基于网络药理学探讨畲药十二时辰镇痛作用机制

目的 通过网络药理学方法探究畲药“十二时辰”镇痛作用的有效成分及可能的作用机制。方法 利用TCMSP数据库对十二时辰已知化学成分进行活性筛选并收集对应的相关靶点,利用GeneCards数据库和DisGeNET数据库收集疼痛相关靶点,利用Venny网站筛选出二者的交集基因,作为十二时辰镇痛作用的潜在靶点;利用Cytoscape软件构建活性成分-靶点网络、利用STRING数据库构建PPI网络、利用David 6.8数据库对十二时辰潜在靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析,利用Cytoscape软件构建十二时辰成分-靶点-信号通路网络。结果 网络分析确定十二时辰中11个化合物与24个靶点基因与镇痛作用有关,蛋白互作网络的核心基因是ACTB、NOS3、CASP3、PTGS2、RELA和PPARA,通过KEGG确定核心通路主要包括非酒精性脂肪肝、心肌细胞的肾上腺素能信号传导、流体剪切应力与动脉粥样硬化等。结论 十二时辰可能通过多靶点、多信号途径的相互作用对炎症、癌症引起的疼痛及神经性疼痛起到镇痛作用。可为下一步实验研究提供依据。

畲药十二时辰醇提物外用对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用研究

目的:探讨畲药“十二时辰”醇提物外用对类风湿性关节炎模型大鼠的治疗作用。方法:SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,高、低剂量十二时辰治疗组和阳性对照组。采用大鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂制作类风湿性关节炎模型,致炎后采用十二时辰醇提液浸泡涂抹方式给药,模型组及阳性对照组分别给予生理盐水或扶他林涂抹,持续给药28 d。于给药前和给药后每7 d测定足趾容积,给药结束,HE染色检测各组大鼠的组织病理学改变,Elisa方法测定血清IL-1β及RF含量。结果:模型组大鼠在各时间点的足趾肿胀度显著高于正常对照组(P<0.05),血清IL-1β及RF含量显著升高(P<0.01),足趾关节病理破坏明显;高剂量十二时辰醇提液外用可显著降低大鼠的足趾肿胀度(P<0.05),降低血清IL-1β及RF含量(P<0.01),改善关节病理损伤。结论:畲药十二时辰醇提液外用可降低佐剂性关节炎大鼠足肿胀,改善病理损伤,降低血清炎症因子IL-1β及RF含量。

绿花重瓣铁线莲愈伤组织诱导研究

以绿花重瓣铁线莲茎段为外植体,MS为基本培养基,研究了2,4-D与6-BA对绿花重瓣铁线莲愈伤组织诱导效应的影响。结果表明:2种生长调节剂单独使用时,均能诱导出愈伤组织,且2种愈伤组织诱导的部位及形态有明显的不同,2,4-D诱导的部位为茎段中部,愈伤组织白色膨松,6-BA诱导的部位为茎段顶端,愈伤组织浅绿色疏松;2,4-D与6-BA配合使用时,相互存在拮抗作用,不利于愈伤组织的诱导。

大孔吸附树脂纯化东北铁线莲总黄酮的工艺研究

目的筛选适合纯化东北铁线莲总黄酮的大孔吸附树脂工艺。方法采用静态吸附/解吸与动态吸附/解吸相结合的方法,以解吸率为主要指标考察各因素对东北铁线莲总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺的影响。结果 6种树脂中D-10l型大孔吸附树脂最适合纯化东北铁线莲总黄酮,其最佳工艺为:上样药液东北铁线莲总黄酮浓度相当于原生药0.2 g/ml,吸附速率为2 BV/h,解吸液乙醇浓度为95%,解吸速率为2 BV/h,最佳上柱药液pH值为4,洗脱剂用量为8倍柱体积。经大孔吸附树脂分离纯化后,东北铁线莲总黄酮的纯度由8.39%提高到24.66%。结论 D-10l型大孔吸附树脂对东北铁线莲总黄酮具有较好的纯化效果。

铁线莲组培快繁技术研究

[目的]研究不同激素浓度对铁线莲诱导、增殖和生根的影响,建立铁线莲组培快繁技术。[方法]以铁线莲茎段为外植体,在MS培养基中加入不同浓度的6-BA、NAA和IBA,研究不同激素浓度对其腋芽诱导分化、诱导芽增殖和继代苗生根的影响。[结果]铁线莲腋芽诱导效果以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为最佳;增殖培养以MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.50 mg/L为最佳;继代苗生根培养以MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 2.0 mg/L最佳。[结论]建立了铁线莲组培快繁技术体系,为其规模化生产提供理论依据。

铁线莲‘Avant-Garde’组织培养及快速繁殖试验

以铁线莲品种‘Avant-Garde’为材料,进行了植物组织培养和快速繁殖试验。通过比较试验发现,使用WPM作为基本培养基的效果优于MS培养基。在此基础上,采用全因子设计,研究不同质量浓度的植物生长调节剂对铁线莲具节茎段芽苗增殖和幼苗生根的影响,并对结果进行了方差分析和邓肯测验,发现较高质量浓度(≥2.0 mg/L)的6-BA会抑制芽苗的生长;幼苗生根率随着NAA质量浓度(0.05—0.15 mg/L)的升高而增加,随着IBA质量浓度(0.2—1.5 mg/L)的升高而减少。试验筛选得到芽增殖最佳培养基配方为WPM+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,增殖系数为2.83;最佳生根培养基配方为1/2 WPM+0.15 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA,生根率达到50%。

畲药十二时辰的生药鉴定

十二时辰是具福建民间特色的一味畲药,来源于毛茛科植物重瓣铁线莲Clematis florida var.plena的根。本文对十二时辰的植物形态、生药性状、组织构造、显微粉末特征进行观察,为该药的正确鉴别以及进一步研究、开发应用提供参考。

铁线莲总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的:探讨铁线莲总皂苷对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其机制。方法:Wistar大鼠随机分为6组:正常对照组,模型对照组,阳性对照组(吲哚美辛,10 mg獉kg-1),铁线莲总皂苷高、中、低剂量组,每组10只。用弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,观察药物对大鼠体质量和足爪肿胀度的影响;测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平,以及血清中炎症因子白介素-8(IL-8)、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:给药后第8天开始,与模型对照组相比,铁线莲总皂苷能有效缓解大鼠体质量变化,缓解大鼠的足爪肿胀度(P<0.05或P<0.01),高剂量铁线莲总皂苷与阳性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),低剂量组与高、中剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。铁线莲总皂苷各给药组均能在一定程度上影响AA大鼠血清中SOD、MDA、NO和GSH-PX水平,除铁线莲总皂苷低剂量组对NO指标影响不显著外,其余各组与模型对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中MDA、NO和GSH-PX水平在高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组相比,铁线莲总皂苷各组大鼠血清中IL-8和TNF-α含量显著降低,IL-10含量显著升高(P<0.05或P<0.01);高剂量组在调节IL-10和TNF-α的作用上与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05),其中IL-8和IL-10在高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:铁线莲总皂苷对AA具有良好的治疗作用,其机制可能与降低制脂质过氧化及抑制致炎因子有关。

不同肥料组合对铁线莲生长特性的影响

采用配施氮、磷、钾不同比例的复合肥,研究4个不同配比的肥料组合对铁线莲的叶片数、苗高、花蕾开放时间,花朵数、光合作用参数、光合色素含量等生长特性的影响,探寻最有利于铁线莲生长发育的肥料组合,为园林绿化服务。结果表明:肥料配比为N∶P2O5∶K2O=20∶10∶10的肥料组合对铁线莲生长发育的促进效果最明显,其茎粗、花朵数、净光合速率、Gs和Ci均显著高于其他处理,但叶片数量和光合色素含量较低,可在生产上推广。

6个铁线莲品种花粉保存方法

为了探究铁线莲花粉保存的最佳条件,研究比较了花粉采集时间(开花第1、2、3天)、干燥时间(12、24、48h)和保存温度(4、-20、-196℃)对花粉萌发率的影响。结果表明,花粉粒的平均直径均随着开花时间的延长而上升,且差异显著,其中‘蓝龙’花粉粒直径上升幅度最大为4.53μm,‘如梦’的上升幅度最小,为1.13μm。开花第2天采集的‘爱莎’、‘第一夫人’、‘冰美人’、‘亨利’和‘如梦’花粉萌发率最高,而开花第3天采集的‘蓝龙’花粉萌发率最高;‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’分别经过12~48h干燥后4℃保存的花粉相对存活率最高,分别为新鲜花粉的87.86%、71.27%和67.24%;‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’花粉干燥24h后-196℃保存的相对存活率最高,分别为新鲜花粉的59.65%、78.74%和69.33%。-20℃保存的铁线莲花粉相对存活率仅为0~56.85%。利用4和-196℃保存的花粉进行杂交验证试验,平均坐果率为70.7%~100%,初步明确了‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’花粉适合4℃保存,而‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’则适合液氮超低温保存,这为解决铁线莲品种间杂交的花期不遇问题奠定了基础。

铁线莲‘Blekitny Aniol’组织培养及再生体系建立

对铁线莲(Clematis florida‘Blekitny Aniol’)的带芽茎段进行诱导产生无菌苗,并对其叶片和茎段进行愈伤组织诱导成苗的分化研究,成功建立了铁线莲组织培养再生体系。结果表明,带芽茎段诱导腋芽最佳培养基为MS+1mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA,腋芽萌发率为100.0%;茎段诱导愈伤最适宜培养基为MS+2 mg·L^(-1)6-BA+0.01mg·L^(-1)NAA,诱导率为78.3%;叶片诱导愈伤组织最适宜的培养基为MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.1 mg·L^(-1)NAA,诱导率为81.7%;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA,分化率可达25.0%;最适宜不定芽的增殖培养基为1/2MS+3 mg·L^(-1)6-BA+0.1 mg·L^(-1)NAA,增殖倍数为4.94;筛选出最优的生根培养基组合为1/2MS+0.05 mg·L^(-1)NAA,生根率为70.2%。本研究将为铁线莲的推广应用提供参考,也为其他铁线莲属植物引种和开发利用奠定了基础。

铁线莲杂交与花期观赏

铁线莲花型、花色丰富多样,花朵美丽繁茂,花期长,观赏价值高。为培育优良特异种质,探索高效便捷的铁线莲人工杂交技术,从引进的20个园艺品种中选取9个作为杂交亲本,结果表明:23个杂交组合均结实,共获得304个果实,平均结实率为90.21%,最高为100%,最低仅为58.33%,杂交亲本选配对提高育种效率具有重要意义。引种的20个园艺品种花色、花型各异,分属早花大花型、晚花大花型、佛罗里达型、德克萨斯型4个类型,充分体现了铁线莲花的丰富多彩。

十二时辰软膏剂制备工艺研究

目的:研究十二时辰软膏剂的最佳制备方法,确定最佳基质处方、成型工艺条件。方法:以高温试验、低温试验、离心实验和外观性状为评价标准,比较不同基质的软膏剂处方的稳定性,选出最佳基质处方进行单因素考察,在此基础上采用Box-Behnken设计,选出最佳软膏基质配比;以药物与基质的不同比例制备药膏,确定十二时辰软膏剂的最佳含药量,并观察软膏剂的外观性状。结果:最佳基质配方为以聚山梨酯为乳化剂的O/W型基质,最佳基质的配比为单硬脂酸甘油酯:吐温-80:白凡士林(0.8∶4∶3)。最佳载药量为20%。结论:探讨了十二时辰软膏剂的初步成型工艺,为增加治疗糖尿病足的制剂品种提供了一定的研究基础。

基于网络药理学的畲药“十二时辰”治疗类风湿性关节炎的机制研究

目的:分析畲药"十二时辰"治疗类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的有效成分及可能作用机制。方法:通过文献挖掘并利用TCMSP等数据库获取畲药"十二时辰"的已知化学成分和相关靶点;将获得的靶点信息与Drug Bank数据库中抗RA药物靶点进行映射,分析药物治疗RA的可能性;利用Cytoscape软件分别构建"成分-靶点"网络和"十二时辰抗RA靶点-人体蛋白"蛋白质互作(PPI)网络,分析网络拓扑结构;利用David数据库进行GO富集和KEGG分析,分析药物治疗RA的可能分子机制。结果:畲药"十二时辰"含有油酸、棕榈酸、齐墩果酸、十五烷酸等潜在抗RA化合物,潜在抗RA关键靶点为前列腺素G/H合成酶1、2和凋亡调节因子Bcl-2等;GO结果提示其治疗RA的基因功能主要体现在炎症反应、凋亡过程负调节、NF-κB转录因子活性正调节、蛋白质同源二聚化活性等方面;KEGG结果暗示主要相关信号通路有TNF、PI3K-Akt、Rheumatoid arthritis、Toll样受体和MAPK等信号通路。结论:畲药"十二时辰"可能通过多靶点、多信号途径的相互作用,抑制成纤维样滑膜细胞的异常增殖,减轻炎症反应,发挥治疗RA的作用。

畲药“十二时辰”醇提液皮肤用药的毒性实验研究

目的观察畲药“十二时辰”醇提液皮肤用药的毒性作用,以初步评价其皮肤用药的安全性。方法采用新西兰家兔进行皮肤用药急性毒性实验及皮肤刺激性实验,用健康豚鼠进行皮肤过敏性实验。结果畲药“十二时辰”醇提液用于家兔皮肤未见急性毒性反应,无刺激性;用于豚鼠皮肤未见过敏反应。结论畲药“十二时辰”醇提液是较安全的皮肤外用药。

畲药十二时辰的质量标准研究

目的 建立畲药十二时辰的质量标准,为其质量控制和开发提供参考。方法 对十二时辰进行性状、显微特征、薄层色谱鉴别;参照《中华人民共和国药典》2020年版相关规定,对十二时辰水分、灰分、浸出物进行测定;以齐墩果酸为对照物质,采用高效液相色谱法对其含量进行检测。结果 十二时辰药材在性状、显微和TLC鉴别方面均有专属性特征;6批不同采收期的十二时辰水分平均值为11.79%,总灰分平均值为3.16%,酸不溶性灰分平均值为0.34%,热浸法水溶性浸出物含量为31.46%;含量测定齐墩果酸平均质量分数为1.72%。结论 该研究结果可为畲药十二时辰的质量标准的制定提供依据,暂定本品水分不得超过14.0%,总灰分不得超过4.00%,酸不溶性灰分不得超过0.40%,浸出物含量不得低于25.00%。

畲药十二时辰及其混淆品基原植物基因组DNA提取及鉴别

【目的】建立一种快速经济的提取畲药十二时辰基原植物基因组DNA的方法,实现通过分子生药学方法准确鉴别该中草药的真伪,为进一步开发应用该福建地区特色中草药奠定基础。【方法】采用CTAB法、改良CTAB法、试剂盒法、SDS法、高盐低pH法提取十二时辰基原植物叶片基因组DNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量和完整性,用优选后的方法提取其基因组DNA,与其混淆品DNA分别进行双向测序,评价该分子生药学方法的鉴别效果。【结果】改良CTAB法提取得到的DNA纯度较高,SSR引物扩增与ITS2序列扩增均可得到清晰明亮的条带,是提取畲药十二时辰基原植物基因组DNA的最佳方法。用该方法提取得到的基因组DNA经PCR扩增后的产物可用于双向测序,进而鉴别它的基源,实现与常见混淆品的准确区分。【结论】本研究建立的改良CTAB法能有效地提取畲药十二时辰的基因组DNA,方法操作简单、提取得到的DNA质量较好,可用于畲药十二时辰与其混淆品的分子生药学鉴别。

HPLC法测定畲药十二时辰中活性成分齐墩果酸的含量

目的:建立畲药十二时辰中齐墩果酸含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法,选用Lanbo-Kromasil-C-18色谱柱;以乙腈-水(86∶14)为流动相;检测波长205 nm,流速1.0 ml·min^(-1),柱温为25℃。结果:齐墩果酸在进样量0.52~15.60μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率为92.13%,RSD=3.0%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确、重复性好,可作为畲药十二时辰质量控制方法。

铁线莲属植物研究现状及其在园林方面的应用

铁线莲属植物在我国园林中有着十分重要的作用,本文从开发利用角度出发,探究当前我国铁线莲属植物繁育现状,并在此基础上对种质资源调查、系统分类学等进一步明确,以期能够通过园林应用研究为相关人员提供参考借鉴。

桂南地区铁线莲品种观赏性状综合评价

以11个铁线莲品种为研究对象,应用层次分析法对铁线莲11个观赏性状指标进行综合评价,利用KMeans聚类分析法建立评价体系,旨在构建铁线莲观赏性状的综合评价体系,探讨快速筛选出铁线莲品种的方法。结果表明:花朵褪色程度对铁线莲观赏性状的影响最大,其权重为0.3376;其次是花径大小,其权重为0.1773;花型对铁线莲观赏品质的影响居第3位,权重为0.1211;抗高温高湿和抗病性对铁线莲观赏品质的影响同居第4位,权重为0.0860。11种铁线莲聚类结果发现,优等级品种5个,占45.45%;良等级品种4个,占36.36%;差等级品种2个,占18.18%。此评价体系与实际生产情况相符,可应用于铁线莲品种的筛选评价和分级中。其中,波罗的海、吉泽拉、维辛斯基主教、东方晨曲、红衣主教为优等级品种,可直接推广应用于桂南地区生产中。