具核梭杆菌来源的外膜囊泡对口腔上皮细胞闭合蛋白Claudin-4表达的影响

目的:探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.n)分泌的外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响。方法:厌氧条件下培养具核梭杆菌,透析法提取OMVs。采用Nanosight及透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)对提取的OMVs进行表征分析。OMVs以不同质量浓度(0~100μg/mL)刺激HOK 12 h,并以100μg/mL OMVs刺激HOK 6、12 h,采用实时转录PCR和蛋白质印迹法分析闭合蛋白Claudin-4在基因和蛋白水平的表达;倒置荧光显微镜观察HOK与OMVs共定位以及Claudin-4蛋白的定位分布。利用Transwell上室体外构建人口腔上皮屏障,采用跨膜电阻测量仪(EVOM2)检测屏障跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER),以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD-4)渗透率评估屏障通透性。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,OMVs刺激组HOK中Claudin-4在蛋白水平和基因水平表达均显著降低(P<0.05)。免疫荧光显示,细胞间Claudin-4的荧光连续性表达被破坏。与对照组相比,OMVs刺激可降低口腔上皮屏障的TER值(P<0.05),提高FD-4的透过率(P<0.05)。结论:具核梭杆菌来源的OMVs能通过抑制闭合蛋白Claudin-4表达,损伤口腔黏膜上皮的屏障功能。

Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67在三阴性乳腺癌患者中的表达变化

目的探讨三阴性乳腺癌患者紧密连接蛋白-4(Claudin-4)、叉头框蛋白C1(Foxc1)、p53、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)及细胞增殖核抗原(Ki-67)的表达变化。方法选取2019年1月至2022年1月秦皇岛市妇幼保健院的90例三阴性乳腺癌患者作为观察组,以及同期90例非三阴性乳腺癌患者作为对照组。比较两组患者组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率,观察组不同年龄、肿瘤分期、组织学分级及淋巴结转移情况患者上述指标的阳性率,采用Spearman相关性分析组织Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与临床病理参数的关系。结果观察组组织Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组中不同年龄及肿瘤分期患者的上述指标阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),不同组织学分级及淋巴结转移情况者的上述指标阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67与组织学分级及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌患者组织中Claudin-4、Foxc1、p53、EGFR、CK5/6及Ki-67呈高表达,且与组织学分级及淋巴结转移情况密切相关。

靶向调控Claudin-4基因表达介导DNA损伤修复增强膀胱癌细胞化疗敏感性的研究

目的探究靶向下调紧密连接蛋白4(Claudin-4)基因表达对膀胱癌细胞DNA损伤修复及其化疗敏感性的影响。方法采用si-Claudin-4及阴性对照(si-NC)转染人膀胱癌细胞系EJ下调Claudin-4的表达,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞Claudin-4的表达,以确定转染效果。不同浓度顺铂(DDP)处理转染后的EJ细胞,CCK-8法检测细胞存活率。将EJ细胞随机分为对照组、si-Claudin-4组、DDP组、DDP+si-Claudin-4组。经转染处理与DDP处理后,CCK-8法检测各组细胞存活率;平板克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力;细胞免疫荧光染色观察各组细胞内γ-H2AX焦点生成情况;单细胞凝胶电泳法检测各组细胞DNA损伤情况;Western blot检测各组细胞内γ-H2AX、Ku70、Ku80以及DNA-PKcs的蛋白表达水平。结果细胞转染后,si-Claudin-4组细胞内Claudin-4 mRNA和蛋白相对表达量均显著低于对照组和si-NC组(P<0.05)。经不同浓度DDP处理后,si-Claudin-4组EJ细胞存活率显著低于对照组和si-NC组(P<0.05)。与对照组比较,si-Claudin-4组和DDP组细胞存活率显著下降,细胞克隆形成数目显著减少,细胞内γ-H2AX焦点形成显著增加,细胞出现典型拖尾形状,彗星尾长和尾部DNA比例均显著增加,γ-H2AX蛋白相对表达量显著上调,Ku70、Ku80及DNA-PKcs的蛋白相对表达量显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与DDP组比较,DDP+si-Claudin-4组细胞存活率显著下降,细胞克隆形成数目显著减少,细胞内γ-H2AX焦点形成显著增加,细胞拖尾现象更加明显,细胞彗星尾长和尾部DNA比例均进一步增加,同时,γ-H2AX蛋白相对表达量显著上调,且Ku70、Ku80、DNA-PKcs的蛋白相对表达量均显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论在膀胱癌细胞系EJ中靶向下调Claudin-4基因表达,能够增强肿瘤细胞对DDP的敏感性,该作用可能是通过抑制DNA损伤修复能力实现的。

联合检测P504s和Claudin-4在前列腺癌中的表达及其在预后评估中的价值

目的通过联合检测α-甲酰基辅酶A消旋酶(P504s)和紧密连接蛋白-4(Claudin-4)在不同危险因素等级前列腺癌中的表达,探讨P504s和Claudin-4表达在前列腺癌预后评估中的价值。方法选取我院病理组织库2013年1月至2015年7月的前列腺手术或穿刺标本共154例,按照病理诊断分为前列腺癌组84例,年龄52~83(70.9±7.3)岁;前列腺增生组70例,年龄51~85(68.2±7.4)岁。对2组标本组织采用组织芯片技术,构建组织芯片,S-P法检测P504s和Claudin-4蛋白的表达,并与前列腺癌预后进行相关性对比分析。结果 P504s和Claudin-4蛋白在前列腺增生组织中的阳性表达率明显低于前列腺癌组织(P<0.01)。P504s蛋白在不同Gleason评分前列腺癌组间阳性表达率没有明显差异;在不同分期前列腺癌组间的阳性表达率亦未见明显差异。而Claudin-4蛋白在前列腺癌Gleason评分≤6分和≥7分的阳性表达率分别为60.98%和74.42%,两者间比较差异有统计学意义(P<0.05);在前列腺癌分期≤T2a期和≥T2b期的阳性表达率分别为55.26%和78.26%,两者间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 P504s和Claudin-4蛋白的异常表达可能与前列腺癌的发生和进展相关,Claudin-4在危险等级越高的前列腺癌中的表达越高,联合检测可进一步提高前列腺癌的检出并对预后进行评估。

claudin-4和KLF-5在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨claudin-4与KLF-5在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者预后的临床意义。方法采用免疫组化方法检测142例胃癌组织标本中的claudin-4和KLF-5表达,卡方检验分析其在不同临床病理参数间的差异性,生存分析其对患者预后的影响。结果①肿瘤>2 cm、Ⅲ-IV、T3-T4的患者claudin-4表达阳性率更高;肿瘤>2 cm、有淋巴结转移、T3-T4的患者KLF-5表达阳性率更高(P<0.05);②claudin-4与KLF-5蛋白表达呈正相关关系,有统计学意义(χ2=62.259,P=0.000,r=0.662);③claudin-4、KLF-5阴性表达组平均生存时间明显长于阳性表达组(P<0.05);浸润深度、淋巴结转移、临床分期、claudin-4及KLF-5表达是胃癌5年生存率的独立危险因素。结论 claudin-4与KLF-5的阳性表达与更严重的胃癌病理过程有关;可能直接或者通过调控信号转导刺激了胃癌细胞的浸润。

紧密连接蛋白claudin-4的研究进展

Claudin-4是构成细胞间紧密连接的重要蛋白分子,在维持细胞极性和紧密连接屏障功能方面起着重要作用。近年来的研究发现,PKC等信号分子参与了claudin-4表达的调节,而claudin-4的异常表达与恶性肿瘤及多种疾病的发生和发展有着密切关系。本文对claudin-4分子结构的研究进展及其在多种疾病发生和发展中作用进行综述。

RON及Claudin-4在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的研究RON(recepteur d’origine naetais)及Claudin-4在人膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell car-cinoma,TCCB)中的表达及临床意义,探讨两者在肿瘤中的作用。方法收集人正常膀胱移行上皮组织标本16例,膀胱移行细胞癌标本36例,按照病理分级、临床分期、性别、年龄、单发与多发、初发与复发进行分组,分别用Western blot和RT-PCR检测RON、Claudin-4蛋白和mRNA的表达,分析两者与TCCB的病理分级、临床分期、性别、年龄、单发与多发、初发与复发间的关系。结果①TCCB组中的RON表达水平明显高于正常膀胱移行上皮组织(P=0.000),TCCB组低级别与高级别、非肌层浸润(T1)与肌层浸润(T2～4)间表达差异有统计学意义(P=0.003,P=0.000),而在年龄、初发与复发、单发与多发组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。②TCCB组中的Claudin-4表达水平明显高于正常膀胱黏膜组织(P=0.003),TCCB组T1与T2～4间表达差异有统计学意义(P=0.018),而在低级别与高级别、年龄、初发与复发、单发与多发组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。③TCCB组RON与Claudin-4蛋白及基因表达水平均呈增高趋势,且两者呈正相关(r=0.560,P<0.05)。结论 TCCB组中RON与Claudin-4蛋白及基因表达上调提示两者在TCCB的发展和浸润中起促进作用,且RON与Claudin-4在TCCB中呈正相关。

单肺通气对胸腹腔镜联合食管癌根治术患者肺内分流率和claudin-4蛋白的影响

目的 探讨食管癌手术行单肺通气过程中肺内分流率和claucdin-4蛋白的变化规律。方法 选取拟在全麻下行胸腹腔镜联合食管癌根治术的患者30例,抽取侧卧位单肺通气前10 min(T0)、单肺通气后60 min(T1)、恢复双肺通气后60 min(T2)时的桡动脉及中心静脉血,测定肺内分流率及血清中claudin-4蛋白,观察比较不同时段两组数值的变化规律及二者的相关性。结果 肺内分流率在不同时间点比较差异有统计学意义,T1时刻大于T0时刻和T2时刻(P<0.05),T0时刻与T2时刻比较差异无统计学意义(P>0.05);claudin-4在3个时间点的比较差异有统计学意义,T1、T2时刻大于T0时刻(P<0.05),T1时刻与T2时刻比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 单肺通气可以导致明显的肺内分流,且在恢复双肺通气后有改善,而claudin-4表达上调,起到一定的肺保护作用。

claudin-4和PTEN在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的探讨claudin-4和PTEN在子宫内膜癌中的表达、意义及两者之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测75例子宫内膜癌、35例不典型增生和28例增生期子宫内膜的claudin-4和PTEN表达。结果从正常增生期子宫内膜、非典型增生、到宫内膜癌,claudin-4阳性表达呈逐渐增高趋势,组间差异有统计学意义(P<0.05);PTEN阳性表达呈下降趋势,组间差异有统计学意义(P<0.05)。claudin-4高表达与癌组织肌层浸润有关(P<0.05),与组织分级、手术病理分期、组织学类型及有无淋巴结转移无关;PTEN低表达与肌层浸润有关(P<0.05),与组织分级、手术病理分期、组织学类型、及有无淋巴结转移无关。claudin-4与PTEN呈负相关(r=-0.36,P<0.05)。结论claudin-4高表达可能促进了子宫内膜癌发生和发展,PTEN低表达在这一过程中可能具有协同作用。

大蒜素对急性肺损伤大鼠Claudin-4调节作用研究

目的:探讨大蒜素对急性肺损伤大鼠的治疗作用及机制。方法:以雄性Wistar大鼠为对象通过颈动脉放血+气管LSP注射建立大鼠急性肺损伤模型,并通过静脉注射大蒜素予以治疗,以正常Wistar大鼠作为对照。术后通过病理检测、ELISA法等分析大蒜素疗效,并通过ELISA法、western blotting、PCR方法检测肺脏中Claudin-4表达变化。结果:经病理和ELISA检测显示大蒜素治疗组肺脏损伤情况明显好于急性肺损伤组,ELISA法、western blotting、PCR检测发现休克组大鼠肺脏Claudin-4表达较对照组明显降低,而以大蒜素治疗后Claudin-4表达可显著升高。结论:大蒜素可以减轻大鼠急性肺损伤,其机制可能是通过升高肺脏中Claudin-4的表达。

claudin-4基因沉默对Ⅰ型子宫内膜癌细胞Ishikawa生物学行为的影响

目的观察claudin-4基因沉默对Ⅰ型子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖能力和迁移能力的影响,并初步探讨其分子机制。方法将子宫内膜癌细胞Ishikawa随机分为空白组和实验组,实验组根据是否claudin-4siRNA转染分为阴性转染组和阳性转染组。应用claudin-4基因沉默技术,肯定claudin-4基因沉默的效果后运用细胞计数法检测细胞的增殖能力,通过细胞划痕实验来检测细胞的迁移能力。结果空白组和阴性转染组细胞的生长良好,生长速率相近,而阳性转染组细胞生长状态不良,与空白组和阴性转染组相比生长速率明显降低(P<0.05);且阳性转染组细胞48 h迁移距离明显小于空白组和阴性转染组,差异有统计学意义(P<0.05);阳性转染组细胞迁移率明显低于空白组和阴性转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 claudin-4基因沉默抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的生长和增殖,影响细胞的体外迁移能力。claudin-4基因可能是子宫内膜癌基因治疗合适的分子靶点,为临床上开发新的靶向治疗药物提供新的靶点,为claudin-4作为靶点的基因治疗提供理论依据。

紧密连接分子claudin-4在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达

目的:检测claudin-4在正常子宫内膜、增生性子宫内膜和子宫内膜样腺癌组织中的表达,探讨claudin-4在正常子宫内膜恶性转化中的作用。方法:免疫组化和western blot法检测正常子宫内膜、增生性内膜和内膜癌组织中claudin-4的蛋白质表达,实时聚合酶链反应法检测claudin-4mRNA的表达,透射电镜观察不同子宫内膜组织中紧密连接形态学的变化。结果:claudin-4在不典型增生内膜和子宫内膜样腺癌组织中的蛋白表达和mRNA的表达均显著高于正常增殖期内膜、正常分泌期内膜、单纯增生性内膜和复杂增生性内膜。claudin-4的蛋白表达与子宫内膜样腺癌的肌层浸润深度呈正相关。子宫内膜样腺癌细胞的紧密连接结构崩解,增生性内膜与正常子宫内膜中紧密连接的结构未见明显变化。结论:claudin-4可能在子宫内膜的恶性转化中起一定作用。

胃癌组织中Claudin-4的表达变化及意义

目的观察胃癌组织中Claudin-4的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测65例胃癌患者胃癌组织和20例胃组织正常者胃组织中的Claudin-4。结果正常胃组织、胃癌组织中Claudin-4阳性表达率分别为16.0%(4/25)、63.1%(41/65),两组相比P<0.01。T3+T4级胃癌组织中Claudin-4阳性表达率明显高于T1+T2级,P<0.05。结论胃癌组织中Claudin-4表达升高。其可能与胃癌临床分期有关。

claudin-1、claudin-4在子宫内膜癌的表达及其意义

目的:探讨claudin-1、claudin-4在子宫内膜癌的表达及其子宫内膜癌与临床病理参数之间关系。方法:采用免疫组化S-P法检测claudin-1、claudin-4在52例子宫内膜癌、24例子宫内膜非典型增生及19例增生期子宫内膜的表达,并与病理参数作相关分析。结果:在增生期子宫内膜、子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌中,claudin-1阳性表达率分别为89.5%、66.7%、63.5%,呈下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.005);claudin-4阳性表达率分别为36.8%、70.8%、90.4%,呈增高趋势,差异具有统计学意义(P<0.005)。claudin-1表达与癌组织分级、病理分期、肌层浸润深度、有否淋巴结转移及组织学类型均无关;claudin-4表达与癌组织肌层浸润深度有关,与以上其他病理参数无关。结论:claudin-1低表达、claudin-4高表达可能对子宫内膜癌发生、发展具有促进作用,两者在子宫内膜癌诊断、治疗和预后等方面具有潜在的应用价值。

Claudin-4在胰腺癌组织芯片中的表达及其临床意义

目的:检测Claudin-4在胰腺癌中的表达情况,探讨Claudin-4在胰腺癌发病中所起的作用。方法:用组织芯片技术构建包含48例导管腺癌和16例慢性胰腺炎组织的64点阵的石蜡组织芯片,用免疫组化SP法检测该芯片中Claudin-4的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系。结果:48例胰腺癌患者中,Claudin-4阳性表达率为81.3%(39/48),与慢性胰腺炎比较,Claudin-4表达与胰腺癌呈显著相关(r=0.415,P<0.05);Claudin-4表达与年龄、性别、组织分化程度及TNM分期无明显相关。结论:Claudin-4阳性表达与胰腺癌相关,可能与胰腺癌的发生及发展有密切关系,但与胰腺癌的临床病理分型无关。

Claudin-4在胆囊癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系

目的分析Claudin-4在胆囊癌(GBC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法收集2014年1月至2018年12月间于蚌埠医学院第一附属医院行根治性手术的50例GBC患者的肿瘤标本及临床资料,并定期随访,选择同期入院的20例胆囊腺瘤及20例慢性胆囊炎作为对照;免疫组化法检测胆囊组织中Claudin-4的表达,分析其与GBC患者临床病理特征、预后的关系;Keplan-Meier(KM)生存曲线、log-rank检验及Cox回归分析探讨Claudin-4对患者总体生存率(OS)的影响。结果GBC患者肿瘤组织中Claudin-4的表达水平显著高于胆囊炎和胆囊腺瘤(P<0.05);GBC患者Claudin-4表达与血清糖类抗原19-9(CA19-9)水平、肿瘤分化程度显著相关;KM生存曲线提示,Claudin-4表达阳性的患者有较差的OS;Cox多因素分析提示,Claudin-4是GBC的独立预后因素。结论Claudin-4在GBC组织中高表达,与患者血清CA19-9、肿瘤分化程度密切相关,并影响患者术后OS。

大蒜素对急性肺损伤大鼠Claudin-4调节作用研究

目的:探讨大蒜素对急性肺损伤大鼠的治疗作用及机制。方法:以雄性Wistar大鼠为对象通过颈动脉放血+气管LSP注射建立大鼠急性肺损伤模型,并通过静脉注射大蒜素予以治疗,以正常Wistar大鼠作为对照。术后通过病理检测、ELISA法等分析大蒜素疗效,并通过ELISA法、western blotting、PCR方法检测肺脏中Claudin-4表达变化。结果:经病理和ELISA检测显示大蒜素治疗组肺脏损伤情况明显好于急性肺损伤组,ELISA法、western blotting、PCR检测发现休克组大鼠肺脏Claudin-4表达较对照组明显降低,而以大蒜素治疗后Claudin-4表达可显著升高。结论:大蒜素可以减轻大鼠急性肺损伤,其机制可能是通过升高肺脏中Claudin-4的表达。

PAX8,PAX2,claudin-4和h-calde-smon免疫染色在鉴别诊断腹膜间皮瘤和浆液性癌中的价值

腹膜上皮样间皮瘤和浆液性癌广泛累及腹膜的鉴别仅依靠组织学较难，目前比较常用的免疫组化标记为间皮表达标志物（如calretinin、podoplanin、keratin5／6和thrombomodulin），或浆液性癌表达标志物（如MOC-31、Ber．EP4、BG-8、TAG-72、CD15和CA199）。最近研究表明，PAX8、PAX2、claudin-4和h-caldesmon免疫组化标记可辅助诊断两种肿瘤，但是大量的研究报道对以上标志物的评估不充分或者结果相互矛盾。

RNA干扰沉默claudin-4基因表达对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的:采用RNA干扰技术沉默claudin-4基因在子宫内膜癌细胞Ishikawa中的表达,探讨claudin-4表达下调对Ishikawa细胞增殖力和侵袭力的影响;比较RNA干扰前后差异表达的蛋白质,探讨claudin-4基因在子宫内膜癌发病机制中的作用。方法:设计靶向claudin-4的小干扰RNA(si RNA),转染人子宫内膜癌细胞Ishikawa。采用CCK分析法检测干扰前后细胞增殖能力的变化,Transwell小室实验检测干扰前后细胞侵袭能力的变化。应用双向凝胶电泳和质谱分析检测RNA干扰前后蛋白质表达的差异。结果:claudin-4基因沉默可以显著降低子宫内膜癌细胞的增殖能力和侵袭能力(P<0.05)。应用蛋白质组学技术比较claudin-4 si RNA干扰前后蛋白质表达的差异,共鉴定出5种差异蛋白质。结论:claudin-4基因具有促进子宫内膜癌细胞增殖和细胞侵袭的作用,这种作用可能通过改变差异蛋白的表达得以实现。

Claudin-4在胃癌中的表达及其临床相关因素分析

目的研究Claudin-4在胃癌组织中的表达,分析其与临床病理的关系及其意义。方法选取2015年3月至2016年9月在西安市中心医院普通外科行手术切除并经病理证实的胃癌标本50例,癌旁正常组织28例,癌前病变的标本23例。采用免疫组化检测胃癌、癌前病变、癌旁正常组织中Claudin-4的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织、癌前病变组织、癌旁正常组织中Claudin-4蛋白的阳性率分别为54.00%、52.17%、39.28%,随着病变进展Claudin-4呈逐渐增高趋势,Claudin-4蛋白胃癌组织、癌前病变组织、癌旁正常组织中的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄、性别、TNM分期及淋巴结转移情况胃癌患者的胃癌组织标本Claudin-4蛋白阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度胃癌组织标本Claudin-4蛋白阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Claudin-4蛋白表达与胃癌分化程度密切相关,在高分化腺癌中表达阳性率明显高于低分化腺癌。