荧光显微技术在黎族药物大青鉴定中的应用

目的:探讨利用荧光显微技术对黎族药物大青进行显微鉴别的可行性,并为建立大青药物质量标准提供科学依据。方法:利用研究级正置荧光显微镜对未经试剂处理的大青茎粉末和新鲜叶片进行观察,并拍照。结果:大青茎粉末中主要含有3种类型的纤维,还含有木栓细胞、网状导管、方晶、腺毛和非腺毛、钟乳体,且图像清晰。更特别的是在表皮细胞中还含有铜钱状的物质及一圈荧光存在于皮层中。在叶片下表皮中气孔数较多,角质层细胞波纹状、还有钟乳体、2细胞的腺毛、非腺毛等结构。结论:利用荧光显微镜鉴别生药粉末,操作简便,图像直观,值得开发利用。在叶片鉴别方面角质层、腺毛等结构清晰可辩,可代替扫描电子显微镜,但是还需结合普通光学显微镜来确定气孔的类型。

大青、夹竹桃抗铅污染以及污染区植物种类的变化

采用原子分光光度法、对比盆栽实验方法等,进行了大青、夹竹桃在污染区野生状态下和人工盆栽实验状态下的抗铅性研究;同时比较了污染前、后污染区周围植被的消亡动态。结果表明,夹竹桃、大青有较高的抗铅性,其中夹竹桃效果更好;此外,天然植被中的红叶树、苦槠、商陆、乌蕨也有较强的抗铅污染能力。

马蓝与路边青的matK序列差异与分子鉴定方法分析

目的：研究拟基于mat K序列分析,探讨马蓝与路边青相互鉴别的新方法。方法：从Gen Bank核酸数据库下载马蓝与路边青mat K序列,应用Clustal X 2.1软件进行SNP鉴别位点分析,应用MEGA5.0软件计算种内和种间的（K2P）遗传距离,并构建邻接（NJ）系统聚类树。结果：获得8个马蓝mat K序列及12个路边青mat K序列,分析显示马蓝与路边青的mat K序列具有近百个SNP位点,且其中多是马蓝与路边青特有的,可作为二者间相互鉴别的分子标记。且马蓝的最大种内K2P遗传距离0.001与路边青最大种内K2P遗传距离0.005均远远小于马蓝与路边青的种间K2P遗传距离0.144-0.149,构建的系统发育树显示马蓝与路边青单独聚为一类。结论：mat K序列可为马蓝与路边青的相互鉴别提供新的分子鉴定方法。

黔产大青化学成分及其抗菌活性研究

大青(Clerodendrum cyrtophyllum)是苗族地区常用的药用植物。为研究黔产大青的化学成分及其抗菌活性,该研究采用大孔吸附树脂、反相柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备高效液相色谱等方法对大青95%乙醇提取物进行分离和纯化,并根据波谱数据鉴定所得化合物结构,采用MTT法评价其抗菌活性。结果表明:从大青中分离得到18个化合物,分别鉴定为木栓酮(1)、α-amyrin palmitate(2)、sambuculin A(3)、22-dehydroclerosterol(4)、isopetasin(5)、taraxasteryl palmitate(6)、豆甾醇(7)、22-dehydroclerosterol-3-O-β-D-(6′-O-margaroyl)-glucopyranoside(8)、3-O-β-D-galactopyranosyl-(24β)-ethylcholesta-5,22,25-trien(9)、肉苁蓉苷D(10)、tortoside F(11)、balanophonin(12)、木犀草苷(13)、类叶升麻苷(14)、木犀草素(15)、acantrifoside E(16)、trichotomside B(17)、肉苁蓉苷C(18),其中化合物2、3、5、6、8-13、16-18均为首次从大青中分离得到。活性测试结果表明,化合物13对乳房链球菌有一定的抑制作用。该研究丰富了大青化学成分,为其在抗奶牛乳房炎药物的研发提供了参考。

南大青叶及其混伪品生药学研究

【目的】对市售南大青叶及其常见混伪品进行鉴别,为南大青叶药材及其中药制剂质量控制提供参考。【方法】采集南大青叶药材(野生及栽培品)及其混伪品球花马蓝叶、广西马蓝叶、路边青叶,采用性状、半显微、显微鉴定方法对其进行鉴别。【结果】南大青叶正品与混伪品在性状鉴别上的差异,主要在于叶形、叶片和叶柄的长度、叶肉颜色、叶尖端、叶缘、上下表面覆盖物及气味等;在半显微鉴别上的区别,主要在于叶柄、主脉、侧脉和叶肉上的毛茸特点及叶肉上是否能看到钟乳体等;而显微鉴别特征主要在于上下表皮细胞形状、气孔轴式、腺鳞、非腺毛及结晶的类型等。【结论】性状鉴定、半显微鉴定及显微鉴定法相结合可准确鉴别、区分南大青叶及其混伪品,为南大青叶的鉴别提供理论依据。

大青叶提取物对HepG2细胞酒精性损伤的保护作用

以大青(Clerodendrum cyrtophyllum Turcz)叶乙醇提取物和石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相分级萃取物为研究对象,探讨其对肝细胞酒精性损伤的保护作用。采用酒精诱导人肝癌细胞(HepG2)氧化应激建立酒精性肝细胞损伤模型,通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度大青叶醇提物和五相萃取物预处理对HepG2细胞酒精性损伤后存活率的影响,以2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(2,7-dichlorofuorescin diacetate,DCFH-DA)探针法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,二硫代二硝基苯甲酸[5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),DTNB]法检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,水溶性四唑盐(water-soluble tetrazolium,WST)法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果显示,大青叶醇提物和乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物可以明显提高HepG2细胞酒精性损伤后的存活率,通过抵御细胞内ROS生成,降低MDA浓度的方式对细胞进行保护,通过提高细胞内抗氧化物GSH含量和抗氧化酶SOD活力来恢复细胞抗氧化能力,石油醚相和二氯甲烷相无明显作用效果。综上,大青叶醇提物能够抵御HepG2细胞的酒精性损伤,具有护肝功能性食品应用研究价值;乙酸乙酯相、正丁醇相、水相是其有效部位,尤其是乙酸乙酯相,可以作为大青叶中天然抗氧化剂的主要研究对象。

黔产大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分的提取工艺及抗氧化活性研究

试验旨在优化黔产大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分——类叶升麻苷及木樨草苷的提取工艺,并研究其抗氧化活性。在单因素试验的基础上,结合Box-Behnken响应面法以类叶升麻苷与木樨草苷得率的总评"归一值"为指标,优化提取工艺;测定其对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基的清除能力。结果显示,最佳提取工艺条件为粒度目数100目、乙醇浓度62%、液料比22 mL/g、提取3次、提取时间1.5 h、提取温度83℃。此条件下,类叶升麻苷与木樨草苷得率分别为9.62、2.25 mg/g;两者对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基具有一定的清除能力。研究表明,提取工艺优化后大青木中潜在抗奶牛乳房炎活性组分得率较高,具有较好的抗氧化活性,可为后续抗奶牛乳房炎的饲料添加剂研发提供参考。

UPLC-Q-TOF-MS联合UNIFI筛查平台快速分析湘产大青叶化学成分

目的:对湘产大青叶正丁醇提取物的化学成分进行快速定性分析。方法:采用超高液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术结合UNIFI筛查平台得到初筛化合物,结合质谱数据及文献数据对其进行验证。结果:共鉴定了32个化合物,其中黄酮类成分9个、甾体类及萜类成分7个、苯乙醇类成分3个、其他类成分13个。结论:该研究为湘产大青叶质量控制标准提升奠定了基础。

马蓝叶与混淆品路边青叶的脉末梢显微鉴别特征

目的:寻找马蓝叶与其混淆品路边青叶之间的鉴别特征,建立有效的鉴别方法。方法:采用显微鉴别法。结果:马蓝叶的脉末梢多数不分支,少数1～3分支;宽度为1～3列管胞,多数为1列管胞;少数末端膨大。路边青叶脉末梢分支或不分支,分支者多数为1～2次分支,少数为3～4次分支;宽度为1～5列管胞,多数宽为2～3列管胞;末端常稍膨大。两者的特征受物候期差异、产地差异因素影响不明显。结论:马蓝叶与路边青叶的脉末梢特征区别明显、稳定,可作为区别两者的鉴别特征,提出的鉴别方法操作简便、快速、价廉。

湘产大青叶(栽培品)形态解剖学研究

目的:研究湘产大青叶(栽培品)解剖形态,为其质量控制提供科学依据。方法:按照生药学常规方法对湘产大青叶(栽培品)进行形态解剖学研究。结果:找出了湘产大青叶(栽培品)药材性状和显微特征上的主要鉴别特征。结论:此研究可作为湘产大青叶(栽培品)的鉴定依据。