血必净注射液对脓毒症大鼠Claudin4蛋白和辅助性T淋巴细胞1型表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肺组织Claudin4蛋白表达的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠100只,体重(250±25)g,随机分入4组,每组25只:假手术组大鼠只开腹、关腹和复苏,不行盲肠结扎穿孔术(CLP);脓毒症组大鼠行CLP;血必净3h组大鼠于CLP后3h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg;血必净12h组大鼠于CLP后12h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg。每组随机留取8只大鼠进行生存率分析。假手术组、脓毒症组、血必净3h组大鼠在术后6、15和24h,血必净12h组大鼠在术后15和24h各随机处死5只,分别留取血液和肺组织标本,测定肺组织湿/干质量比(肺水肿指数),对肺组织进行病理学观察并进行肺损伤病理学评分,测定血清促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用免疫组织化学方法测定肺组织骨架蛋白Claudin4蛋白表达情况,采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1型(Th1)在外周血单核细胞中的表达情况。结果假手术组、脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠的术后72h存活率分别为8/8、0、1/8和0,血必净3h组显著高于脓毒症组(P<0.01),血必净12h组与脓毒症组的差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠术后各项检测指标均基本不变。脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数,以及术后6、15和24h的肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6、15和24h,以及血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数、肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于血必净3h组同时间点(P值分别<0.05、0.01);脓毒症组与血必净12h组术后同时间点间上述指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。脓毒症组和血必净3h组大鼠术后各时间点的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6和15h的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于血必净3h组同时间点(P值均<0.01),术后24h的外周血单核细胞中Th1的表达率显著低于血必净3h组同时间点(P<0.05)。结论早期使用血必净治疗可以有效地抑制脓毒症大鼠肺组织的炎性反应,减轻肺损伤,提高大鼠存活率,其可能机制与抑制肺组织Claudin4蛋白表达,降低肺泡通透性有关。

产气荚膜梭菌肠毒素肽段与Claudin4特异性结合对哺乳动物表皮屏障通透性的调控

目的 :探讨产气荚膜梭菌肠毒素肽段(Clostridium perfringens enterotoxin,c CPE194-319)对哺乳动物表皮屏障通透性的影响。方法:首先利用SWISS-MODEL软件模拟分析了c CPE194-319与Claudin4(Cldn4)结合的结构模型,然后通过细胞免疫荧光染色法和跨内皮细胞电阻法(trans-epithelial electrical resistance,TEER)检测c CPE194-319对人源永生化表皮细胞Ha Ca T膜蛋白Cldn4表达定位的影响和细胞层紧密性的影响,最后在小鼠中利用葡聚糖-罗丹明荧光素扩散法观察经c CPE194-319处理后的小鼠表皮的荧光素渗透变化情况。结果:c CPE194-319可与Ha Ca T细胞中Cldn4蛋白特异性结合,随着作用时间的增加,c CPE194-319结合Cldn4蛋白后形成复合体从Ha Ca T细胞膜上向细胞质中转移,TEER值降低;当洗脱c CPE194-319后,新合成的Cldn4蛋白可重新定位到细胞膜上,TEER值升高。小鼠体内实验表明,c CPE194-319处理后的小鼠表皮渗透性增强。结论:c CPE194-319能够通过与Cldn4蛋白的特异性结合,从而调控哺乳动物表皮屏障的通透性。

卵巢上皮性肿瘤中claudin3、claudin4的表达及其意义

目的探讨claudin3、4与卵巢癌的发生、发展关系。方法使用免疫组化及原位杂交方法检测卵巢上皮、浆液性及黏液性囊腺瘤、交界性囊腺瘤、原发性卵巢癌、浆液性囊腺癌的远处转移灶及卵巢转移性癌的石蜡包埋组织中claudin3、4蛋白及claudin4-mRNA的表达情况。结果 claudin3、4蛋白及claudin4-mRNA在卵巢癌中表达强于交界性肿瘤,交界性肿瘤强于良性肿瘤,但是交界性浆液性肿瘤和良性肿瘤表达无明显差异;在卵巢癌的转移灶中表达程度类似于原发灶;在转移至卵巢的癌中的表达明显弱于卵巢原发癌。结论 claudin3、4表达增强与原发性卵巢癌的发生、发展、转移密切相关;浆液性囊腺癌可以有良性肿瘤直接恶变,也可以由交界性肿瘤发展而来,但不经历良性-交界性转变过程;黏液性囊腺癌则不仅可以由良性肿瘤直接恶变,也可以经历良性-交界性-恶性发展过程。

claudin-1、claudin-4在子宫内膜癌的表达及其意义

目的:探讨claudin-1、claudin-4在子宫内膜癌的表达及其子宫内膜癌与临床病理参数之间关系。方法:采用免疫组化S-P法检测claudin-1、claudin-4在52例子宫内膜癌、24例子宫内膜非典型增生及19例增生期子宫内膜的表达,并与病理参数作相关分析。结果:在增生期子宫内膜、子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌中,claudin-1阳性表达率分别为89.5%、66.7%、63.5%,呈下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.005);claudin-4阳性表达率分别为36.8%、70.8%、90.4%,呈增高趋势,差异具有统计学意义(P<0.005)。claudin-1表达与癌组织分级、病理分期、肌层浸润深度、有否淋巴结转移及组织学类型均无关;claudin-4表达与癌组织肌层浸润深度有关,与以上其他病理参数无关。结论:claudin-1低表达、claudin-4高表达可能对子宫内膜癌发生、发展具有促进作用,两者在子宫内膜癌诊断、治疗和预后等方面具有潜在的应用价值。

1,25(OH)_2D_3通过调控连接蛋白的表达缓解DSS诱导的小鼠结肠炎

目的:利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性结肠炎小鼠模型探讨活性维生素D[1,25(OH)_2D_3]缓解结肠炎的作用及机制。方法:利用DSS诱导小鼠急性结肠炎,分析炎症表型,检测杯状细胞变化情况及肠道通透性的改变,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)、免疫蛋白印迹试验(Western blot,WB)及免疫荧光分析各组小鼠结肠组织连接蛋白的表达差异。利用Ca CO-2单层细胞模型,检测1,25(OH)_2D_3对连接蛋白的保护作用。通过染色质免疫共沉淀、荧光素酶报告基因实验探讨1,25(OH)_2D_3调控Claudin 4表达的机制。结果:1,25(OH)_2D_3可明显缓解DSS诱导的结肠炎症,其可能通过增加连接蛋白表达,维持杯状细胞结构,提高肠道上皮屏障作用,减轻肠道通透性,进而减少炎症反应发挥保护作用。结论:1,25(OH)_2D_3可在小鼠急性结肠炎中发挥抗炎作用,维持肠道通透性稳定,增强细胞连接蛋白的表达水平,并且通过维生素D受体转录调控Claudin 4的表达。