HIV-1 Tat对小鼠脑微血管紧密连接蛋白claudin 5及Aβ转运蛋白的作用研究

目的:探讨HIV-1反式转录激活因子(HIV-1 Tat)诱导小鼠脑微血管紧密连接蛋白整合膜蛋白5(claudin 5)及β淀粉样蛋白(Aβ)转运蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达变化及其相互关系。方法:将18只8周龄C57BL/6小鼠随机分成对照组和HIV-1 Tat组,每组9只。对照组静脉注射100μL生理盐水;HIV-1 Tat组静脉注射HIV-1 Tat(100μg/kg)100μL。组织匀浆法测定脑内伊文思蓝(EB)的泄漏量,行蛋白免疫印迹法(WB)及实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测小鼠脑微血管claudin 5、LRP-1和RAGE蛋白及mRNA表达。结果:与对照组相比,HIV-1 Tat组小鼠脑EB泄漏量显著增加(P<0.05);小鼠脑微血管claudin 5、LRP-1蛋白和mRNA水平显著下调(P<0.05),RAGE蛋白和mRNA水平上调(P<0.05);claudin 5与LRP-1蛋白水平呈正相关关系(r=0.886,P<0.05),而与RAGE蛋白水平呈负相关关系(r=-0.943,P<0.05)。结论:HIV-1 Tat通过下调claudin 5表达增加BBB通透性,而通过下调LRP-1表达减少Aβ从脑内向血液中转运及上调RAGE表达增加Aβ脑内转运。

尼罗罗非鱼claudin-5基因克隆及其在无乳链球菌胁迫下的表达分析

【目的】克隆尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)紧密连接蛋白5(claudin-5)基因,分析其在无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)刺激下的表达模式,为进一步了解该基因功能提供依据。【方法】根据NCBI已公布的尼罗罗非鱼基因组预测序列(GenBank登录号:XM_005473513.4),选取其claudin-5基因的CDS区,设计claudin-5基因的克隆及实时荧光定量PCR引物。利用生物信息学对克隆得到的claudin-5进行理化性质和进化分析,采用qRT-PCR分析尼罗罗非鱼claudin-5在各组织中及无乳链球菌刺激下的表达模式。【结果】通过PCR克隆技术获得尼罗罗非鱼claudin-5基因全长序列,共651 bp,编码216个氨基酸;蛋白分子量约23 kD,理论等电点(pI)为8.53;具有4个跨膜结构域和3个蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点。尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼(O.aurea)的claudin-5氨基酸序列相似性高达97.55%;系统发育进化树结果也显示,二者claudin-5氨基酸序列聚为一支,表明二者具有较近的亲缘关系。尼罗罗非鱼claudin-5在脑部的表达量极高,是血细胞等组织的300倍左右,具有明显的组织特异性。经无乳链球菌刺激后,尼罗罗非鱼脑和头肾的claudin-5表达量在12 h时达到最高值,在24 h时有所下调,其中在脑部的表达量于48 h表达量最低,但仍高于0 h,而在头肾的表达量在48~96 h时出现明显上调后下降;肠中claudin-5表达量在无乳链球菌刺激后6~12 h时上升缓慢,在48 h时表达量大幅度上调,并达到最高值,之后在48~96 h时出现下调,但低于0 h;肝脏中claudin-5表达量在无乳链球菌刺激后出现明显下调,在24 h略有回升然后继续下调。【结论】尼罗罗非鱼claudin-5基因在脑组织的表达量极高,具有明显的组织特异性,其编码蛋白在宿主抵抗无乳链球菌入侵的过程中发挥重要作用,尤其是通过血脑屏障抵抗无乳链球菌,保护中枢神经系统。

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及Claudin-5表达的影响

目的研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后血脑屏障(BBB)通透性及紧密连接相关蛋白Claudin-5表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠脑I/R模型,采用伊文斯蓝(EB)法检测BBB的通透性,免疫组化、RT-PCR及Western blot测定缺血再灌注脑组织Claudin-5的表达。结果再灌注3 h和72 h组缺血侧脑组织EB含量均显著高于假手术组(P<0.05),川芎嗪治疗组缺血侧脑组织EB含量均显著低于同时间点再灌注组(P<0.05)。再灌注3 h和72 h缺血侧脑组织Claudin-5表达显著低于假手术组(P<0.05),川芎嗪治疗组缺血侧脑组织Claudin-5表达显著高于同时间点再灌注组对照组(P<0.05)。结论大鼠脑I/R后BBB损伤与Claudin-5表达下调密切相关,川芎嗪可能通过上调Claudin-5的表达恢复紧密连接的功能,降低I/R后BBB的通透性,从而减轻I/R后脑水肿。

阿替普酶对急性脑梗死大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的:探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法:建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿替普酶溶栓组,每组18只。透射电子显微镜下观察大鼠脑内皮细胞超微结构,荧光免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果:透射电子显微镜检测,模型组大鼠缺血区域脑体积明显增大,内皮细胞肿胀,部分皮质与周围脑组织界限明显,基膜厚薄均匀,紧密连接结构非常松散、出现断裂和消失;阿替普酶溶栓组大鼠脑梗死区域毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻,基膜厚薄不均匀改善,脑毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间大部分紧密连接结构断裂情况消失,无紧密连接结构消失。荧光免疫组织化学检测,与模型组比较,阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达有明显改善。Western blotting检测,与假手术组比较,模型组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平明显减少(P<0.01);与模型组比较,不同时间点阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平均升高(P<0.01)。结论:阿替普酶对急性脑梗死大鼠大脑内皮细胞的结构有改善作用,其作用机制可能与阿替普酶能降低大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平有关。

新葛根芩连汤对糖尿病脑病大鼠血脑屏障通透性及occludin/Claudins-5蛋白表达的影响

目的观察新葛根芩连汤对糖尿病脑病大鼠海马血脑屏障功能及occludin/Claudins-5蛋白表达的影响。方法以高脂饮食加链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病脑病模型,以新葛根芩连汤干预,8周后髂静脉注射Evans Blue观察血管神经屏障渗透状况,并检测紧密连接蛋白occludin/Claudins-5。结果模型组大鼠海马区Evans Blue外渗明显,药物治疗后中剂量组Evans Blue含量明显减低。模型组紧密连接蛋白occludin/Claudins-5表达均明显降低,治疗后表达明显增强。结论新葛根芩连汤可保护糖尿病脑病大鼠海马区血脑屏障,减少血脑屏障损害,机理可能与保护紧密连接蛋白occludin/Claudins-5有关。

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P<0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P<0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。

Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在胰腺实性-假乳头状瘤中的诊断价值

目的研究紧密连接蛋白Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在鉴别胰腺实性假乳头状瘤(SPTP)与胰腺神经内分泌性肿瘤(P-NET)中的意义。方法收集2006-01—2014-06间60例SPTP、48例P-NET病例,回顾性复习临床资料、病理组织学特点,应用免疫组织化学检测NSE、Cg A、Syn、CD56、β-catenin、E-cadherin(ECD)和Claudin-5的表达情况。结果 NSE、Cg A、Syn、CD56免疫标记物在这2组肿瘤中都有不同程度的表达,P-NET组的Cg A阳性率显著高于SPTP组(97.9%:0),Claudin-5在所有SPTP中细胞膜(+),而P-NET均(-);β-catenin在60例SPTP呈细胞核(+),表达率为100%(60/60),在P-NET中呈细胞膜、细胞质(+),其表达率12.5%(6/48);ECD在60例SPTP中细胞膜(-)(0/60),在P-NET中呈细胞膜(+)(48/48,100%)。结论检测Claudin-5、β-catenin和ECD的蛋白表达有助于鉴别胰腺实性假乳头状瘤和神经内分泌肿瘤。

急性缺血性脑卒中患者血清CKLF1、claudin-5预测溶栓后出血转化的价值及与短期预后的关系

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清趋化素样因子1(CKLF1)、claudin-5预测静脉溶栓后出血转化(HT)的价值及与短期预后的关系。方法选取2019年7月—2021年1月武汉市中医医院神经内科收治接受静脉溶栓的AIS患者321例为AIS组,根据是否发生HT分为HT亚组63例和非HT亚组258例。患者出院后3个月根据改良Rankin量表(mRS)评分再分为预后不良亚组88例和预后良好亚组233例,另选取医院同期体检健康志愿者60例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CKLF1、claudin-5水平,比较各组血清CKLF1、claudin-5水平。采用多因素Logistic回归分析AIS患者静脉溶栓后HT的影响因素;Spearman相关性分析AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CKLF1、claudin-5水平对AIS患者静脉溶栓后HT的预测价值。结果与健康对照组比较,AIS组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=11.953、11.069,P均<0.001)。AIS患者321例静脉溶栓后HT发生率为19.63%(63/321)。心源性栓塞、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分升高和血清CKLF1、claudin-5升高为AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素[OR(95%CI)=1.104(1.047~1.165)、4.377(2.011~9.526)、1.195(1.106~1.292)、1.039(1.024~1.052)]。AIS患者321例静脉溶栓后3个月预后不良发生率为27.41%(88/321)。与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=7.145、7.279,P均<0.001)。AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分呈正相关(rs=0.517、0.491,P均<0.001)。血清CKLF1、claudin-5水平单独及二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.772、0.876,二者联合预测的AUC大于CKLF1、claudin-5单独预测(Z=2.542、3.786,P均<0.001)。结论血清CKLF1、claudin-5水平升高是AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素,二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的价值较高,且血清CKLF1、claudin-5水平升高与AIS患者短期预后不良有关,有望成为AIS患者静脉溶栓后HT和短期预后的辅助评估指标。

大鼠脊髓损伤后紧密连接蛋白claudin-5的表达

目的检测大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)紧密连接蛋白claudin-5表达变化。方法 120只成年雄性SD大鼠随机分为空白组(60只)和损伤组(60只),损伤组参照改良Allen’s法[2]建立脊髓损伤动物模型。建模后不同时间点(6h、12h、1d、3d、5d、7d)各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性,取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果损伤组制模成功率81.7%;损伤组EB含量随时间变化逐渐升高,在损伤后第3天达峰值(0.9435±0.0813)μg/g,此后逐渐降低(P均<0.05),各时间点损伤组EB含量较空白组显著增高(P均<0.05);损伤组claudin-5 mRNA表达随时间变化逐渐减少,在损伤后第3天表达最低(2.871±0.527),此后逐渐升高(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5mRNA表达均较空白组显著降低(P均<0.05);损伤组claudin-5表达随时间变化逐渐减少,第3天达最低(0.072±0.008),之后逐渐增加(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5表达均较空白组显著降低(P均<0.05)。结论大鼠SCI后可能通过影响claudin-5的表达改变BSCB通透性,影响脊髓继发损伤的病理生理过程。

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后claudin-5和TNF-α表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接(tight junctions,TJ)蛋白claudin-5和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,伊文思蓝渗透性实验检测血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性,透射电镜观察脑微血管内皮细胞间TJ的状态,免疫组化法测定claudin-5的蛋白表达,ELISA法检测TNF-α的含量。结果 EPO能够显著降低脑缺血再灌注后BBB的通透性(P<0.01),恢复TJ完整性,显著上调缺血脑组织中claudin-5表达水平(P<0.01),显著降低TNF-α含量。结论 EPO通过降低脑缺血再灌注后脑组织中TNF-α含量,使claudin-5的表达增加,从而恢复TJ完整性,降低BBB通透性。

清开灵注射液对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧模型紧密连接蛋白claudin-5的影响

目的观察缺氧对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5表达的影响及清开灵的干预作用。方法体外培养Balb/c小鼠脑微血管内皮细胞,分为正常组、模型组和清开灵小中大剂量组,采用氧糖剥夺24h模拟缺血损伤,荧光定量PCR法检测Claudin-5mRNA的转录水平,western blot法检测蛋白表达。结果缺氧损伤后,Claudin-5mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,清开灵小、中、大各剂量组都有改善趋势,其中小、大剂量对基因转录水平提高明显,中剂量对蛋白表达的增强更显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论清开灵通过调节紧密连接蛋白claudin-5表达,改善血脑屏障通透性从而阻抑脑缺血反应过程。

二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的观察二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响,研究其对血脑屏障紧密连接是否具有保护作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及二氮嗪预处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色和Western blot检测各组大鼠ZO-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果 1.假手术组ZO-1、Claudin-5在血管上的染色连续、丰富,缺血再灌注组ZO-1、Claudin-5的染色稀少、断续,二氮嗪预处理组染色较缺血再灌注组有所改善;2.Western blot定量测定与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠脑组织中ZO-1和Claudin-5蛋白表达均明显下降(P<0.01),与缺血再灌注组相比,二氮嗪预处理组ZO-1和Claudin-5的蛋白表达明显增多(P<0.05)。结论二氮嗪对血脑屏障紧密连接具有保护作用,其机制可能与增加紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5的表达有关。

过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

[目的]探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响.[方法]体外原代培养人视网膜血管内皮细胞（hRVEC）.当接种至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融合时进行慢病毒介导的转染实验.hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组.荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率.Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平.CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性.待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻（TER）,异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性.[结果]慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60％,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加.CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER.[结论]过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路.

claudin-4和KLF-5在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨claudin-4与KLF-5在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者预后的临床意义。方法采用免疫组化方法检测142例胃癌组织标本中的claudin-4和KLF-5表达,卡方检验分析其在不同临床病理参数间的差异性,生存分析其对患者预后的影响。结果①肿瘤>2 cm、Ⅲ-IV、T3-T4的患者claudin-4表达阳性率更高;肿瘤>2 cm、有淋巴结转移、T3-T4的患者KLF-5表达阳性率更高(P<0.05);②claudin-4与KLF-5蛋白表达呈正相关关系,有统计学意义(χ2=62.259,P=0.000,r=0.662);③claudin-4、KLF-5阴性表达组平均生存时间明显长于阳性表达组(P<0.05);浸润深度、淋巴结转移、临床分期、claudin-4及KLF-5表达是胃癌5年生存率的独立危险因素。结论 claudin-4与KLF-5的阳性表达与更严重的胃癌病理过程有关;可能直接或者通过调控信号转导刺激了胃癌细胞的浸润。

胰腺实性-假乳头状肿瘤和神经内分泌肿瘤中Claudin5和Claudin7的表达及意义

目的探讨Claudin5和Claudin7在胰腺实性-假乳头状肿瘤(solid-pseudopapillary neoplasm,SPN)、神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumor,NET)中的表达及意义。方法采用免疫组化En Vision法检测20例SPN和23例NET中β-catenin、CD10、CK、vimentin、CD99、NSE、Syn、PR、Claudin5和Claudin7的表达。结果 (1)在SPN和NET中β-catenin、CD10、CK、vimentin、CD99、NSE、Syn、PR呈不同程度阳性表达。其中,β-catenin和CD10在SPN和NET中的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),β-catenin诊断SPN的敏感性为90.0%,特异性为52.2%;CD10诊断SPN的敏感性为80.0%,特异性为69.6%。其余6种标志物差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Claudin5在SPN中的阳性率为100%(20/20),明显高于NET(13.0%,3/23),差异有统计学意义(P<0.05);其诊断SPN的特异性(100%)和敏感性(87.0%)均高于β-catenin和CD10。(3)Claudin7在胰腺NET中的阳性率为100%(23/23),而在所有SPN中均不表达;其诊断NET的特异性和敏感性均为100%。结论 Claudin5和Claudin7分别在SPN和NET中呈肿瘤细胞胞膜阳性表达模式,是两者的免疫组化特征。联合检测Claudin5、β-catenin、CD10和Claudin7有助于诊断和鉴别诊断SPN和NET。

大鼠创伤性脑损伤后Claudin-5表达水平变化的研究

目的:探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时间点血脑屏障通透性及Claudin-5表达水平的变化,为进一步研究创伤后脑水肿的机制及治疗时机提供理论依据。方法:大鼠随机分为对照组和脑损伤组,参照Feeney's的自由落体致伤法,制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文兰(evansblue)法测定伤后不同时间点损伤灶皮层脑组织中EB含量;应用Westernblot法检测损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平。结果:损伤灶皮层中EB含量在伤后1～6h明显增多,高峰期在3h。Westernblot结果显示损伤后1～6h,Claudin-5表达水平较对照组显著降低(P<0.05),3h最明显,24h与对照组差异无统计学意义。结论:大鼠顶叶局部脑挫裂伤可能通过下调紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平,开放紧密连接,增加血脑屏障的通透性。

紧密连接蛋白claudin-10基因5′调控区序列的生物信息学分析

目的:研究紧密连接蛋白对claudin-10基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural NetworkPromoter Prediction、PROMOTERSCAN和PROMOTER2.0分析claudin-10基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpGIsland Searcher分析claudin-10基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-10基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:claudin-10基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box和3个GC-box,没有TATA-box;claudin-10基因可能存在4个启动子位点;CpG岛为444bp区间(1700bp-2143bp)或834bp区间(1367bp-2200bp);评分在85分以上时,该区域具有159个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上时,该区域具有48个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上时,该区域具有9个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于claudin-10基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义,但最终的结论还需要实验来证实。

水蛭素对大鼠脑出血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的作用

目的:研究水蛭素对脑出血后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的影响。方法:采用自体动脉血注入法制作大鼠脑出血模型,伊文思蓝法检测BBB通透性,Western blot法检测claudin-5的表达。结果:脑出血模型组及水蛭素组BBB通透性于出血后明显增加(P<0.01),同时水蛭素组BBB通透性低于脑出血模型组(P<0.01);claudin-5的表达在脑出血模型组和水蛭素组于出血后明显减少(P<0.01),水蛭素组的表达明显高于脑出血模型组(P<0.01)。结论:调节紧密连接相关蛋白claudin-5的表达,进而调节BBB的通透性可能是水蛭素抑制脑水肿形成的途径之一。

紧密连接蛋白Claudin-15基因5′调控区序列的生物信息学分析

目的:研究紧密连接蛋白Claudin-15基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对获得Claudin-15基因5′调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析Claudin-15基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpG Island Searcher分析Claudin-15基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析Claudin-15基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:Claudin-15基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box和1个GC-box,没有TATA-box;Caudin-15基因可能存在4个启动子位点;CpG岛为70bp区间(51～120bp)、77bp区间(312～388bp)、72bp区间(2 029～2 100bp)、204bp区间(1 745～1 948bp);结果显示评分在85分以上(Score Threshold:85.0)时,该区域具有470个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上(Score Threshold:90.0)时,该区域具有162个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上(Score Threshold:95.0)时,该区域具有59个潜在的转录因子结合位点;评分在100分(ScoreThreshold:99.0)时,该区域具有14个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于Claudin-15基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义。

14-3-3σ和Claudin-5在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测14-3-3σ和Claudin-5在50例结直肠癌组织中的表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果14-3-3σ在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为10%和58%,差异有统计学意义(P<0.001);Claudin-5在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为82%和68%,差异无统计学意义(P>0.05);结直肠癌组织中14-3-3σ与Claudin-5表达无明显相关(P>0.05)。14-3-3σ表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移(均P<0.05)有关,而与性别、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05);Claudin-5表达与淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05)。结论14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌中表达明显增高,这两种蛋白均与结直肠癌淋巴结转移关系密切。