枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50μg·mL-1LbGp最为明显,[Ca2+]i明显减少。枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。

依托咪酯对大脑皮质突触体钙离子通道亚型的作用

目的 研究依托咪酯对大鼠大脑皮质突触体上不同钙通道的作用 ,探讨其抑制突触体内钙离子浓度升高可能涉及的钙离子通道亚型。方法 利用SD大鼠新鲜分离的大脑皮质突触体为研究对象 ,以KCl作为化学刺激剂去极化 ,采用荧光分光光度法测定依托咪酯 10 0mmol/L单用或与钙通道阻断剂合用的情况下对KCl诱发的突触体内钙离子浓度升高的影响。结果 P/Q型钙通道约占突触体钙内流的 5 0 % ,N型钙通道约占 2 0 % ,而L型钙通道不影响KCl诱发的突触体内钙离子浓度的升高。P/Q型钙通道阻断剂ω agatoxinIVA在单用或及与加入依托咪酯 10 0 μmol/L合用后对钙内流抑制作用没有差异 ,而L或N型钙通道阻断剂在加入依托咪酯后抑制钙内流作用增加。结论 P、N型钙通道在神经末梢去极化后钙离子内流中起主要作用。依托咪酯抑制高浓度KCl刺激引起的突触体内钙离子浓度升高可能与阻断P型 (可能还包括Q型 )钙离子通道有关。

冷暴露和CL316243刺激小鼠脂肪组织内参基因的筛选

[目的]筛选冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中稳定表达的内参基因。[方法]8~9周龄C57BL/6J雄性小鼠分成4组:冷暴露组、常温对照组、CL316243组和生理盐水对照组。将冷暴露组和常温对照组分别置于4℃和常温饲养6 h;给予CL316243组7 d皮下注射CL316243(1 mg/kg/d),生理盐水对照组注射相同体积的生理盐水。荧光定量PCR检测棕色和白色脂肪中10个内参基因的mRNA水平,采用geNorm、Normfinder、Best Keeper和Delta-Ct四种方法来评估内参基因表达的稳定性。[结果]稳定性综合排名前4的内参基因是:冷暴露时棕色脂肪中为YWHAZ、36B4、PPIA和HPRT;白色脂肪中为HPRT、YWHAZ、B2M和TBP。CL316243刺激时棕色脂肪中为PPIA、HPRT、YWHAZ和β-actin;白色脂肪中为PPIA、HPRT、TBP和18S。冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中配对变异值V2/3均小于0.15。[结论]冷暴露和CL316243刺激时脂肪组织中最佳内参基因的数量均为2个。冷暴露时脂肪组织最佳内参基因组合为YWHAZ和HPRT,CL316243刺激时脂肪组织最佳内参基因组合为PPIA和HPRT。

依托咪酯对大鼠脑皮层突触体内钙动力学的影响

目的观察依托咪酯对KCl诱发大鼠大脑皮层突触体内[Ca2+]i的影响,探讨依托咪酯的麻醉机制。方法分离SD大鼠大脑皮层制备突触体,50 mmol/L KCl刺激突触体去极化,以Fura-2 为Ca2+指示剂,测定不同浓度依托咪酯不同给药方式对突触体内[Ca2+]i的影响。实验分两部分,第一部分:KCl刺激前分别加入0.4、4、40、100μmol/L依托咪酯(终浓度);第二部分:KCl刺激后即刻加入4、40μmol/L依托咪酯。每个浓度均进行6次实验,均设立人工脑脊液作为对照,测定依托咪酯对去极化突触体内[Ca2+]i峰值和平台值的抑制率。结果KCl刺激前加入依托咪酯对KCl诱发突触体内[Ca2+]i升高的抑制程度呈浓度依赖性;峰值抑制率分别为5%±3%,11%±6%,24%±10%和33% ±12%。KCl刺激后即刻加入依托咪酯40 μmol/L升高突触体内[Ca2+]i平台值(P<0.05)。结论依托咪酯改变KCl诱导大鼠大脑皮层突触体内钙动力学,其作用与突触前膜上电压敏感性[Ca2+]i通道和钙移除机制有关。