CCA＋SP-C＋细胞和CD133＋细胞在人肺腺癌组织分布的初步研究

目的:通过免疫荧光染色法鉴定人肺腺癌组织内是否存在CCA+SP-C+(DPCs)细胞和CD133+细胞,为后续开展人肺干细胞的相关研究提供实验基础。方法:取人肺腺癌组织及其癌旁组织,行冰冻切片后双重免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察是否存在DPCs和CD133+细胞。每例标本观察时镜下随机选择4~8个视野,计数100~200个肺细胞,对每百个细胞内DPCs的百分率进行分析。结果:在人肺腺癌组织中首次发现了DPCs,其数量明显多于相对应的癌旁组织(P<0.05),而CD133+细胞在人肺腺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中广泛分布,其数量在三者之间无统计学差异(P>0.05)。结论:本研究首次在人肺腺癌组织中发现了DPCs细胞,且癌旁组织内的DPCs明显多于癌组织;CD133+细胞在人肺组织的分布具有广泛性,单用CD133标记无法区分人肺腺癌干细胞和正常肺干细胞。本研究为后续进一步分离、纯化正常肺干细胞和肺癌干细胞的生物学特性提供了实验基础。

小鼠支气管肺泡干细胞的培养鉴定和分选

目的对正常成年小鼠肺内支气管肺泡干细胞（bronehoalveolar stem cell，BASC）进行克隆培养、鉴定和流式细胞仪分选。方法用胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织制备肺单细胞悬液，并经免疫磁珠分选Sca-1^＋细胞；胶原蛋白和小鼠Swiss-3T3成纤维细胞系包被培养板；无血清乳腺上皮细胞培养基培养Sca-1^＋细胞；双重免疫荧光染色Clara细胞抗原（CCA）和肺泡表面活性蛋白C（SP-C）鉴定BASC，并用流式细胞仪分选BASC。结果通过胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织，平均每只成年小鼠可得到有核细胞总数（1．6～1．8）×10^7；经磁珠分选后的Sca-1^＋细胞纯度明显高于未经分选的肺Sca-1^＋细胞[分别为（87．3±5．9）％、（9．6±1．8）％，P〈0．05]；在无血清乳腺上皮细胞培养基中Sca-1^＋细胞在第4天可形成BASC克隆和其他不表达CCA、SP-C的细胞克隆；流式细胞仪检测CD45^-CD31^-Sca-1^＋CD34^＋细胞占肺细胞总数的0．7％～1．1％，根据此分子标记能够分选出高纯度的BASC。结论通过胶原酶和分散酶联合消化，免疫磁珠分选的Sca-1^＋细胞在无血清乳腺上皮细胞培养基中能够形成非纯化的BASC克隆，而流式细胞仪可以分选出高纯度的BASC。