Clara细胞10-KDa蛋白在小鼠细菌性慢性鼻-鼻窦炎模型中的表达

目的:观察Clara细胞10-KDa蛋白(CC10)在小鼠细菌性慢性鼻-鼻窦炎(BCRS)模型中的表达。方法:C57BL/6J小鼠用鼻腔阻塞加肺炎链球菌接种的方法建立BCRS模型。用RT-PCR、免疫组织化学、组织病理染色及图像分析方法检测小鼠鼻窦黏膜组织CC10 mRNA及蛋白水平表达、CC10阳性细胞数及鼻窦黏膜形态学参数。结果:BCRS模型组小鼠鼻窦黏膜固有层内多型核中性粒细胞(PMN)数、上皮下胶原纤维沉积、上皮厚度及杯状细胞数均较假手术对照组增多(均P<0.01);BCRS组小鼠鼻窦黏膜上皮CC10阳性细胞数、CC10 mRNA及蛋白表达均较假手术对照组减少(均P<0.01)。CC10阳性细胞数分别与黏膜固有层PMN数、固有层胶原纤维沉积、上皮杯状细胞数及上皮厚度呈显著负相关,相关系数分别为-0.734、-0.776、-0.841和-0.805,均P<0.01;CC10平均灰度值分别与黏膜固有层PMN数、固有层胶原纤维沉积、上皮杯状细胞数及上皮厚度呈显著正相关,相关系数分别为0.771、0.802、0.887和0.855,均P<0.01。结论:小鼠BCRS模型鼻窦黏膜中CC10表达下调。CC10作为一种内源性负调控蛋白可能参与慢性鼻-鼻窦炎的发病过程。

Clara细胞10 kD蛋白通过调控T细胞反应治疗小鼠变应性鼻炎研究

目的:探讨Clara细胞10 kD蛋白(CC10)对变应性鼻炎(AR)小鼠模型T细胞反应的作用。方法:卵清蛋白(OVA)免疫小鼠,建立AR模型,探讨CC10对AR的影响。最后1次鼻腔激发后评估小鼠鼻腔症状。收集鼻组织和鼻腔灌洗液(NLF),测定AR小鼠嗜酸性粒细胞、杯状细胞数及IL-5、IL-17、IL-10、TGF-β1、FOXP3水平。结果:激发期间给予CC10可显著减少AR小鼠搔鼻次数、嗜酸性粒细胞和杯状细胞数,降低IL-5、IL-17水平(P<0.05),但可增加IL-10、TGF-β1和FOXP3表达(P<0.05)。结论:CC10可通过调控T细胞反应减轻AR小鼠鼻腔炎症。

Clara细胞蛋白10与哮喘豚鼠气道反应性的相关性研究

目的观察支气管哮喘（简称哮喘）豚鼠模型血清和肺匀浆Clara细胞蛋白10（CC10）含量变化，CC10与哮喘豚鼠气道反应性的相关性及糖皮质激素对豚鼠哮喘模型血清及肺组织CC10的影响．方法以27只健康豚鼠为实验动物，随机分为3组：正常对照组、过敏性哮喘组和地塞米松（DXM）预算处理组．用卵白蛋白（OVA）致敏，雾化建立豚鼠哮喘模型，用二道生理记录仪测定气道反应性，留取石肺下叶做苏木素伊红（HE）染色以观察哮喘豚鼠的肺组织病理改变，用酶联免疫吸附试验（ELISA）重复检测留取的血清及肺匀浆中的CC10含量2次，并观察该蛋白含量的变化以及其与气道反应性的相关性．

CC10在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的探讨Clara细胞分泌蛋白10-kDa(CC10)在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达。方法肺腺癌A549细胞进行传代培养72 h后,分别加入30、60、120、2404、80 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot及RT-PCR检测CC10蛋白及mRNA的表达。结果不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,并呈浓度依赖性。实验组细胞凋亡率和CC10基因表达率高于对照组,也呈浓度依赖性。结论CC10基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用。

外源性CC10基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探究外源性Clara细胞分泌蛋白10(CC10)的基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用RT-qPCR和Westernblotting检测人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2、Hep3B中CC10的内源表达水平;将HepG2细胞系分为pcDNA3.1组和pcDNA3.1-CC10组,用LipofectionTM分别转染pcDNA3.1空载体质粒和重组质粒pcDNA3.1-CC10。用CCK-8法、TUNEL法和Transwell小室实验分别检测两组细胞增殖、凋亡情况及迁移、侵袭能力。采用RT-qPCR和Westernblotting检测两组细胞中CC10和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达水平。结果与正常肝细胞LO2相比,CC10在肝癌细胞HepG2、Hep3B中呈明显低表达(P<0.05);转染pcDNA3.1-CC10后的HepG2细胞内CC10mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-CC10组细胞活力受到抑制,细胞活力以时间依赖性方式降低(P<0.05),细胞迁移和侵袭实验中的过膜细胞数均低于pcDNA3.1组(P<0.05),细胞凋亡率高于pcDNA3.1组(P<0.05)。同时,CyclinD1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论外源性CC10基因表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与下调CyclinD1表达有关。

MMP-9和CC10在小鼠变应性鼻炎中的表达和相关性研究

目的研究MMP-9和CC10在小鼠变应性鼻炎中的表达和两者之间是否有相关性。方法用卵清蛋白来建立野生型小鼠和CC10基因敲除小鼠变应性鼻炎动物模型。分别用免疫组织化学、过碘酸-希夫染色、苏木素-伊红染色,检测小鼠鼻黏膜组织CC10和MPP9表达、杯状细胞、浸润的嗜酸性粒细胞。结果和对照组相比,MMP-9、嗜酸性粒细胞、杯状细胞,在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达明显升高,并且在CC10基因敲除小鼠中升高更加显著,均P<0.01。相反,而和对照小鼠相比,CC10在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达明显下降,P<0.01。MMP-9和CC10表达呈显著负相关,相关系数为-0.57,P<0.01。结论 MMP-9和CC10参与了小鼠变应性鼻炎的发病过程,而且CC10直接或者间接抑制了MMP-9的表达。

Clara细胞分泌蛋白10在5岁以下喘息儿童外周血中的表达

目的探讨外周血中Clara细胞分泌蛋白10(CC10)和血清总IgE浓度在5岁以下喘息儿童中的表达。方法随机选取5岁以下反复喘息患儿59例,分为有特应质高危因素的喘息Ⅰ组(n=33)和无特应质高危因素的喘息Ⅱ组(n=26),对照组为近期无感染疾病史的外科术前患儿(n=23)。采用固相夹心酶免疫吸附实验(ELISA)测定3组患儿外周血CC10与IgE水平。结果喘息Ⅰ组、Ⅱ组CC10水平(3.95±1.26,5.41±1.64 ng/mL)均低于对照组(8.72±2.23 ng/mL),差异有统计学意义(P<0.01);喘息Ⅰ组CC10水平低于喘息Ⅱ组(P<0.05)。喘息Ⅰ组IgE水平高于喘息Ⅱ组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),喘息Ⅱ组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。喘息Ⅰ组血清CC10与IgE呈负相关(r=-0.912,P﹤0.01)。结论外周血CC10水平在5岁以下患儿喘息发作期显著降低,有特应质高危因素的患儿降低更为明显,并与外周血IgE水平呈负相关。

机械通气对大鼠肺组织中CC10表达的影响

目的探讨机械通气对大鼠肺组织中CC10蛋白表达的影响及CC10对肺炎症反应的影响。方法建立不同潮气量机械通气大鼠动物模型,分为对照组、小潮气量组和大潮气量组。通气4 h后采用Western blot法测定肺组织CC10蛋白含量,计算细支气管上皮Clara细胞百分率;酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆中TNF-α,MIP-2含量,对肺泡灌洗液行中性粒细胞计数。结果与对照组和小潮气量组相比,大潮气量组肺组织CC10表达降低,TNF-α、MIP-2升高,细支气管上皮Clara细胞百分率降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与对照组相比,小潮气量组上述指标无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大潮气量机械通气引起肺组织中抗炎因子CC10表达减少,炎症因子TNF-α、MIP-2表达增加,肺损伤加重。

Clara细胞分泌蛋白10基因G38A多态性与5岁以下喘息患儿的相关性

目的探讨5岁以下喘息患儿Clara细胞分泌蛋白10(CC10)基因G38A位点多态性与喘息发病机制的关系。方法随机选取于本院就诊的5岁以下反复喘息患儿120例,分为有特应质高危因素的喘息Ⅰ组(n=67)(湿疹45例,父母或父母一方有哮喘病史13例,变应性鼻炎5例,变应性皮炎4例)和无特应质高危因素的喘息Ⅱ组(n=53);对照组为本院外科近期无感染疾病史、择期进行手术的术前患儿(n=55)。采用PCR-限制性片段长度多态性分析对喘息组和对照组患儿CC10 G38A位点基因型频率和等位基因频率进行检测,比较3组间CC10 G38A位点基因型频率和等位基因频率。结果喘息Ⅰ组、喘息Ⅱ组和对照组3种基因型AA、GA、GG分布频率分别为20.9%、44.8%、34.3%,9.4%、32.1%、58.5%、9.1%、31.0%、60.0%;喘息Ⅰ组和喘息Ⅱ组CC10基因G38A位点基因型频率比较差异有统计学意义(P<0.05);喘息Ⅰ组和对照组CC10基因G38A位点基因型频率比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。喘息Ⅰ组、喘息Ⅱ组和对照组38A和38G等位基因频率分别为43.3%、56.7%,25.5%、74.5%,24.5%、75.5%;喘息Ⅰ组和喘息Ⅱ组、喘息Ⅰ组和对照组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论喘息患儿与哮喘存在相同的基因分布频率,发生哮喘的危险性高;对于CC10基因具有A等位基因的喘息患儿应密切关注。

rhCC10对大鼠烟雾吸入性肺损伤的作用研究

目的研究重组人Club细胞10-kDa蛋白(rhCC10)对大鼠烟雾吸入性肺损伤的作用。方法156只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(sham组,n=6)、烟雾损伤组(SII组,烟雾吸入30 min,n=50)以及烟雾+rhCC10干预组[SII+rhC2组(烟雾+2 mg/kg的rhCC10)、SII+rhC10组(烟雾+10 mg/kg的rhCC10),n=50]。首先观察各组大鼠24 h存活情况,并在24 h每组随机选取6只大鼠腹主动脉血气分析后安乐死,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织;然后采用生化与免疫检测分析大鼠血浆、BALF及肺组织中炎症相关因子,评估BALF中蛋白渗出情况;最后通过病理学检查肺组织病理学改变。实验28 d将剩余实验大鼠安乐死,取肺组织行病理学分析。结果SII组大鼠24 h存活率为36%;SII+rhC10组存活率74%高于SII+rhC2组(62%),也高于SII组(P均<0.05);SII组血浆炎性因子和BALF中蛋白含量、炎性细胞、炎性因子水平以及肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、高迁移率族蛋白B1(Highmobilitygroupboxl,HMGB1)蛋白表达均显著高于sham组(P均<0.05);与SII组比较,SII+rhC2、SII+rhC10组血浆炎性因子以及BALF中蛋白含量、炎性细胞、炎性因子水平均有不同程度降低(P均<0.05),其中SII+rhC2、SII+rhC10组在白细胞计数、HMGB1和BALF中蛋白水平的差异有统计学意义(P均<0.05);实验24 h SII组肺组织可见弥漫性炎性细胞浸润,肺泡内出血及大量水肿液,肺空泡腔面积较sham组显著减少(P<0.05);与SII组比较,SII+rhC2、SII+rhC10组肺炎性浸润减轻,肺空泡腔面积显著下降(P均<0.05);实验28 d SII组肺组织可见中重度肺纤维化,肺空泡腔面积较sham组明显减少(P<0.05);与SII组比较,SII+rhC2、SII+rhC10组肺纤维化减轻,肺空泡腔面积显著下降(P均<0.05);结论rhCC10可以显著提高烟雾吸入肺损伤大鼠的存活率,减轻肺部及全身炎症反应,改善肺部纤维化水平;且10 mg/kg组rhCC10效果优于2 mg/kg组。

地塞米松对哮喘豚鼠模型肺匀浆CC10的影响

目的:观察腹腔内注射地塞米松对豚鼠支气管哮喘模型肺组织Clara细胞蛋白10(CC10)的影响。方法:以27只健康豚鼠为实验动物,随机分为3组:即正常组、哮喘组和地塞米松(DEX)组。用卵蛋白致敏、雾化建立豚鼠哮喘模型,用酶联免疫吸附试验检测肺匀浆CC10的含量并观察其在组间的含量变化。结果:哮喘组豚鼠肺匀浆中CC10含量明显低于正常对照组(P<0.05);经DEX预处理后,肺匀浆CC10水平较哮喘组明显升高(P<0.05)。结论:CC10参与了哮喘的发病,可能是其中一种重要的内源性抗炎保护因子;而糖皮质激素在哮喘中的抗炎作用可能是通过提高CC10在肺组织的含量而实现的。

CC10与小鼠心肌梗死后心肌纤维化的关系

目的探究克拉拉细胞10-kDa蛋白(CC10)与心肌梗死后心肌纤维化的关系。方法取6~8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠32只,随机分为模型组与假手术组,每组16只。模型组小鼠结扎冠状动脉左前降支,构建心肌梗死模型。检测小鼠心脏的CC10 mRNA、α-SMA mRNA表达及肺内的CC10 mRNA表达。观察小鼠心肌纤维化程度;分析CC10在组织层面和蛋白表达的变化;明确CC10在心脏梗死区定位的细胞类型;测定CC10 mRNA随心脏成纤维细胞增殖的表达变化。结果心肌梗死后,随着心肌纤维化加重,CC10在心脏与肺组织中的表达上升(P<0.05)。CC10的表达主要定位于心脏梗死区的成纤维细胞,且伴随成纤维细胞增殖,CC10的表达不断增加。结论伴随心肌纤维化程度加重,CC10在小鼠心肌梗死后的心脏与肺组织中表达上升。

子宫珠蛋白与炎症控制

子宫珠蛋白（UG）是一种进化保守的分泌型蛋白，它的结构已为人们所知，现在其生理功能吸引了大批学者研究。大量研究集中在对其抗炎症和免疫调节方面的功能上。UG具有抗趋化、抗变应性、抗肿瘤生成，并可刺激胚胎生长，是一种多功能蛋白质。

地塞米松联合丙泊酚麻醉用于单肺通气患者临床评价

目的探讨地塞米松联合丙泊酚麻醉对单肺通气(OLV)患者缺血再灌注肺损伤、氧化应激水平及炎性因子水平的影响。方法选取江苏省扬州市第一人民医院2021年1月至2022年10月行麻醉术的OLV患者92例,按随机数字表法分为对照组(丙泊酚麻醉)和观察组(地塞米松联合丙泊酚麻醉),各46例。结果两组患者OLV、手术及机械通气时间比较无显著差异(P>0.05)。OLV后,两组患者的动脉血氧分压(PaO_(2))、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)显著低于OLV前,但观察组均显著高于对照组(P<0.05);动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、丙二醛(MDA)、血清Clara细胞分泌蛋白-16(CC16)及表面活性蛋白(SP-D)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素10(IL-10)水平均显著高于OLV前,但观察组均显著低于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患者并发症发生率相当(4.35%比10.87%,P>0.05)。结论地塞米松联合丙泊酚麻醉可减轻OLV患者的氧化应激反应,抑制炎性反应,减少肺损伤,且安全性良好。

采用TOPOTA克隆技术构建人CC10质粒并在BEAS-2B细胞中的表达

目的:采用TOPO TA克隆技术构建及鉴定人CC10基因表达载体,并在支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞中获得稳定表达,初步探讨CC10在呼吸道上皮细胞炎症反应中的作用。方法:提取人下鼻甲组织的总RNA,逆转录反应生成c DNA,再用PCR方法扩增出含人CC10编码区全长的DNA片段,将PCR产物直接连接到pc DNA3.1/V5-His TOPO TA载体中,转化至大肠杆菌后经筛选鉴定出CC10表达载体,用脂质体法将CC10质粒转染到BEAS-2B,细胞免疫荧光法检测CC10蛋白的表达。随后用促炎细胞因子IL-1β刺激转染空质粒和CC10质粒的BEAS-2B细胞,用实时定量RT-PCR和ELISA检测炎性趋化因子RANTES m RNA和蛋白的表达。结果:目的基因与TOPO TA载体在室温下5 min的连接反应效率91.7%,用酶切法鉴定质粒并测序,人CC10基因成功克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中,CC10蛋白在BEAS-2B细胞中无表达,但在体外转染CC10质粒后CC10蛋白表达明显增高。转染CC10质粒的BEAS-2B细胞可抑制IL-1β诱导的RANTES m RNA和蛋白的表达。结论:利用TOPO TA克隆技术可高效、快速的构建人CC10基因表达载体,并能够在BEAS-2B细胞中获得稳定表达,CC10蛋白在呼吸道上皮细胞中可发挥抗炎作用。

地塞米松对豚鼠哮喘模型Clara细胞的影响

目的观察糖皮质激素对豚鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型肺组织Clara细胞的影响。方法以29只健康豚鼠为实验动物,随机分为三组:正常对照组、过敏性哮喘组和地塞米松(DXM)预处理组。用卵白蛋白致敏、雾化建立豚鼠哮喘模型,用免疫组化的方法观察肺组织中Clara细胞,即Clara细胞蛋白10(CC10)阳性细胞及光镜下观察肺组织的病理学变化。结果过敏性哮喘组豚鼠,肺组织免疫组化CC10的表达较正常对照组和DXM预处理组减少,而且与正常对照组和DXM预处理比较,均有显著性差异(P<0.05)。讨论哮喘时肺组织中Clara细胞的数目减少,提示Clara细胞及CC10参与了哮喘的发病,它是其中一种重要的内源性的抗炎因子,糖皮质激素可增加CC10的表达,其抗炎作用可能部分是通过上调CC10在肺组织中的含量而实现的。

益生菌联合沙美特罗替卡松治疗支气管哮喘的临床效果

目的分析益生菌联合沙美特罗替卡松对支气管哮喘的临床治疗效果,并分析其对患儿干扰素γ诱导蛋白10(IP-10)和Clara细胞蛋白16(CC16)水平的影响。方法选取2020年5月—2021年12月在银川市妇幼保健院治疗的110例支气管哮喘患儿为研究对象,随机分为吸入组(55例)和益生菌组(55例),吸入组患儿采用沙美特罗替卡松粉吸入剂治疗,益生菌组患儿在吸入组的基础上使用益生菌联合治疗。比较两组患儿免疫功能、炎症细胞因子水平、IP-10、CC16、肺功能、症状消失时间及临床疗效的差异。结果治疗前,吸入组和益生菌组患儿免疫功能指标水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,吸入组和益生菌组患儿CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)表达水平均升高,且益生菌组患儿CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)表达水平均高于吸入组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,吸入组和益生菌组患儿炎症细胞因子水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,吸入组和益生菌组患儿IFN-γ表达水平高于治疗前,IL-4、TNF-α表达水平低于治疗前,且益生菌组患儿IFN-γ表达水平高于吸入组,IL-4、TNF-α表达水平均低于吸入组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前,吸入组和益生菌组患儿IP-10和CC16水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,吸入组和益生菌组患儿IP-10表达水平降低、CC16表达水平升高,且益生菌组IP-10表达水平[(36.74±4.35)pg/ml]低于吸入组[(40.21±5.22)pg/ml],CC16表达水平[(18.47±2.83)ng/ml]高于吸入组[(11.65±2.27)ng/ml],差异均有统计学意义(t=3.787、13.940,均P<0.05)。治疗前,吸入组和益生菌组患儿肺功能比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,吸入组和益生菌组患儿FEV_(1)、FEV_(1)/FVC及PEF表达水平高于治疗前,且益生菌组患儿FEV_(1)、FEV_(1)/FVC及PEF表达水平高于吸入组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。益生菌组患儿肺部哮鸣音消失时间、喘憋消失时间[(5.14±0.62)d、(4.22±0.51)d]均低于吸入组[(7.65±0.83)d、(6.47±0.72)d],差异均有统计学意义(t=17.970、18.910,均P<0.05)。益生菌组患儿治疗总有效率(94.55%)高于吸入组(81.82%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.274,P<0.05)。结论益生菌、沙美特罗替卡松联合使用可使支气管哮喘患儿免疫功能得到改善,并可提高患儿肺功能,改善患儿IP-10、CC16表达水平,促使患儿恢复。