TBI大鼠Claudin-5紧密连接蛋白表达变化及CBD干预研究

目的观察大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑微血管内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5表达的时序性规律,探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体撞击法建立SD大鼠TBI模型,随机分为对照组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和干预组(TBI+CBD组),每组分8 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d 6个亚组(n=3)。运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色实验,观察CBD干预对TBI后Claudin-5阳性表达与星形胶质细胞(astrocyte,AST)激活的影响。结果PCR结果表明:TBI后不同时间段Claudin-5的mRNA表达下降,CBD干预后,其表达有明显回升。免疫组化及免疫荧光结果表明,Sham组Claudin-5蛋白表达于脑微血管内皮细胞连接处,呈点状、线条状,AST胞体较小、突起少呈细长状;TBI后Claudin-5阳性细胞线条断裂,其表达显著减弱且呈下降趋势,以2 d组表达最低(P<0.05),此外,AST被激活,胞体变大、突起增多肿胀;CBD干预后Claudin-5阳性表达显著升高,AST激活状态明显减弱,胞体有所回缩,足板肿胀减轻。胶质纤维酸性蛋白阳性表达的AST和Claudin-5蛋白不存在共表达,但是AST伸出的足板与微血管内皮细胞直接相贴附。结论TBI后AST激活并参与Claudin-5蛋白表达的调节;CBD可能通过调控AST的激活状态调节Claudin-5阳性表达,进而改善血脑屏障的通透性。

急性缺血性脑卒中患者血清CKLF1、claudin-5预测溶栓后出血转化的价值及与短期预后的关系

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清趋化素样因子1(CKLF1)、claudin-5预测静脉溶栓后出血转化(HT)的价值及与短期预后的关系。方法选取2019年7月—2021年1月武汉市中医医院神经内科收治接受静脉溶栓的AIS患者321例为AIS组,根据是否发生HT分为HT亚组63例和非HT亚组258例。患者出院后3个月根据改良Rankin量表(mRS)评分再分为预后不良亚组88例和预后良好亚组233例,另选取医院同期体检健康志愿者60例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CKLF1、claudin-5水平,比较各组血清CKLF1、claudin-5水平。采用多因素Logistic回归分析AIS患者静脉溶栓后HT的影响因素;Spearman相关性分析AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CKLF1、claudin-5水平对AIS患者静脉溶栓后HT的预测价值。结果与健康对照组比较,AIS组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=11.953、11.069,P均<0.001)。AIS患者321例静脉溶栓后HT发生率为19.63%(63/321)。心源性栓塞、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分升高和血清CKLF1、claudin-5升高为AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素[OR(95%CI)=1.104(1.047~1.165)、4.377(2.011~9.526)、1.195(1.106~1.292)、1.039(1.024~1.052)]。AIS患者321例静脉溶栓后3个月预后不良发生率为27.41%(88/321)。与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=7.145、7.279,P均<0.001)。AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分呈正相关(rs=0.517、0.491,P均<0.001)。血清CKLF1、claudin-5水平单独及二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.772、0.876,二者联合预测的AUC大于CKLF1、claudin-5单独预测(Z=2.542、3.786,P均<0.001)。结论血清CKLF1、claudin-5水平升高是AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素,二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的价值较高,且血清CKLF1、claudin-5水平升高与AIS患者短期预后不良有关,有望成为AIS患者静脉溶栓后HT和短期预后的辅助评估指标。

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及Claudin-5表达的影响

目的研究川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后血脑屏障(BBB)通透性及紧密连接相关蛋白Claudin-5表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠脑I/R模型,采用伊文斯蓝(EB)法检测BBB的通透性,免疫组化、RT-PCR及Western blot测定缺血再灌注脑组织Claudin-5的表达。结果再灌注3 h和72 h组缺血侧脑组织EB含量均显著高于假手术组(P<0.05),川芎嗪治疗组缺血侧脑组织EB含量均显著低于同时间点再灌注组(P<0.05)。再灌注3 h和72 h缺血侧脑组织Claudin-5表达显著低于假手术组(P<0.05),川芎嗪治疗组缺血侧脑组织Claudin-5表达显著高于同时间点再灌注组对照组(P<0.05)。结论大鼠脑I/R后BBB损伤与Claudin-5表达下调密切相关,川芎嗪可能通过上调Claudin-5的表达恢复紧密连接的功能,降低I/R后BBB的通透性,从而减轻I/R后脑水肿。

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P<0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P<0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。

Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在胰腺实性-假乳头状瘤中的诊断价值

目的研究紧密连接蛋白Claudin-5、β-catenin和E-cadherin在鉴别胰腺实性假乳头状瘤(SPTP)与胰腺神经内分泌性肿瘤(P-NET)中的意义。方法收集2006-01—2014-06间60例SPTP、48例P-NET病例,回顾性复习临床资料、病理组织学特点,应用免疫组织化学检测NSE、Cg A、Syn、CD56、β-catenin、E-cadherin(ECD)和Claudin-5的表达情况。结果 NSE、Cg A、Syn、CD56免疫标记物在这2组肿瘤中都有不同程度的表达,P-NET组的Cg A阳性率显著高于SPTP组(97.9%:0),Claudin-5在所有SPTP中细胞膜(+),而P-NET均(-);β-catenin在60例SPTP呈细胞核(+),表达率为100%(60/60),在P-NET中呈细胞膜、细胞质(+),其表达率12.5%(6/48);ECD在60例SPTP中细胞膜(-)(0/60),在P-NET中呈细胞膜(+)(48/48,100%)。结论检测Claudin-5、β-catenin和ECD的蛋白表达有助于鉴别胰腺实性假乳头状瘤和神经内分泌肿瘤。

大鼠脊髓损伤后紧密连接蛋白claudin-5的表达

目的检测大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)紧密连接蛋白claudin-5表达变化。方法 120只成年雄性SD大鼠随机分为空白组(60只)和损伤组(60只),损伤组参照改良Allen’s法[2]建立脊髓损伤动物模型。建模后不同时间点(6h、12h、1d、3d、5d、7d)各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性,取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果损伤组制模成功率81.7%;损伤组EB含量随时间变化逐渐升高,在损伤后第3天达峰值(0.9435±0.0813)μg/g,此后逐渐降低(P均<0.05),各时间点损伤组EB含量较空白组显著增高(P均<0.05);损伤组claudin-5 mRNA表达随时间变化逐渐减少,在损伤后第3天表达最低(2.871±0.527),此后逐渐升高(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5mRNA表达均较空白组显著降低(P均<0.05);损伤组claudin-5表达随时间变化逐渐减少,第3天达最低(0.072±0.008),之后逐渐增加(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5表达均较空白组显著降低(P均<0.05)。结论大鼠SCI后可能通过影响claudin-5的表达改变BSCB通透性,影响脊髓继发损伤的病理生理过程。

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后claudin-5和TNF-α表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接(tight junctions,TJ)蛋白claudin-5和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,伊文思蓝渗透性实验检测血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性,透射电镜观察脑微血管内皮细胞间TJ的状态,免疫组化法测定claudin-5的蛋白表达,ELISA法检测TNF-α的含量。结果 EPO能够显著降低脑缺血再灌注后BBB的通透性(P<0.01),恢复TJ完整性,显著上调缺血脑组织中claudin-5表达水平(P<0.01),显著降低TNF-α含量。结论 EPO通过降低脑缺血再灌注后脑组织中TNF-α含量,使claudin-5的表达增加,从而恢复TJ完整性,降低BBB通透性。

清开灵注射液对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧模型紧密连接蛋白claudin-5的影响

目的观察缺氧对脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5表达的影响及清开灵的干预作用。方法体外培养Balb/c小鼠脑微血管内皮细胞,分为正常组、模型组和清开灵小中大剂量组,采用氧糖剥夺24h模拟缺血损伤,荧光定量PCR法检测Claudin-5mRNA的转录水平,western blot法检测蛋白表达。结果缺氧损伤后,Claudin-5mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,清开灵小、中、大各剂量组都有改善趋势,其中小、大剂量对基因转录水平提高明显,中剂量对蛋白表达的增强更显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论清开灵通过调节紧密连接蛋白claudin-5表达,改善血脑屏障通透性从而阻抑脑缺血反应过程。

二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响

目的观察二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5蛋白表达的影响,研究其对血脑屏障紧密连接是否具有保护作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组及二氮嗪预处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色和Western blot检测各组大鼠ZO-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果 1.假手术组ZO-1、Claudin-5在血管上的染色连续、丰富,缺血再灌注组ZO-1、Claudin-5的染色稀少、断续,二氮嗪预处理组染色较缺血再灌注组有所改善;2.Western blot定量测定与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠脑组织中ZO-1和Claudin-5蛋白表达均明显下降(P<0.01),与缺血再灌注组相比,二氮嗪预处理组ZO-1和Claudin-5的蛋白表达明显增多(P<0.05)。结论二氮嗪对血脑屏障紧密连接具有保护作用,其机制可能与增加紧密连接相关蛋白ZO-1和Claudin-5的表达有关。

过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能

[目的]探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响.[方法]体外原代培养人视网膜血管内皮细胞（hRVEC）.当接种至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融合时进行慢病毒介导的转染实验.hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组.荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率.Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平.CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性.待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻（TER）,异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性.[结果]慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60％,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加.CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER.[结论]过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路.

大鼠创伤性脑损伤后Claudin-5表达水平变化的研究

目的:探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时间点血脑屏障通透性及Claudin-5表达水平的变化,为进一步研究创伤后脑水肿的机制及治疗时机提供理论依据。方法:大鼠随机分为对照组和脑损伤组,参照Feeney's的自由落体致伤法,制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文兰(evansblue)法测定伤后不同时间点损伤灶皮层脑组织中EB含量;应用Westernblot法检测损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平。结果:损伤灶皮层中EB含量在伤后1～6h明显增多,高峰期在3h。Westernblot结果显示损伤后1～6h,Claudin-5表达水平较对照组显著降低(P<0.05),3h最明显,24h与对照组差异无统计学意义。结论:大鼠顶叶局部脑挫裂伤可能通过下调紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平,开放紧密连接,增加血脑屏障的通透性。

水蛭素对大鼠脑出血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的作用

目的:研究水蛭素对脑出血后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性和紧密连接相关蛋白claudin-5表达的影响。方法:采用自体动脉血注入法制作大鼠脑出血模型,伊文思蓝法检测BBB通透性,Western blot法检测claudin-5的表达。结果:脑出血模型组及水蛭素组BBB通透性于出血后明显增加(P<0.01),同时水蛭素组BBB通透性低于脑出血模型组(P<0.01);claudin-5的表达在脑出血模型组和水蛭素组于出血后明显减少(P<0.01),水蛭素组的表达明显高于脑出血模型组(P<0.01)。结论:调节紧密连接相关蛋白claudin-5的表达,进而调节BBB的通透性可能是水蛭素抑制脑水肿形成的途径之一。

14-3-3σ和Claudin-5在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学染色方法检测14-3-3σ和Claudin-5在50例结直肠癌组织中的表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果14-3-3σ在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为10%和58%,差异有统计学意义(P<0.001);Claudin-5在对照组和肿瘤组中的阳性表达率分别为82%和68%,差异无统计学意义(P>0.05);结直肠癌组织中14-3-3σ与Claudin-5表达无明显相关(P>0.05)。14-3-3σ表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移(均P<0.05)有关,而与性别、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05);Claudin-5表达与淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浆膜浸润无关(均P>0.05)。结论14-3-3σ和Claudin-5蛋白在结直肠癌中表达明显增高,这两种蛋白均与结直肠癌淋巴结转移关系密切。

大鼠C6胶质瘤血脑屏障超微结构与紧密连接蛋白claudin-5变化的研究

背景与目的:开放血脑屏障将为胶质瘤的综合治疗提供新的希望,本研究观察C6脑胶质瘤不同区域血-脑屏障(BBB)的通透性的变化、超微结构特征及紧密连接蛋白claudin-5的表达变化。方法:雄性SD大鼠,随机分为对照组和荷瘤组,采用立体定向方法在大鼠右侧尾状核接种C6细胞建立大鼠C6胶质瘤模型,于建模后第20天取肿瘤、肿瘤临近处(brain adjacent to tumor,BAT)即距肿瘤边界2mm以内及肿瘤远隔处(brain dis-tant to tumor,BDT)即2mm以外的大脑半球脑皮质3个部位的脑组织和对照鼠右侧尾状核正常脑组织,采用外源性硝酸镧透射电镜示踪法,观察BBB/BBTB超微结构特征;免疫组化法观察紧密连接蛋白claudin-5在正常鼠和荷瘤鼠各部位的表达变化。结果:(1)肿瘤处可见La3+通过血管内皮细胞的紧密连接渗透至血管腔外及脑间质裂隙内,BAT部分见La3+渗出至局部基底膜,大部分分布在血管腔内,而BDT及对照组正常脑组织La3+分布在血管腔内,血管内皮细胞紧密连接结构完整,基底膜呈线状连续,脑血管内皮细胞浆均未见La3+。(2)claudin-5在BDT与对照组脑组织表达丰富、连续;肿瘤处表达减弱,沿血管呈间断表达;BAT较正常脑组织表达下降,但仍呈连续状态。结论:正常脑组织血脑屏障稳定,通透性最低;肿瘤的周边存在不同程度的屏障;C6胶质瘤细胞的直接浸润可以降低内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5,可能是诱导紧密连接破坏导致BBTB通透性增高的重要原因。

化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿模型大鼠脑组织中HIF-1α和Claudin-5蛋白表达的影响

目的:探讨化瘀涤痰汤对急性硬膜下血肿大鼠脑组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和紧密连接蛋白5(Claudin-5)蛋白表达的影响。方法:复制急性硬膜下血肿大鼠模型,造模成功后将大鼠分为:假手术组、模型组、化瘀涤痰汤高剂量组(HG组)、化瘀涤痰汤中剂量组(HZ组)、化瘀涤痰汤低剂量组(HD组)、天丹通络胶囊阳性组(TD组),每组10只大鼠,每日给药1次,持续给药14天后处死取脑组织,免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠血肿侧脑组织中HIF-1α和Claudin-5的蛋白表达量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠注血侧脑组织中HIF-1α蛋白表达量上调(P<0.01),Claudin-5的蛋白表达量显著降低(P<0.05),与模型组比较,HG、HZ、HD组和TD组HIF-1α的表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),HG组和TD组大鼠脑组织中Claudin-5表达均升高(P<0.01)。结论:化瘀涤痰汤降低急性硬膜下血肿大鼠脑组织中HIF-1α蛋白表达并增加Claudin-5蛋白的表达。

甲强龙预处理对大鼠脊髓损伤后claudin-5表达的影响

目的探讨甲强龙(11β,17α,21-三羟基-6α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20二酮-21-琥珀酸钠)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)通透性及紧密连接蛋白claudin-5表达的影响。方法参照改良Allen’s法建立大鼠脊髓损伤模型。分为假手术组(n=50)、脊髓损伤组(n=50)、甲强龙预处理组(n=50)。建模后不同时间点(12h、1d、3d、5d、7d)各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性,取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果本实验制模成功率84.0%;脊髓损伤组各时间点EB含量较假手术组显著增高(F=27.732,P均<0.05)。甲强龙预处理组各时间点EB含量较脊髓损伤组显著降低(F=48.149,P均<0.05);脊髓损伤组各时间点claudin-5 m RNA表达较假手术组显著降低(F=12.248,P均<0.05)。甲强龙预处理组各时间点claudin-5 m RNA表达较脊髓损伤组显著升高(F=15.316,P均<0.05);脊髓损伤组各时间点claudin-5表达较假手术组显著降低(F=18.108,P均<0.05)。甲强龙预处理组各时间点claudin-5表达较脊髓损伤组显著升高(F=20.247,P均<0.05)。结论上调claudin-5表达可能是甲强龙改善大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性的途径之一。

紧密连接蛋白Claudin-5表达在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨人乳腺癌组织中紧密连接蛋白Claudin-5的表达及与临床病理特征的关系。方法应用半定量PCR和Western blotting检测88例乳腺癌组织和61例乳腺增生组织中Claudin-5 m RNA及Claudin-5蛋白的表达水平,分析乳腺癌组织中Claudin-5蛋白表达与临床病理特征(分化程度、淋巴结转移、年龄、组织学分级、肿瘤大小和临床分期)及预后的关系。结果乳腺癌组织中的Claudin-5 m RNA和Claudin-5蛋白相对表达水平分别为0.87±0.13和0.95±0.23,均高于乳腺增生组织的0.23±0.09和0.54±0.18,差异有统计学意义(P<0.01);Claudin-5蛋白表达与分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期和组织学分级无关(P>0.05);Claudin-5蛋白低表达者的中位生存期为45.5个月,高于高表达者的29.5个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Claudin-5在乳腺癌组织中高表达,可能与乳腺癌发生和转移有着密切关系,并可作为判断乳腺癌淋巴结转移和预后评估的参考指标。

缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠Claudin-5表达及血-脑屏障通透性的影响

目的探讨缺氧预处理对创伤性脑损伤大鼠脑组织紧密连接蛋白Claudin-5的表达及血-脑屏障通透性的影响。方法204只大鼠随机分为创伤性脑损伤组（T组）96例，缺氧预处理后脑损伤组（H组）96例及对照组12例。T组行自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤模型，H组给予3d缺氧预处理后，同法致脑损伤，两组大鼠于伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d、14d断头处死。采用干湿重法测脑组织含水量：Real—timePCR和Westernblot检测各组大鼠挫伤区周围脑组织Claudin-5mRNA及蛋白表达变化；IgG法检测血一脑屏障通透性变化。结果T组和H组伤后1hClaudin-5mRNA及蛋白表达开始降低，8～12h降至最低点，1d开始上升，直至伤后14d渐趋于对照组水平；其中H组各时间点Claudin-5mRNA及蛋白表达均高于T组。T组各时间点血一脑屏障通透性及脑组织含水量均明显高于H组（P〈0．05），且两组均高于对照组（P〈0．05）。结论缺氧预处理可在创伤性脑损伤早期上调紧密连接蛋白Claudin-5的表达，维持血-脑屏障完整性，减轻脑水肿。

噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障通透性的影响

目的研究噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障功能的影响。方法40只豚鼠随机分为正常对照组(20只)和噪声暴露组(20只),噪声暴露组给予声强为115dB SPL白噪声暴露,每天6小时,连续两天,对照组不予噪声暴露。于实验前及噪声暴露后次日对两组豚鼠行ABR检测,第二次ABR检测后对两组豚鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色;用硝酸镧透射电镜和常规透射电镜观察两组豚鼠内耳血迷路屏障通透性和紧密连接的变化;Western blot和免疫组织化学染色观察两组豚鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带处claudin-5的表达。结果噪声暴露组豚鼠ABR波Ⅲ反应阈较正常对照组阈移40dB以上,差异有统计学意义(P<0.05);基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞大量缺失,其余部分毛细胞纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,其纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);透射电镜下,可见噪声暴露组血管内皮细胞间和边缘细胞间的紧密连接均遭到破坏,细胞间隙增大;硝酸镧透射电镜下,大量镧颗粒从血管腔内渗漏到管腔外的组织间隙,而对照组镧颗粒仅局限于血管腔内;Western blot结果示,两组耳蜗外侧壁血管纹均有claudin-5表达,但噪声暴露组的表达量明显低于正常组;免疫组织化学染色也表明,两组豚鼠耳蜗外侧壁毛细血管内皮细胞、边缘细胞等处均有claudin-5阳性表达,但噪声组表达量显著低于正常组(P<0.05)。结论噪声通过下调紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏细胞间紧密连接,增加豚鼠血迷路屏障的通透性,从而导致内耳微环境的破坏,是噪声性聋可能的发病机制之一。

脑通汤对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤内皮屏障抗原及紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的影响

目的:探讨脑通汤对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用及血脑屏障通透性的影响。方法:体外培养大鼠原代BMECs,缺氧/复氧法模拟脑缺血再灌注损伤。免疫组化检测内皮屏障抗原(EBA)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)m RNA、紧密连接蛋白(ZO-1)m RNA的表达。结果:免疫组化示,与正常细胞组比较,模型组EBA蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤大、中剂量含药血清组EBA蛋白表达显著升高(P<0.05);但正常血清组与模型组比较差异无显著性(P>0.05)。实时荧光定量PCR法示,与正常细胞组比较,模型组Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤不同剂量含药血清组干预后,Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达量明显上调,其中脑通汤大剂量含药血清组显著上调(P<0.05)。结论:脑通汤可以保护脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤,其保护机制可能与其上调EBA蛋白及Claudin-5、ZO-1基因的表达密切相关。