Clara细胞10 kD蛋白通过调控T细胞反应治疗小鼠变应性鼻炎研究

目的:探讨Clara细胞10 kD蛋白(CC10)对变应性鼻炎(AR)小鼠模型T细胞反应的作用。方法:卵清蛋白(OVA)免疫小鼠,建立AR模型,探讨CC10对AR的影响。最后1次鼻腔激发后评估小鼠鼻腔症状。收集鼻组织和鼻腔灌洗液(NLF),测定AR小鼠嗜酸性粒细胞、杯状细胞数及IL-5、IL-17、IL-10、TGF-β1、FOXP3水平。结果:激发期间给予CC10可显著减少AR小鼠搔鼻次数、嗜酸性粒细胞和杯状细胞数,降低IL-5、IL-17水平(P<0.05),但可增加IL-10、TGF-β1和FOXP3表达(P<0.05)。结论:CC10可通过调控T细胞反应减轻AR小鼠鼻腔炎症。

右美托咪定对行非体外循环冠状动脉旁路移植术患者肺损伤及血清白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α和克拉拉细胞蛋白16水平的影响

目的探讨右美托咪定(DEX)对非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)患者血清白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及克拉拉细胞蛋白16(CC16)水平的影响及DEX对肺的保护作用。方法采用随机数字表法将2016年8月至2018年9月于新乡医学院第一附属医院行OPCABG的112例冠状动脉性心脏病(CHD)患者分为观察组和对照组,每组56例。麻醉诱导前20 min,观察组患者静脉滴注DEX 1μg·kg^(-1),对照组患者静脉滴注等体积的生理盐水;第1支移植血管吻合结束后,观察组患者静脉滴注DEX 0.2~0.5μg·kg^(-1)·h^(-1)至手术结束,对照组患者静脉滴注等体积的生理盐水至手术结束。对2组患者麻醉诱导前30 min(T_(0))、气管插管后即刻(T_(1))、手术结束时(T_(2))、术后12 h(T_(3))、术后24 h(T_(4))、术后48 h(T_(5))时的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、脑电双频指数(BIS)、呼吸指数(RI)、氧合指数(OI)及血清IL-10、TNF-α、CC16水平进行比较;术前、术后48 h采用高分辨率计算机体层摄影术(HRCT)行胸部扫描,观察肺损伤情况;观察2组患者不良反应事件及术后吗啡使用情况。结果2组患者T_(0)时MAP、HR、BIS、RI及OI比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时MAP显著低于T_(0)时(P<0.05);对照组患者T_(1)、T_(4)、T_(5)时MAP显著高于T_(0)时,T_(2)、T_(3)时MAP显著低于T_(0)时(P<0.05);T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者MAP显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者T_(1)、T_(2)时HR显著低于T_(0)时(P<0.05),对照组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时HR显著高于T_(0)时(P<0.05);T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者HR显著低于对照组(P<0.05)。2组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)时BIS显著低于T_(0)时(P<0.05),T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时2组患者BIS比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时RI显著高于T_(0)时(P<0.05),观察组患者T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)时RI显著高于T_(0)时(P<0.05)。T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者RI显著低于对照组(P<0.05)。对照组患者T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时OI显著低于T_(0)时(P<0.05),观察组患者T_(2)、T_(3)、T_(4)时OI显著低于T_(0)时(P<0.05)。T_(1)时2组患者OI比较差异无统计学意义(P>0.05);T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者OI显著高于对照组(P<0.05)。术前2组患者肺部HRCT图像未见异常;术后48 h,观察组患者肺部HRCT图像可见轻微“毛玻璃”样改变,对照组患者可见较明显“毛玻璃”样改变,且伴实变影。T_(0)时2组患者血清IL-10、TNF-α、CC16水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。T_(0)~T_(5),2组患者血清IL-10水平整体呈升高趋势(F=36.759、5.725,P<0.05);T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者血清IL-10水平显著高于对照组(P<0.05)。观察组患者T_(4)时血清TNF-α水平显著高于T_(0)时(P<0.05),对照组患者T_(3)、T_(4)、T_(5)时血清TNF-α水平显著高于T_(0)时(P<0.05)。T_(0)、T_(1)时2组患者血清TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);T_(2)、T_(3)、T_(4)、T_(5)时,观察组患者血清TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。对照组患者T_(3)时血清CC16水平显著高于T_(0)时(P<0.05);T_(3)、T_(4)、T_(5)时观察组患者血清CC16水平显著低于对照组(P<0.05)。2组患者均未出现呼吸抑制、心动过缓、低血压等不良反应事件。对照组和观察组患者术后吗啡使用率分别为19.6%(11/56)、0.0%(0/56),观察组患者术后吗啡使用率显著低于对照组(χ^(2)=12.198,P<0.05)。结论DEX有利于维持行OPCABG患者的血流动力学稳定,抑制机体炎症反应,减轻肺损伤。

MMP-9和CC10在小鼠变应性鼻炎中的表达和相关性研究

目的研究MMP-9和CC10在小鼠变应性鼻炎中的表达和两者之间是否有相关性。方法用卵清蛋白来建立野生型小鼠和CC10基因敲除小鼠变应性鼻炎动物模型。分别用免疫组织化学、过碘酸-希夫染色、苏木素-伊红染色,检测小鼠鼻黏膜组织CC10和MPP9表达、杯状细胞、浸润的嗜酸性粒细胞。结果和对照组相比,MMP-9、嗜酸性粒细胞、杯状细胞,在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达明显升高,并且在CC10基因敲除小鼠中升高更加显著,均P<0.01。相反,而和对照小鼠相比,CC10在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达明显下降,P<0.01。MMP-9和CC10表达呈显著负相关,相关系数为-0.57,P<0.01。结论 MMP-9和CC10参与了小鼠变应性鼻炎的发病过程,而且CC10直接或者间接抑制了MMP-9的表达。

地塞米松对哮喘豚鼠模型肺匀浆CC10的影响

目的:观察腹腔内注射地塞米松对豚鼠支气管哮喘模型肺组织Clara细胞蛋白10(CC10)的影响。方法:以27只健康豚鼠为实验动物,随机分为3组:即正常组、哮喘组和地塞米松(DEX)组。用卵蛋白致敏、雾化建立豚鼠哮喘模型,用酶联免疫吸附试验检测肺匀浆CC10的含量并观察其在组间的含量变化。结果:哮喘组豚鼠肺匀浆中CC10含量明显低于正常对照组(P<0.05);经DEX预处理后,肺匀浆CC10水平较哮喘组明显升高(P<0.05)。结论:CC10参与了哮喘的发病,可能是其中一种重要的内源性抗炎保护因子;而糖皮质激素在哮喘中的抗炎作用可能是通过提高CC10在肺组织的含量而实现的。

CC10与小鼠心肌梗死后心肌纤维化的关系

目的探究克拉拉细胞10-kDa蛋白(CC10)与心肌梗死后心肌纤维化的关系。方法取6~8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠32只,随机分为模型组与假手术组,每组16只。模型组小鼠结扎冠状动脉左前降支,构建心肌梗死模型。检测小鼠心脏的CC10 mRNA、α-SMA mRNA表达及肺内的CC10 mRNA表达。观察小鼠心肌纤维化程度;分析CC10在组织层面和蛋白表达的变化;明确CC10在心脏梗死区定位的细胞类型;测定CC10 mRNA随心脏成纤维细胞增殖的表达变化。结果心肌梗死后,随着心肌纤维化加重,CC10在心脏与肺组织中的表达上升(P<0.05)。CC10的表达主要定位于心脏梗死区的成纤维细胞,且伴随成纤维细胞增殖,CC10的表达不断增加。结论伴随心肌纤维化程度加重,CC10在小鼠心肌梗死后的心脏与肺组织中表达上升。

Clara细胞10-KDa蛋白在小鼠细菌性慢性鼻-鼻窦炎模型中的表达

目的:观察Clara细胞10-KDa蛋白(CC10)在小鼠细菌性慢性鼻-鼻窦炎(BCRS)模型中的表达。方法:C57BL/6J小鼠用鼻腔阻塞加肺炎链球菌接种的方法建立BCRS模型。用RT-PCR、免疫组织化学、组织病理染色及图像分析方法检测小鼠鼻窦黏膜组织CC10 mRNA及蛋白水平表达、CC10阳性细胞数及鼻窦黏膜形态学参数。结果:BCRS模型组小鼠鼻窦黏膜固有层内多型核中性粒细胞(PMN)数、上皮下胶原纤维沉积、上皮厚度及杯状细胞数均较假手术对照组增多(均P<0.01);BCRS组小鼠鼻窦黏膜上皮CC10阳性细胞数、CC10 mRNA及蛋白表达均较假手术对照组减少(均P<0.01)。CC10阳性细胞数分别与黏膜固有层PMN数、固有层胶原纤维沉积、上皮杯状细胞数及上皮厚度呈显著负相关,相关系数分别为-0.734、-0.776、-0.841和-0.805,均P<0.01;CC10平均灰度值分别与黏膜固有层PMN数、固有层胶原纤维沉积、上皮杯状细胞数及上皮厚度呈显著正相关,相关系数分别为0.771、0.802、0.887和0.855,均P<0.01。结论:小鼠BCRS模型鼻窦黏膜中CC10表达下调。CC10作为一种内源性负调控蛋白可能参与慢性鼻-鼻窦炎的发病过程。

Clara细胞分泌蛋白10在5岁以下喘息儿童外周血中的表达

目的探讨外周血中Clara细胞分泌蛋白10(CC10)和血清总IgE浓度在5岁以下喘息儿童中的表达。方法随机选取5岁以下反复喘息患儿59例,分为有特应质高危因素的喘息Ⅰ组(n=33)和无特应质高危因素的喘息Ⅱ组(n=26),对照组为近期无感染疾病史的外科术前患儿(n=23)。采用固相夹心酶免疫吸附实验(ELISA)测定3组患儿外周血CC10与IgE水平。结果喘息Ⅰ组、Ⅱ组CC10水平(3.95±1.26,5.41±1.64 ng/mL)均低于对照组(8.72±2.23 ng/mL),差异有统计学意义(P<0.01);喘息Ⅰ组CC10水平低于喘息Ⅱ组(P<0.05)。喘息Ⅰ组IgE水平高于喘息Ⅱ组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),喘息Ⅱ组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。喘息Ⅰ组血清CC10与IgE呈负相关(r=-0.912,P﹤0.01)。结论外周血CC10水平在5岁以下患儿喘息发作期显著降低,有特应质高危因素的患儿降低更为明显,并与外周血IgE水平呈负相关。

地塞米松联合丙泊酚麻醉用于单肺通气患者临床评价

目的探讨地塞米松联合丙泊酚麻醉对单肺通气(OLV)患者缺血再灌注肺损伤、氧化应激水平及炎性因子水平的影响。方法选取江苏省扬州市第一人民医院2021年1月至2022年10月行麻醉术的OLV患者92例,按随机数字表法分为对照组(丙泊酚麻醉)和观察组(地塞米松联合丙泊酚麻醉),各46例。结果两组患者OLV、手术及机械通气时间比较无显著差异(P>0.05)。OLV后,两组患者的动脉血氧分压(PaO_(2))、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)显著低于OLV前,但观察组均显著高于对照组(P<0.05);动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、丙二醛(MDA)、血清Clara细胞分泌蛋白-16(CC16)及表面活性蛋白(SP-D)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素10(IL-10)水平均显著高于OLV前,但观察组均显著低于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患者并发症发生率相当(4.35%比10.87%,P>0.05)。结论地塞米松联合丙泊酚麻醉可减轻OLV患者的氧化应激反应,抑制炎性反应,减少肺损伤,且安全性良好。

Clara细胞分泌蛋白10基因G38A多态性与5岁以下喘息患儿的相关性

目的探讨5岁以下喘息患儿Clara细胞分泌蛋白10(CC10)基因G38A位点多态性与喘息发病机制的关系。方法随机选取于本院就诊的5岁以下反复喘息患儿120例,分为有特应质高危因素的喘息Ⅰ组(n=67)(湿疹45例,父母或父母一方有哮喘病史13例,变应性鼻炎5例,变应性皮炎4例)和无特应质高危因素的喘息Ⅱ组(n=53);对照组为本院外科近期无感染疾病史、择期进行手术的术前患儿(n=55)。采用PCR-限制性片段长度多态性分析对喘息组和对照组患儿CC10 G38A位点基因型频率和等位基因频率进行检测,比较3组间CC10 G38A位点基因型频率和等位基因频率。结果喘息Ⅰ组、喘息Ⅱ组和对照组3种基因型AA、GA、GG分布频率分别为20.9%、44.8%、34.3%,9.4%、32.1%、58.5%、9.1%、31.0%、60.0%;喘息Ⅰ组和喘息Ⅱ组CC10基因G38A位点基因型频率比较差异有统计学意义(P<0.05);喘息Ⅰ组和对照组CC10基因G38A位点基因型频率比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。喘息Ⅰ组、喘息Ⅱ组和对照组38A和38G等位基因频率分别为43.3%、56.7%,25.5%、74.5%,24.5%、75.5%;喘息Ⅰ组和喘息Ⅱ组、喘息Ⅰ组和对照组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论喘息患儿与哮喘存在相同的基因分布频率,发生哮喘的危险性高;对于CC10基因具有A等位基因的喘息患儿应密切关注。

采用TOPOTA克隆技术构建人CC10质粒并在BEAS-2B细胞中的表达

目的:采用TOPO TA克隆技术构建及鉴定人CC10基因表达载体,并在支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞中获得稳定表达,初步探讨CC10在呼吸道上皮细胞炎症反应中的作用。方法:提取人下鼻甲组织的总RNA,逆转录反应生成c DNA,再用PCR方法扩增出含人CC10编码区全长的DNA片段,将PCR产物直接连接到pc DNA3.1/V5-His TOPO TA载体中,转化至大肠杆菌后经筛选鉴定出CC10表达载体,用脂质体法将CC10质粒转染到BEAS-2B,细胞免疫荧光法检测CC10蛋白的表达。随后用促炎细胞因子IL-1β刺激转染空质粒和CC10质粒的BEAS-2B细胞,用实时定量RT-PCR和ELISA检测炎性趋化因子RANTES m RNA和蛋白的表达。结果:目的基因与TOPO TA载体在室温下5 min的连接反应效率91.7%,用酶切法鉴定质粒并测序,人CC10基因成功克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中,CC10蛋白在BEAS-2B细胞中无表达,但在体外转染CC10质粒后CC10蛋白表达明显增高。转染CC10质粒的BEAS-2B细胞可抑制IL-1β诱导的RANTES m RNA和蛋白的表达。结论:利用TOPO TA克隆技术可高效、快速的构建人CC10基因表达载体,并能够在BEAS-2B细胞中获得稳定表达,CC10蛋白在呼吸道上皮细胞中可发挥抗炎作用。

地塞米松对豚鼠哮喘模型Clara细胞的影响

目的观察糖皮质激素对豚鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型肺组织Clara细胞的影响。方法以29只健康豚鼠为实验动物,随机分为三组:正常对照组、过敏性哮喘组和地塞米松(DXM)预处理组。用卵白蛋白致敏、雾化建立豚鼠哮喘模型,用免疫组化的方法观察肺组织中Clara细胞,即Clara细胞蛋白10(CC10)阳性细胞及光镜下观察肺组织的病理学变化。结果过敏性哮喘组豚鼠,肺组织免疫组化CC10的表达较正常对照组和DXM预处理组减少,而且与正常对照组和DXM预处理比较,均有显著性差异(P<0.05)。讨论哮喘时肺组织中Clara细胞的数目减少,提示Clara细胞及CC10参与了哮喘的发病,它是其中一种重要的内源性的抗炎因子,糖皮质激素可增加CC10的表达,其抗炎作用可能部分是通过上调CC10在肺组织中的含量而实现的。