糖分子探针与炎症因子、Claudin-8在结肠炎大鼠肠黏膜通透性改变中的相关性

背景:肠黏膜通透性改变是溃疡性结肠炎发展的重要环节。糖分子探针是检测通透性的一种安全无创的方法,其与炎症因子、claudin-8在黏膜通透性改变中的相关性尚不明确。目的:探讨糖分子探针与TNF-α、CRP和claudin-8在结肠炎大鼠肠黏膜通透性改变中的相关性。方法:24只大鼠随机分为模型组和正常对照组,以DSS溶液制备结肠炎模型。ELISA法检测TNF-α、CRP表达,免疫组化法检测claudin-8表达,高效液相色谱仪检测糖分子探针含量,分析炎症因子、claudin-8与糖分子探针的相关性。结果:与正常对照组相比,模型组结肠组织TNF-α、CRP表达显著升高(P<0.01);claudin-8表达显著降低(P<0.01);乳果糖和三氯蔗糖排出量以及乳果糖/甘露醇比值明显升高(P<0.01),甘露醇排出量明显降低(P<0.01)。乳果糖、三氯蔗糖排出量与TNF-α、CRP表达呈正相关(P<0.01),与claudin-8表达呈负相关(P<0.01);而乳果糖/甘露醇比值、甘露醇排出量与TNF-α、CRP表达呈负相关(P<0.01),与claudin-8表达呈正相关(P<0.01)。结论:糖分子探针与TNF-α、CRP以及claudin-8表达在提示大鼠肠黏膜通透性改变上的结果一致。糖分子探针可作为一种反映肠黏膜通透性改变的潜在检测方法。

紧密连接蛋白claudin-8基因5'调控区序列的生物信息学分析

目的研究紧密连接蛋白claudin-8基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法利用BLAST比对获得claudin-8基因5'调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件NeuralNetwork Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析claudin-8基因5'调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpGIsland Searcher分析claudin-8基因5'调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-8基因5'调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果 claudin-8基因5'调控区序列中存在2个CAAT-box,无TATA-box和GC-box;clau-din-8基因可能存在6个启动子位点;CpG岛为148 bp(379 bp-526 bp)、64 bp(1662 bp-1725 bp)、319 bp(296 bp-614 bp)。结果显示评分在85分以上(Score Threshold:85.0)时,该区域具有498个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上(ScoreThreshold:90.0)时,该区域具有221个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上(Score Threshold:95.0)时,该区域具有98个潜在的转录因子结合位点;评分在100分(Score Threshold:99.0)时,该区域具有37个潜在的转录因子结合位点。结论通过生物信息学的方法对于claudin-8基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义。

紧密连接蛋白Claudin-8的研究进展

Claudin-8是紧密连接蛋白家族claudins的重要成员之一,在构建细胞紧密连接(tight junctions,TJs)、维持细胞屏障功能和参与细胞间分子传递等方面发挥作用。Claudin-8的表达失调导致紧密连接破坏,屏障功能和分子传递功能受损,在多种组织和细胞中有致病作用,尤其和生殖系统和消化系统疾病、上皮源性恶性肿瘤等疾病的关系显著。本文就Claudin-8的研究进行综述。

紧密连接蛋白-8在实验性结肠炎中的表达及意义

目的结肠黏膜屏障功能损伤是溃疡性结肠类(ulcerative colitis,UC)的发病机制之一。结肠上皮细胞中的紧密连接蛋白claudin可能参与肠上皮屏障功能的损伤。文中研究葡聚糖硫酸钠(dextram sulphate sodium,DSS)诱导的实验性结肠炎大鼠模型结肠组织中紧密连接蛋白-8(claudin-8)及炎症因子的表达,探讨紧密连接蛋白-8参与实验性结肠炎发病的可能机制。方法 24只健康SD大鼠随机分为2组:DSS肠炎模型组和正常对照组,观察结肠黏膜病变及紧密连接蛋白-8在结肠黏膜中的表达,测定结肠组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)表达水平。对紧密连接蛋白-8及炎症因子表达水平与组织学损伤评分进行相关性分析。结果①H-E染色显示模型组病变主要累及黏膜及黏膜下层,可见大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞为主,部分表面上皮脱落,上皮内杯状细胞减少,隐窝破坏。②紧密连接蛋白-8表达于肠黏膜上皮细胞膜和细胞间隙,模型组表达低于正常对照组,分别为(0.100±0.007)和(0.200±0.011),具有显著性差异,P<0.01。③模型组结肠组织中TNF-α、CRP水平分别为(8.51±1.55)pg/mg和(2.21±0.38)pg/mg,显著高于正常对照组(61.8±35.6)ng/mg和(50.5±5.9)ng/mg,差异有统计学意义,P<0.01。④紧密连接蛋白-8表达水平与结肠组织中TNF-α和CRP浓度均呈显著负相关,P<0.01,与组织学评分亦呈负相关,相关系数为-0.967,-0.926。结论①实验性结肠炎模型中紧密连接蛋白-8表达下降,与病理学评分相关,提示紧密连接蛋白-8可能与实验性结肠炎的发生发展有一定相关性。②实验性结肠炎肠黏膜组织中TNF-α水平与紧密连接蛋白-8的表达呈负相关,提示局部炎症反应可能与紧密连接蛋白-8的表达下降有一定相关性。

溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织闭合蛋白影响的实验研究

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的作用并探讨其作用机制。方法选用SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、敷贴组、SASP组,并建立溃疡性结肠炎大鼠模型,造模结束后,敷贴组给予溃结宁膏穴位敷贴,治疗结束后,观察大鼠宏观表征改变,计算疾病活动指数(DAI);Western blotting法检测大鼠结肠组织Claudin-1、Claudin-2、Claudin-8蛋白的表达。结果 1)治疗结束后,与模型组比较,敷贴组和SASP组的大鼠宏观表征改变有一定程度的改善(P <0.01);2)与空白组比较,其余3组的Claudin-2蛋白表达上升(P <0.01),Claudin-1、Claudin-8等蛋白的表达下降(P <0.01);与模型组比较,敷贴组和SASP组上述蛋白指标均显著改善(P <0.05);与SASP组比较,敷贴组各项指标差异不明显(P> 0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可以一定程度上降低实验大鼠Claudin-2蛋白的水平,同时使得Claudin-1、Claudin-8的蛋白表达上升,从而达到减轻肠道炎症反应,促进结肠黏膜愈合,重建肠黏膜机械屏障的完整性的目的。