca2 + 变化技术 ,在培养的乳牛主动脉内皮细胞上观察药物对ATP触发Ca2 + 内流的影响。结果 ATP触发的Ca2 + 内流不受电压依赖性钙通道 (VDC)阻断剂nifedipine影响 ,但可被非VDC阻断剂SK&F 96 36 5 ,非选择性阻断Ca2 + 通道的金属离子NiSO4 和PKC抑制剂staurosporine抑制。furosemide (1 2 5～ 10 μmol·L-1)呈浓度依赖性抑制ATP触发的Ca2 + 内流 ,10 μmol·L-1可抑制 36 %± 14%。当staurosporine(10 0nmol·L-1)或SK&F 96 36 5 (15 μmol·L-1)分别对Ca2 + 内流最大程度抑制 34 %± 5 %和 6 4%± 11%后 ,furosemide可分别进一步抑制 7 6 %± 4%和 14%± 7%。结论 furosemide敏感的Ca2 + 内流与SK&F 96 36 5敏感的Ca2 + 内流存在非同一性。furosemide敏感的Cl-通道开放与PKC激活均参与了ATP触发的Ca2 + 内流 ,这两种因素与Ca2 + 内流之间存在内在联系。

TMEM16A在结肠癌组织中的表达及其意义

目的:探讨Ca2+激活的氯离子通道(Ca2+-activated Cl-channels,CaCC)蛋白TMEM16A在结肠癌中的表达和意义.方法:收集67例结肠癌标本,采用免疫组织化学SP法检测TMEM16A的表达,以癌旁结肠黏膜组织和6例结肠腺瘤组织作为对照,1例胃间质瘤组织作为阳性对照.结果:TMEM16A表达于结肠癌细胞胞膜和胞质内,在67例结肠癌中TMEM16A呈不同程度阳性表达,其中阴性占5.97%(4/67)、弱阳性占16.42%(11/67)、阳性占29.85%(20/67)、强阳性占47.76%(32/67);在癌旁结肠黏膜腺体内大多呈阴性和弱阳性表达,其中阴性占40.30%(27/67)、弱阳性占52.24%(35/67)、阳性占4.48%(3/67)、强阳性占2.99%(2/67);在6例结肠腺瘤中均呈阳性表达.将阴性和弱阳性表达分为阴性组,将阳性和强阳性表达分为阳性组进行分析,在67例结肠癌中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")占77.61%(52/67),而在相应的癌旁组织中TMEM16A表达的总阳性率("阳性"和"强阳性")仅占7.46%(5/67),两者之间差异显著(P<0.005).结论:TMEM16A可高表达于结肠癌组织,可作为结肠癌的分子诊断和靶向治疗的一个新的候选靶点.

基于盐逆境下植物CLC同源基因的发掘和功能解析的研究进展

植物盐害的阴离子毒害主要由Cl^-造成,盐逆境下植物体内Cl^-吸收、运输及其调控的分子机制已成为植物耐盐性研究不可忽视的重要方面,但有关Cl^-毒害问题相对Na^+毒害和适应的研究在过去较少受到关注。Cl^-通道(chloride channels,CLCs)是一类广泛分布于原核和真核生物细胞膜(主要是内膜系统),以介导Cl^-为代表的阴离子运输的重要转运蛋白家族。本文对目前已报道的包括拟南芥、大豆、水稻等多种植物的CLC同源基因及其编码蛋白进行了系统的生物信息学分析,并对植物CLC同源基因参与耐氯(盐)功能解析方面的研究进展进行了归纳,为今后进一步发掘和利用植物耐氯(盐)基因,全面揭示植物耐盐性的分子机制和最终寻求提高大豆、水稻等作物耐氯(盐)性的分子育种途径,指明可借鉴的研究方向。

Cl^-通道在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨Cl-通道在溶血磷脂酸(LPA)引起的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验,并结合激光共聚焦显微镜上测定细胞内Ca2+浓度等技术,研究不同Cl-通道阻断剂对LPA促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果Cl-通道阻断剂DIDS(二异硫氰酸二丙乙烯二磺酸,0.01~0.1mmol/L)可浓度依赖式的抑制溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖,其他Cl-通道阻断剂如5-硝基苯丙氨基苯甲酸(NPPB)、4乙酰氨基4异硫氰酸2,2二磺酸(SITS)、二苯丙氨基2,2二羧酸(DPC)(浓度均为10-7~10-3mol/L)和速尿(浓度均为10-5~10-3mol/L)等均无此作用,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结论溶血磷脂酸可以开放DIDS敏感的Cl-通道,且该通道可能在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起一定的作用。

硼替佐米对多发性骨髓瘤CLC-3表达的影响

目的:研究接受硼替佐米化疗的多发性骨髓瘤(MM)患者在化疗前后CLC-3蛋白表达的变化,探讨硼替佐米对MM患者CLC-3的影响及疗效的变化。方法:流式细胞技术分离12例初发、及复发难治的多发性骨髓瘤患者的浆(瘤)细胞,检测其CLC-3蛋白表达情况。然后所有观察病例均予以硼替佐米为主的化疗方案治疗至少4(4-6)个疗程,检测其CLC-3蛋白表达的水平,了解该指标与临床疗效的关系。结果:12例MM患者治疗前的CLC-3均存在高表达。经硼替佐米为主的化疗方案治疗后,其表达水平呈下降趋势。6例完全缓解(CR)及4例非常好的部分缓解(VGPR)的患者,CLC-3表达水平恢复接近正常。结论:硼替佐米可以对多发性骨髓瘤患者的CLC-3的表达情况产生影响,CLC-3表达水平与硼替佐米疗效呈负相关性。硼替佐米直接能否下调CLC-3水平,以及氯通道可否作为治疗该病的新靶点值得进一步研究。

呋塞米对α_1肾上腺素受体亚型引起的Ca^(2+)内流的影响

目的 探讨Cl-通道开放在不同α1肾上腺素受体亚型引起的Ca2 +内流中的作用。方法 采用Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 +浓度 ,观察Cl-通道阻断剂呋塞米 ,钙通道阻断剂SK&F96 36 5和硝苯地平对不同α1肾上腺素受体亚型 (α1A、α1B AR)引起的Ca2 +内流的影响 ,并加以比较。结果 2 5 ,5和 10 μmol·L-1呋塞米呈浓度依赖性地抑制了α1A和α1B AR亚型引起的Ca2 +内流 ;对α1A AR引起的Ca2 +内流的抑制率分别为 8 3 %± 6 1% ,2 3 8%±14 8%和 40 7%± 19 3% ,对α1B AR引起的Ca2 +内流的抑制率分别为 12 0 %± 5 4% ,19 2 %± 4 9%和 31 9%±4 9%。α1A AR引起的Ca2 +内流被最大抑制浓度 ( 2 0 μmol·L-1)的SK&F96 36 5抑制后 ,不能被 10 μmol·L-1呋塞米进一步抑制 ;而α1B AR引起的Ca2 +内流被 2 0 μmol·L-1SK&F96 36 5抑制后 ,仍能被 10 μmol·L-1呋塞米进一步抑制 ,抑制率为 6 6 %± 3 2 %。结论 参与α1A和α1B AR引起的Ca2

Cl^-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法 通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论 DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 +

大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯通道(ClCa)与细胞质钙的关系及意义。方法大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法。荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度([Ca2+]i);全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流(ICl(Ca));等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸(NFA)和Indaryloxyacetic acid(IAA-94)对大鼠肺动脉张力的影响。结果环匹阿尼酸(CPA)和苯福林(PE)均可引起[Ca2+]i升高;升高的[Ca2+]i可以引出ICl(Ca);NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩。结论生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的;细胞外Ca2+内流及细胞质内Ca2+释放均可激活该通道,其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩。

针刺家兔内关穴对快速型心律失常模型心肌细胞离子通道影响的研究

目的:通过观察针刺家兔内关穴对快速型心律失常模型心肌细胞离子通道的影响,从分子生物学水平探讨其治疗快速型心律失常的确切作用机制。方法:采用静脉注射盐酸肾上腺素的方法复制快速型心律失常家兔模型,将家兔随机分为5组:空白对照组、模型对照组、针刺预防组、针刺治疗组和生脉注射液组。运用电生理学、RT-PCR法及分光光度法等技术手段,观察针刺对快速型心律失常家兔模型心电时相变化和心肌细胞离子通道表达的影响。结果:针刺治疗组、生脉注射液组与模型对照组比较,快速型心律失常出现的时间及持续时间均缩短,心肌细胞离子通道表达增强,差异具有统计学意义;针刺治疗组与生脉注射液组相比,心律失常出现时间、持续时间及心肌细胞离子通道表达的差异均无统计学意义。结论:针刺内关穴可明显延缓家兔模型快速型心律失常出现的时间,缩短其恢复时间;针刺内关穴能够阻断快速型心律失常模型心肌细胞离子通道,这可能是其防治快速型心律失常的机制之一。

高血压大鼠主动脉平滑肌细胞Cl^-通道的改变

目的 探讨在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞Cl-通道的改变。方法 采用两肾两夹 (2kidney 2clip ,2K2C)肾血管性高血压大鼠 (renovascularhypertensiverats,RVHR)模型 ,在术后 1wk～ 12wk ,取大鼠胸主动脉平滑肌 ,做主动脉环张力实验 ,观察Cl-通道阻断剂DIDS(4,4 di isothiocyanato stilbene 2 ,2’disulphonate)和NPPB[5 nitro 2 (3 phenylpropy lamino)benzonicacid]对苯肾上腺素引起的主动脉平滑肌 (aorticvascularsmoothmuscle,AVSM )收缩反应的影响。结果 在术后 1wk和 4wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和 10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用与假手术组相比差异无显著性 ;在术后 8wk和 12wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用低于假手术组 ;随术后时间的延长 ,血压的升高 ,DIDS和NPPB对主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用逐渐降低。结论 在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞DIDS和NPPB敏感的Cl-通道的活性发生了改变 ,DIDS和NPPB敏感的Cl-通道与高血压病的发生和发展密切相关。

血管内皮细胞容量激活的氯通道

氯通道是血管内皮细胞上主要的离子通道，容量激活的氯通道是其中一种主要类型并广为研究。已经证实容量激活的氯通道在维持静息膜电位；调节细胞内钙、pH值，影响细胞增殖和分化中起着重要的作用。本文综述了血管内皮细胞容量激活氯通道的基本电生理及分子生物学特性，并初步探讨该通道的调节机制。

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2 .4mmol·L- 1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 。

Ca^(2+)激活Cl^-通道参与去甲肾上腺素诱发的大鼠尾动脉收缩反应

目的:观察Ca^(2+)激活Cl^-通道是否参与去甲肾上腺素(NE)诱发的大鼠尾动脉平滑肌收缩反应。方法:记录大鼠尾动脉肌条的等长收缩,观察不同药物对NE的收缩影响。结果:①硝呋咪酸(NFA)和维拉帕米(Vera)可显著抑制NE诱发的血管条收缩反应,且硝呋咪酸具有浓度依赖性。同时给予NFA及Vera时两者对NE诱发的血管条收缩的抑制作用相迭加;②用低氯缓冲液代替PSS液灌流标本以增强Cl-通道活性时,尾动脉条对NE的收缩反应明显增强,此反应仍可被NFA所抑制。结论:Ca2+激活的Cl-通道参与NE诱发的大鼠尾动脉平滑肌收缩反应。

Cl^-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨Cl-通道在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验 ,并结合fura 2荧光测定细胞浆Ca2 + 浓度等技术 ,研究了Cl-通道阻断剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果发现 ,Cl-通道阻断剂 4,4-二异硫氰酸二丙乙烯 2 ,2 -二磺酸 (DIDS ,0 .0 1μmol/L～ 0 .1mmol/L)可抑制 5 %小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其作用具有时效性和量效性 ,其它Cl-通道阻断剂如茚满羟基丙酸 (IAA 94,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、5 硝基 2 (3 苯丙氨基 )苯甲酸 (NPPB ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、4 乙酰氨基 4 异硫氰酸 2 ,2 二磺酸 (SITS ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)、二苯丙氨基 2 ,2 二羧酸 (DPC ,0 .1μmol/L～ 1mmol/L)和速尿 (10 μmol/L～ 1mmol/L)等均无此作用 ,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结果提示小牛血清可以开放DIDS敏感的Cl-通道 ,且该通道可能在小牛血清引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起着一定的作用。

背景氯离子通道研究进展

综述了目前了解得最为充分的一类电压门控氯通道———背景氯通道，内容涉及选择性、门控和药理学以及通道蛋白的克隆和分子结构．氯通道广泛存在于细胞膜和细胞器膜，作为“总管家”参与细胞ｐＨ，体积，静息膜电位和兴奋性等多种细胞过程的调节．由于种种原因，对氯通道的研究起步较晚．目前应用膜片钳和分子生物学技术对氯通道结构功能的研究已经成为一个热点．

小鼠心室肌细胞容积敏感性Cl^-电流的特性及调节(英文)

目的 :研究小鼠心室肌细胞容积敏感性 Cl- 电流的电生理学特性以及蛋白激酶 C (PKC)调节机制。方法 :膜片钳全细胞记录法记录分离的 C5 7BL / 6小鼠心室肌细胞低渗诱导的容积敏感性 Cl- 电流的变化。结果 :小鼠心室肌细胞存在典型的容积敏感性 Cl- 电流 ,其呈现外向整流性、高电位刺激下的时间依赖性失活、I- >Br- >Cl- 的可通透性和 Cl- 通道阻断剂 (DIDS)敏感的电生理学特性。而且 ,PKC激动剂 (PMA )明显有助于该电流的激活。结论 :小鼠心室肌细胞的容积敏感性和外向整流性的 Cl- 电流受到 PKC激动剂的正向调节。